一、深低温保存骨髓细胞及其移植效果（论文文献综述）
郑洋洋[1]（2021）在《可注射人脱细胞脂肪组织基质匀浆填充材料的制备与应用》文中进行了进一步梳理目的:1.制备人脂肪组织脱细胞基质（DAT）并初步检测其脱细胞效果;2.通过自主研发的可控温软组织匀浆装置,制备出可顺利通过27G针头的注射型DAT匀浆;3.对DAT匀浆进行肉眼、扫描电镜（SEM）观察并探讨DAT匀浆培养下ADSCs粘附率及增殖情况;4.将DAT匀浆、DAT匀浆+ADSCs、颗粒脂肪分别注射入大鼠背部,对比这三组的填充效果、血管数量、炎症浸润情况。方法:1.取正常脂肪组织经反复冻融、酶消化、有机溶剂提取脂质等处理制备脂肪组织脱细胞基质。肉眼观察基质性状,行HE、Masson以及DAPI荧光染色观察脱细胞效果;2.按照前期探索的匀浆适宜条件:VDAT:V生理盐水=1:12,转速8000r,匀浆时间10min,制备可通过27G针头的DAT匀浆并用扫描电镜观察DAT匀浆显微结构;3.取第3代人ADSCs与DAT匀浆复合培养,观察其细胞黏附能力以及用CCK8检测细胞增殖活性;4.取清洁级雄性Wistar大鼠20只,将0.5ml DAT匀浆、DAT匀浆+ADSCs、颗粒脂肪分别注射至大鼠背部脊柱两旁对称部位。分别于移植后第1、2、4、8w取材,大体观察其标本情况、用排水法测量其填充物体积,显微镜下观察其血管数量并统计,使用Image-Pro Plus测量CD68免疫组化切片的平均光密度来反应炎症浸润情况并观察其有无脂肪细胞生成,所统计的数据均使用SPSS26.0软件进行数据分析。结果:1.DAT呈乳白色、结构疏松,表面非常光滑,有一定光泽和弹性;HE、Masson染色未见明显脂肪细胞结构,可见排列紧密的基质蛋白;DAPI荧光染色未见明显阳性细胞核,证明脂肪组织脱细胞彻底;2.DAT经过匀浆机在8000r10min的特定条件下进行处理后,变成白色不透明匀浆,并顺利通过27G针头,扫描电镜观察DAT匀浆呈多孔样结构,遍布纵横交错的基质蛋白,其粒径大小约为（749.91±136.79）nm。3.测得ADSCs在匀浆中的黏附率为（92.16±1.00）%;细胞与DAT匀浆复合培养后,CCK-8检测显示随时间延长OD值不断升高,细胞生长情况良好,匀浆对细胞无毒性;4.将颗粒脂肪、DAT匀浆、DAT匀浆+ADSCs分别注入大鼠背部,分别于1、2、4、8w取材,通过排水法测量体积发现,DAT匀浆、DAT匀浆+ADSCs的填充效果好于颗粒脂肪组,移植后第8w DAT匀浆、DAT匀浆+ADSCs的体积分别与颗粒脂肪组间具有明显的统计学差异（P值均<0.05）。三组移植物注射到大鼠背部后,移植物表面均形成薄膜,薄膜表面有新生血管。染色结果提示移植物注射到大鼠背部后,均有不同程度的炎症细胞浸润,血管形成,随着移植时间的延长,纤维化程度加重,颗粒脂肪组有大量脂肪细胞坏死融合,形成油囊,而DAT匀浆、DAT匀浆+ADSCs未见明显降解,并有部分脂肪细胞生成。CD31染色结果提示三组移植物血管数量随着移植时间延长均呈现先上升后下降的趋势,但DAT匀浆组及DAT匀浆+ADSCs组均高于颗粒脂肪组,并具有统计学意义（P<0.01）。CD68染色结果提示三组移植物注射入大鼠背部后均产生不同程度的炎症反应,并随着移植时间的延长炎症反应逐渐降低,但DAT匀浆组及DAT匀浆+ADSCs组均低于颗粒脂肪组。结论:1.利用脱细胞技术,可以成功将脂肪组织制备成脱细胞脂肪组织基质;2.使用自主研发的匀浆装置,设定特定的条件,可以将DAT制备成为通过27G针头的DAT匀浆;3.DAT匀浆具有良好的生物相容性,ADSCs在DAT匀浆上增殖、黏附良好;4.DAT匀浆具有填充优势,其单纯匀浆或是带有ADSCs的混合匀浆,炎症反应均相对于颗粒脂肪组较轻,形成的血管数量较多,并有脂肪细胞生成,填充效果均好于颗粒脂肪填充。
刘敏[2]（2020）在《两性离子分子对细胞超低温冻存保护的研究》文中提出活细胞是细胞治疗、组织工程等重要技术的核心因素,而在一定时间内维持细胞的活性与功能,即细胞保存,已成为这些技术的关键支撑。超低温冻存是最可靠的细胞保存方法之一,但当前最常用的冻存保护剂二甲基亚砜（DMSO）具有毒性,应用于临床易引起病人诸多不良反应。本论文针对降温过程中冰晶导致细胞遭受冷冻损伤的科学问题,设计开发出基于两性离子分子的多种新型高效、生物相容性良好的冻存保护剂组合物,并系统考察了它们对细胞冷冻损伤的保护能力,实现了人体细胞的无DMSO超低温冻存。软骨细胞的有效保存是软骨组织工程技术的有力支撑。为此,本文首先利用可进入细胞调节渗透压的两性离子小分子甜菜碱作为胞内保护剂,结合设计合成两性离子聚磺基甜菜碱甲基丙烯酸酯（PSBMA）或聚羟基甜菜碱丙烯酸甲酯（PCBMA）作为胞外保护剂。系统性研究与评价它们的细胞渗透压平衡能力、抑制冰结晶能力以及细胞毒性。优选出最佳配比的两性离子组合物超低温冻存人软骨细胞,结果表明,细胞复苏存活率高达90%,并验证了两性离子组合物对细胞无毒性,显着优于DMSO。针对当前细胞冷冻复苏后需复杂保护剂洗脱程序、导致样本污染风险的问题,本文设计合成了具有上临界溶液溶解温度（UCST）与下临界溶液溶解温度（LCST）双温敏性质的两性离子聚合物聚（磺基甜菜碱甲基丙烯酸酯-N-异丙基丙烯酰胺）poly（SBMA-co-NIPAAm）,实现聚合物在UCST（冰点温度0℃）以下及LCST（生理温度37℃）以上相变形成凝胶态。结果表明,在冰点温度下,聚合物相变可有效抑制冰晶的形成,降低胞外冰晶损伤。结合两性离子小分子甜菜碱作为胞内保护剂,人体细胞GLC-82超低温冻存复苏存活率高达96%。复苏至生理温度后,聚合物相变形成凝胶包埋细胞,无需保护剂洗脱操作,可有望直接应用于组织工程领域。本文基于两性离子分子开发出了新型生物相容性良好且高效的细胞冻存保护剂组合物,为基于活细胞的组织工程、细胞治疗提供有力支持。
黄桢雅[3]（2019）在《冻存脂肪生物学性状改变及移植后存活率检测的基础研究》文中提出研究背景及目的:自体脂肪移植技术在整形外科领域应用广泛,将一次获取的大量脂肪冷冻保存以备多次治疗,这在节约时间、精力、成本和减少临床并发症方面具有很大的优势。但冻存脂肪的生物学活性和临床应用的安全性一直以来备受争议。以往的大量研究显示出不尽相同的研究结果。目前为止,脂肪组织的低温冻存方法并未形成一个标准化的方案。从脂肪组织获取、纯化、冻存方法,至注射方式、注射量、实验室检测方法等,这些环节的任一差异都可能对移植结局产生影响。本研究的目的是,通过观察不同冻存时间的脂肪组织的生物学活性变化及移植后移植物的存活率,评估冻存脂肪临床使用的生物学价值。以期为低温保存脂肪组织方法的进一步优化和临床应用冻存脂肪提供相关的实验依据和理论参考。方法:第一部分,将吸脂获得的脂肪组织颗粒纯化后低温（-80℃）保存,1周、4周、8周、12周、16周、20周、24周后,对新鲜脂肪和复温后的脂肪进行:大体形态观察、HE染色组织学观察、免疫荧光染色分析活细胞面积比、CCK-8法活性检测、SVF细胞培养,综合评估冻存脂肪组织颗粒生物学活性变化。第二部分,选取SPF级BALB/c-nu裸鼠（雌性）32只,随机分为新鲜对照组、1周组、4周组、8周组、12周组、16周组、20周组、24周组,每组4只。将新鲜脂肪及各组冻存脂肪复温后注射至裸鼠背部皮下,每处注射体积约为0.2ml,8周后收获脂肪移植物。对移植物进行:大体形态观察及留存率分析、石蜡切片HE染色组织学评估、免疫荧光染色分析植入分数（存活率）。结果:随冻存时间的延长,脂肪组织的结构完整性及生物学活性逐步下降;1周组脂肪活细胞面积、脂肪细胞线粒体活性较新鲜脂肪均显着减少（P<0.01）,4周组较1周组明显减少（P<0.05）,但其余相邻两组间无显着性差异;冻存脂肪来源的贴壁细胞数量较新鲜脂肪显着减少（P<0.01）;在冻存早期（1周组、4周组）,脂肪组织生物学活性的降低早于其形态学改变。随冻存时间的延长,移植后的移植物留存率、组织学评分、植入分数（存活率）逐步下降;1周组、4周组较新鲜对照组下降显着（P<0.01）,1周组、4周组间的差异明显（P<0.05）,其余相邻各组间无显着性差异;冷冻脂肪组织移植后成活率低于移植物留存率。结论:冻存脂肪的生物学活性降低早于其形态学改变;大多数脂肪细胞在一次冷冻保存过程中便失活,而与冻存时间长短的相关性并不明显;从冷冻脂肪中可分离提取到贴壁细胞,但数量非常有限;冷冻脂肪的移植物大多保留为油囊肿、纤维组织或坏死组织,存在发生严重临床并发症的风险;不添加冷冻保护剂直接冻存的脂肪组织,临床价值有限,不推荐临床使用。
魏国茜[4]（2017）在《不同冻存条件对人颗粒脂肪活性影响的实验研究》文中研究表明目的:探索不同冻存条件对人颗粒脂肪活力的影响,寻求更为满意的颗粒脂肪冻存条件,为临床自体脂肪移植提供理论依据。方法:常规方法收集41例自体脂肪移植求美者大腿内侧颗粒脂肪标本,经生理盐水漂洗2次静置分离后加入相应留存脂肪量等体积的含60%小牛血清+25%DMEM高糖培养基（Dulbecco Modified Eagle Medium,伯克改良伊格尔培养基）+15%DMSO（Dimethyl sulfoxide,二甲基亚砜）低温冻存保护液冻存。将所获脂肪标本一式三份,按照-20℃（普通冰箱）、-80℃（深低温冰箱）和-196℃（液氮）3种不同条件下冻存。选择冻存3个月和6个月的标本复温,通过苏木精-伊红（HE）染色观察脂肪细胞形态、台盼蓝染色法分析脂肪细胞存活率、肌酸激酶测定酶活力、免疫组化CD105检测脂肪干细胞数量,比较三种冻存温度下冻存3个月及6个月后脂肪细胞活力变化情况。应用经三种温度冻存6个月后的颗粒脂肪组织进行裸鼠体内移植建模,于6只裸鼠背部皮下进行注射移植,4周后取出,测量体积、HE染色及透射电镜观察并比较移植后脂肪组织的成活及血管化情况。所有数据均采用SPSS17.0统计包进行数据处理及分析。结果:1.体外检测脂肪细胞活力:（1）台盼蓝染色法脂肪细胞计数分析脂肪细胞存活率,-20℃、-80℃、-196℃三种温度下冻存3个月后的脂肪细胞存活率分别是18.79±2.51%、86.21±1.51%、90.05±2.77%;冻存6个月后分别是8.67±1.83%、81.34±2.39%、89.31±2.65%,三组组间比较Ρ值均<0.05,差异有统计学意义。在同一冻存时间下,-20℃、-80℃及-196℃各组的脂肪细胞存活率逐渐升高,-196℃温度冻存后存活的脂肪细胞数量最多,-20℃温度下冻存后存活脂肪细胞数量最少（Ρ<0.05）。在同一冻存温度下,-20℃及-80℃冻存3个月组的脂肪细胞存活率明显高于6个月组,-196℃下两组冻存时间无显着性差异（Ρ>0.05）。（2）肌酸激酶测定,-20℃、-80℃、-196℃三种温度下冻存3个月后的OD值是0.042±0.003、0.072±0.002、0.081±0.002;冻存6个月后分别是0.038±0.002、0.063±0.002、0.079±0.003,三组组间比较Ρ值均<0.05,差异有统计学意义。相同温度下,-20℃和-80℃冻存3个月的酶活力高于冻存6个月（Ρ<0.05）,-196℃冻存温度下,3个月及6个月无差异（Ρ>0.05）;相同冻存时间下,-196℃组酶活力最高,-80℃组次之,-20℃组最低（Ρ<0.05）。（3）各组HE染色显微镜下比较脂肪细胞形态发现,-20℃条件下冻存3个月组细胞膜破裂严重,网状连接部分中断,偶可见细胞核存在;而6个月组细胞膜破裂更加严重,网状连接中断,细胞核几乎消失,且存在较多坏死区及囊腔和空泡;-80℃组两段时间较-20℃组明显改善;-196℃条件下冻存3个月及6个月两组间脂肪细胞形态基本保持正常,冻存后基本未受损伤。各组经免疫组化CD105染色后,-20℃组未见ADSCs,在-80℃组及-196℃组仅见少数ADSCs。2.颗粒脂肪裸鼠移植建模:注射移植冻存颗粒脂肪于裸鼠背部皮下,4周后取出,经-20℃、-80℃及-196℃三种温度冻存6个月的颗粒脂肪移植后体积减少率分别为90%、65%、55%。HE染色形态学观察发现,-20℃组脂肪细胞形态尚可,网状纤维欠发达,仍可见细胞膜破裂情况,其余两组存活状况良好,可见完整脂肪小叶结构,细胞形态逐渐趋于稳定,部分血管长入。透射电镜观察冻存脂肪移植4周后细胞超微结构,-20℃组含较多新生脂肪细胞,-80℃及-196℃组脂肪细胞更加成熟,-196℃组已可见成熟脂肪细胞轮廓,并且在脂肪细胞周围长入的新生毛细血管数量最多。结论:1、使用经冻存的颗粒脂肪组织进行移植具可行性。2、-196℃冻存组脂肪细胞活性优于-80℃及-20℃冻存组。3、-196℃下可冻存6个月,甚至更长时间,是较理想的冻存温度。-80℃冻存6个月后脂肪细胞活力不及冻存3个月时,可用于短期保存。不建议选择-20℃进行冻存。
曹法民[5]（2016）在《不同培养液保存兔骨软骨组织效果的实验研究》文中研究指明目的将兔膝骨软骨组织采用Tsmu-A培养液和Tsmu-B培养液保存35天,根据软骨细胞存活率和组织学结果等指标在体外初步比较两种培养液的保存效果,然后将保存后的骨软骨组织移植到兔膝骨软骨缺损处,术后6个月内,根据术膝关节功能、影像学,移植物软骨细胞存活率、组织学、生物力学和免疫学等结果,最终筛选出一种较好的骨软骨组织培养液。方法1.体外实验以新西兰大白兔膝关节骨软骨组织为研究标本,在无菌条件下,从内外侧股骨髁关节面负重区用ARTHREX骨软骨移植器械获取直径约6mm,骨及所带软骨下骨全长约5mm的骨软骨柱120枚,随机均分为4组。分别为Fresh组:新鲜;Tsmu-A组:Tsmu-A液4℃隔日换液培养;Tsmu-B组:Tsmu-B液4℃隔日换液培养;Basic组:基础培养液4℃隔日换液培养,除新鲜组外,余组保存35天后进行检测,检测项目包括FDA-EB双荧光染色、H&E染色、番红O-快绿染色、甲苯胺蓝染色、阿尔新蓝染色、2型胶原免疫组化染色以及含水率;通过分析和比较各组软骨细胞存活率,Makin评分,蛋白多糖、酸性黏多糖、2型胶原含量以及含水率,初步比较两种培养液的保存效果。2.体内动物实验通过动物体内植入实验最终筛选出较佳的培养液。根据上述取材和方法,取24枚兔膝骨软骨组织随机分配为3组,每组8枚,分别为Tsmu-A组:Tsmu-A液4℃隔日换液培养35天,Tmsu-B组:Tsmu-B液4℃隔日换液培养35天,Fresh组:新鲜。在兔左膝股骨滑车软骨面造成5mm x 5mm大小的单个骨软骨缺损,之后将各组6mm x 5mm大小骨软骨组织采用镶嵌移植技术填充到缺损处,另设阴性对照组（Negative组）和假手术组（Sham组）,共计5组40只兔膝。术前检测各组兔膝关节活动度（ROM）;术后2周时,对术膝行X线和MRI检测;术后6个月,观察动物一般状态,检测术膝X线、MRI和ROM,将动物处死后,对术膝关节进行大体观察,取出骨软骨移植物后再进行如下检测:FDA-EB双荧光法测细胞存活率、H&E染色、番红O-快绿染色、甲苯胺蓝染色、阿尔新蓝染色、2型胶原免疫组化染色、含水率检测、应力-应变测试以及血清免疫学检测,通过观察和比较各组动物间的ROM、影像学指标、软骨细胞存活率、Makin评分、组织活性、应力-应变关系以及IL-6水平,最终筛选出较佳的骨软骨组织体外保存液体。结果1.体外实验（1）细胞存活率变化:在保存35天时,各保存组与新鲜组比较,细胞存活率均明显降低,各组间比较均有统计学意义（P<0.05）;Tsmu-B组细胞存活率超过70%,而Tsmu-A组尚不及60%。（2）组织学变化:在保存35天时,各保存组Makin评分均高于新鲜组,蛋白多糖含量均较新鲜组少,各组间比较均有统计学意义（P<0.05）;Tsmu-B组比其他保存组Makin评分值和蛋白多糖减少量要小,保存效果最好。各保存组酸性黏多糖和二型胶原含量均较新鲜组少,Tsmu-B组和Tsmu-A组酸型黏多糖和二型胶原含量之间均有统计学意义（P<0.05）,且Tsmu-B组高于Tsmu-A组。（3）含水率变化:在保存35天时,各保存组含水率均高于新鲜组,各组间比较均有统计学意义（P<0.05）;Tsmu-B组含水率增加最少,Tsmu-A组比Tsmu-B组增加明显。因此,说明Tsmu-B组液体体外保存效果较好。2.体内动物实验（1）一般状态和关节活动度变化:术后6个月,各移植组动物关节形态和功能均发生了不同程度的变化;Tsmu-A、Tsmu-B组关节活动度均小于新鲜移植组和阳性对照组,且Tsmu-A和Tsmu-B组之间比较均有统计学差异（P<0.05）。（2）影像学变化:2周时骨软骨移植物位于移植缺损处,无脱落,关节复位良好,说明移植手术无问题;6个月时,各移植组软骨下骨均有愈合倾向,移植软骨与宿主软骨之间存在不同程度的间隙,信号强度存在差异;Tsmu-B组修复效果较好。（3）大体观察结果:术后6个月,Tsmu-A、Tsmu-B组大体评分均较新鲜对照组小,且组间比较均有统计学意义（P<0.05）;Tsmu-B组评分值较小,Tsmu-A组评分较高,说明Tsmu-B组大体观察效果最好。（4）细胞存活率变化:术后6个月,各移植组细胞存活率均低于移植前,且低于术后新鲜组,术后各组间比较均有统计学意义（P<0.05）;Tsmu-A、Tsmu-B组细胞存活率分别为17.22±2.56%、49.34±3.29%,均低于70%;但Tsmu-B组存活率相对较高。（5）组织学变化:术后6个月,各移植组软骨与宿主软骨之间均存在不同程度裂隙,Tsmu-B、Fresh组裂隙不明显,Tsmu-A组较明显。Tsmu-A、Tsmu-B两组之间Makin评分具有统计学意义（P<0.05）,且Tsmu-B组评分值较低。Tsmu-A、Tsmu-B两组中蛋白多糖、酸性黏多糖及二型胶原含量均较移植前和新鲜组少,两组间各成分比较均有统计学意义（P<0.05）且Tsmu-B组含量较高。（6）生物力学变化:术后6个月,Tsmu-A、Tsmu-B两组杨氏模量和含水率均小于新鲜组,且两组间比较均有统计学意义（P<0.05）;Tsmu-B组杨氏模量和含水率值更接近新鲜移植,其移植效果更好。（7）免疫学检测:术后6个月,Tsmu-A和Tsmu-B两组之间IL-6水平均小于新鲜组,且两组之间比较无统计学差异（P>0.05）。结论1.使用Tsmu-B培养液能够更好地保存骨软骨组织,获得更好的移植效果。2.组织液体培养保存骨软骨组织可能会降低移植后的排斥反应。意义本课题通过动物体内外实验,探究两种不同培养液对骨软骨组织的保存效果,依据多种评估标准进行科学比较,最终筛选出一种较佳的骨软骨组织体外培养液,延长了异体骨软骨组织体外保存时间,为我国骨软骨组织库的建立和发展奠定了基础。
刘华蔚[6]（2014）在《面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究》文中提出第一部分、壳聚糖导管预防周围神经瘢痕的实验研究实验一壳聚糖导管预防兔面神经周瘢痕的实验研究目的：周围神经解剖性损伤后，神经周瘢痕的形成会压迫神经，阻碍轴突的再生，影响神经功能的恢复。应用可生物降解的壳聚糖导管作为物理屏障，观察其对兔面神经周瘢痕及神经内血运的影响。方法：新西兰大白兔36只，行腮腺大部切除，面神经解剖性损伤造模。随机分为覆盖组、包裹组、自体对照组。于术后4、12周采用Petersen分级评估面神经与周围组织粘连情况，采用组织学染色方法检测面神经周瘢痕及神经内血管密度，并采用触须运动、透射电镜、神经电生理等方法对面神经功能进行评估。结果：术后4周时petersen评分无明显差异（P>0.05），12周时瘢痕粘连较明显，覆盖组与包裹组解剖时较自体对照组容易（P<0.01）；术后4周覆盖组有髓神经纤维直径、髓鞘厚度、神经纤维数量均优于包裹组及对照组，具有统计学意义（p<0.05）；术后4、12周对照组胶原厚度大于覆盖组与包裹组，差异有统计学意义（P<0.01）；术后12周覆盖组与自体对照组两者纤维直径较接近，排列均整齐，髓鞘壁较厚，两组间无明显差异（P>0.05），包裹组纤维直径、髓鞘壁厚度、神经内血管密度均较小，与前两者存在显着性差异，具有统计学意义（p<0.05）。结论：壳聚糖导管作为物理屏障覆盖于面神经表面可有效减少神经周瘢痕的形成、减轻瘢痕对面神经功能的影响。实验二、壳聚糖导管复合透明质酸预防大鼠坐骨神经瘢痕的实验研究目的：观察将壳聚糖导管与透明质酸联合应用对大鼠坐骨神经1cm钳夹性损伤后神经功能的影响。方法：选用清洁级健康成年SD大鼠60只，坐骨神经钳夹损伤造模，随机分为覆盖组、覆盖+透明质酸组、钳夹组、钳夹+透明质酸组，每组15只。于术后4、8、12周对坐骨神经与周围组织粘连、神经周瘢痕增生情况进行观察，并对神经功能进行坐骨神经功能指数、组织学和神经电生理检测。结果：术后4周时坐骨神经功能指数、petersen评分、神经纤维计数、髓鞘厚度、有髓神经纤维平均直径各组间均无明显差异；术后8周、12周时，钳夹+透明质酸组其坐骨神经功能指数、petersen评分、神经纤维计数、髓鞘厚度、有髓神经纤维平均直径等各项指标均优于对照组。术后4、8、12周时神经外膜胶原厚度检测各组均明显低于对照组，差异有统计学意义（p<0.01），12周时HA组神经外膜胶原厚度要厚于壳聚糖组及壳聚糖+HA组，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：壳聚糖导管复合透明质酸可以促进鼠坐骨神经钳夹损伤的恢复，减少其神经周瘢痕的产生。实验三、壳聚糖导管植入对腮腺术后面神经功能恢复的临床效果观察目的：观察并比较壳聚糖导管应用于腮腺手术后对术后患者面神经功能恢复的影响。方法：75例腮腺肿瘤患者接受腮腺浅叶摘除术或腮腺全切手术，分为两组，一组应用壳聚糖导管覆盖面神经总干及各分支，一组为常规手术作为对照。在手术后7天、1月、3月、6月和9月分别进行超声检查和血常规检查并按HB标准观察面神经功能。结果：随访时间9月-50月，平均21.7月，75名患者中50名行腮腺浅叶摘除，25名行腮腺全切术，手术后不同时间的血常规检及超声查显示无论是应用壳聚糖组还对照组，患者均无异常，表明壳聚糖导管植入体内后不会引起不良反应。术后7天即刻面瘫发生率壳聚糖组（29/32，90.6%），对照组（39/43,90.7%）；永久性面瘫发生率面瘫发生率壳聚糖组（0/32，0%），对照组（2/43,4.7%）均无统计学差异（P>0.05）。术后7天对两组患者面神经功能行HB评分，结果两组患者面神经麻痹严重程度无显着性差异（P>0.05）。对患者面神经恢复速度进行检测，发现壳聚糖组神经恢复速度快于对照组，差异有显着性意义（P<0.01）。结论：壳聚糖导管具有良好的生物相容性，植入体内无不良反应，在腮腺手术后应用壳聚糖导管覆盖面神经对其功能恢复有一定促进作用。第二部分GDNF基因慢病毒载体的构建、病毒的包装及MSCs细胞的转染目的：构建携带EGFP和GDNF的慢病毒载体，利用其转染MSCs并对其进行鉴定，获得可稳定过表达GDNF的MSCs。方法：通过PCR扩增，BamHI和AscI双酶酶切目的基因片段， T4DNA连接酶连接,将目的基因GDNF插入慢病毒载体pLenti6.3MCSIRES2-EGFP,构建重组慢病毒。在lipofectamine2000介导下将构建成功的慢病毒转染人胚肾细胞系（293T），包装生产慢病毒,并测定病毒滴度。将包装好的慢病毒感染BMSCs,并对转染的细胞行病毒转染复数（MOI值）测定，筛选最佳感染复数。Western、RT-PCR分别检测转然后GDNF蛋白和mRNA的表达情况，流式细胞仪观察转染效率。结果：成功构建携带EGFP和GDNF的慢病毒，慢病毒转染MSCs后96小时强荧光表达，当MOI值为25时细胞荧光表达强且活性较好。Western和RT-PCR检测证实GDNF在MSCs中成功表达，流式细胞仪观察转染效率为94.2%。结论：成功将携带EGFP和GDNF的慢病毒转染MSCs，获得过表达GDNF基因的MSCs，为后期实验提供基础。第三部分、脱细胞神经复合GDNF转染的间充质干细胞修复兔面神经缺损的实验研究实验一、周围神经脱细胞方法的筛选目的：采用不同的方法对兔面神经进行脱细胞处理，对脱细胞神经组织学及体内植入进行检测，为面神经脱细胞方法的选择提供实验依据。方法：分别采用冻融法、化学法及冻融+酶消化法处理兔面神经，对处理的神经进行HE染色、扫描电镜观察和透射电镜观察其组织学结构；并将不同方法处理的神经进行兔背部皮下植入，于2、4周处死动物，行大体观察及组织学观察。结果：组织学观察见化学法（Hudson法）、冻融+酶消化法处理的神经其髓鞘清除较彻底，只有部分区域可见极少量髓鞘残留，冻融法处理的神经内可见髓鞘皱缩、变形但有较多残留。皮下埋植实验观察见单纯冻融法处理的神经内淋巴细胞浸润稍多，主要分布在神经束周边的基底膜间隙中，Hudson法、冻融+酶消化法处理的神经未见明显的炎性细胞浸润。结论：冻融+酶消化法处理方法简单、神经支架结构保存完整，神经内髓鞘等抗原成分去除较彻底，是一种良好的去细胞方法，为后期实验提供基础。实验二、脱细胞神经复合GDNF转染的MSCs修复兔面神经缺损目的：以脱细胞面神经为支架，复合GDNF转染的MSCs修复兔面神经多分支缺损，观察其对面神经再生及对面神经元存活的作用。方法：新西兰大白兔60只，面神经解剖性损伤造模。完全随机分为：脱细胞同种异体神经移植组（ANA），脱细胞异体神经+间充质干细胞组（AN-MSCs），脱细胞异体神经+GDNF转染的间充质干细胞（AN-G-MSCs），自体神经移植组（Control）。于术后4、12、24周时取材，对动物行大体观察并采用触须运动、神经电生理等方法对面神经功能进行评估，分别对移植神经的近端及远端行甲苯暗蓝染色、透射电镜观察其再生轴突的变化。结果：对面神经总干处神经轴突形态计量学分析发现，术后4周时脱细胞神经移植组其神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于其他三组，差异有统计学意义（P<0.05）；术后12、24周时检测发现各组间无明显差异（P>0.05）。面神经移植物远端术后12周时面神经各分支检测脱细胞神经移植与MSCs组神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于GDNF组与自体神经移植组，差异有统计学意义（P<0.05）。术后24周时脱细胞神经移植各项指标均低于其他三组.结论：将脱细胞神经与GDNF转染的MSCs联合应用可成功修复兔面神经多分支缺损，其修复效果优于单纯应用脱细胞神经，且可以一定程度上保护面神经元的存活。实验三同种异体神经移植修复面神经缺损的长期随访观察目的：临床应用脱细胞神经移植修复面神经缺损，并进行长期的随访，观察其修复效果及安全性。方法：2004年7月至2013年7月，因外伤或腮腺恶性肿瘤侵袭术中切除导致的面神经缺损44例，最终共有35例神经缺损修复患者完成随访观察，其中自体神经移植20例，脱细胞神经移植15例。术后最短随访时间为9个月，随访时分别进行局部超声检查和血常规检查，并按HB标准观察面神经功能。结果：随访时间9月-9年，面神经缺损长度10mm-50mm，其中术中一期缺损修复26例，二期手术移植9例，二期手术距损伤时间2天-3个月。术后随访时的血常规检及超声查均未发现无异常，表明脱细胞神经植入体内后未引起明显的不良反应。最终自体神经移植组与脱细胞神经移植组有意义的功能恢复分别为85%（17/20）和80%（12/15），无统计学差异（P>0.05）；术后HB分级比较发现脱细胞神经移植神经功能恢复情况稍弱于自体神经移植，但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：采用脱细胞神经在临床上修复面神经缺损并进行长期的随访观察，结果发现脱细胞神经可以修复面神经缺损，长期随访未发现明显的不良反应，其修复与自体神经移植接近。脱细胞神经移植可成为临床面神经缺损修复的一种选择。
刘守应[7]（2014）在《羊同种异体松质冻干骨生物学行为的实验研究》文中认为第一部羊松质冻干骨的制备及生物学检测目的：制备羊松质冻干骨（FDB），研究其大体微观结构特点，检测生物力学参数，为羊松质冻干骨的应用研究提供理论数据。方法：通过脱脂脱蛋白及冷冻辐照等方法制备羊松质冻干骨和未冻干的深冻骨。观察大体形态和结构；扫描电子显微镜（SEM）观察其超微结构，测量孔隙大小；微-CT测量计算其骨形态计量学参数； MTS生物力学机进行力学性能检测，随机附带软件记录其最大载荷和应力-应变曲线，计算力学参数。结果：制备成大小为10×10×10mm3羊髂骨松质冻干骨块及深冻骨块。大体观察见羊松质冻干骨块外观呈乳白色，透亮，扫描电子显微镜下羊松质冻干骨块呈三维多孔网状结构，孔隙相互连通，测量孔径大小为268.60±40.01um。微-CT形态计量分析显示羊松质冻干骨的形态计量参数，BMD是317.98±46.70mg/cc，TMD是465.41±42.83mg/cc，BVF是0.4861±0.1135，Tb.Th.是0.1601±0.0340mm， Tb.SP.是0.1729±0.0506mm， Tb.n.是3.0322±0.3081/mm。力学测试结果：冻干骨与深冻骨的最大抗压力分别是663.57±20.98Nu和430.41±31.47Nu；最大压缩强度分别为8.19±0.80MPa和5.31±0.62MPa；弹性模量分别为289.45±30.10MPa和23.37±3.45MPa。结论：羊松质冻干骨具有作为支架材料的理想孔隙大小及孔隙率，有一定的生物力学抗压性能，是一种理想的骨组织工程支架材料。第二部分羊松质冻干骨复合间充质干细胞的体外实验研究目的：制备骨髓间充质干细胞（BMSCs），研究其生物学特性、向成骨细胞分化的能力，及与同种异体松质冻干骨复合的生物相容性。方法：联合密度梯度离心法和贴壁法对BMSCs进行分离及传代培养。取第2、5、8代的BMSCs培养观察并绘制细胞生长曲线；使用成骨诱导液对BMSCs进行成骨诱导，用茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测BMSCs的成骨性能。将第3代BMSCs与羊松质冻干骨块在体外复合培养。通过扫描电镜观察细胞在松质冻干骨上的附着生长情况。结果：间充质干细胞分离24h后，部分细胞贴壁，多以圆形、椭圆形等不规则形态散在分布，4d后细胞呈典型的成纤维状，开始形成小的集落，6d后细胞集落增多，并逐渐连成片状。10d后各细胞集落之间逐渐相连，相互融合，铺满整个瓶底。传代培养的干细胞悬于培养液中，2h散开贴壁，第2d全部贴壁，3-5d时达90%。BMSCs的生长曲线呈S型，P2、P5、P8细胞的生长曲线形态基本一致，第1-2d为潜伏期，生长较慢；3d后细胞增长速度加快，进入对数期；第7-8d停止生长，进入平台期。茜素红染色检测诱导细胞的分化情况，在12-14d时出现分化迹象，有点状的钙化斑，且分布均匀，16d左右有矿化骨结节出现，第21d时骨结节形成比较明显。碱性磷酸酶染色结果显示BMSCs经定向诱导21d后出现小的点状钙化斑。BMSCs和羊松质冻干骨的复合物（MSCs-FDB）上有细胞生长。2h可见细胞贴附在FDB孔隙内部及表面，胞体较小，细胞与骨小梁结合不太紧密，随着培养时间增加，24h时胞体增大，生出突触，与材料结合紧密。48h时，细胞呈不规则形状，部分细胞形成小的集落，细胞功能活跃，胞体扁平，贴附在小梁骨表面。结论：BMSCs具有自我增殖与自我更新能力，P2、P5、P8的细胞均有很良的生长性能，P3在成骨诱导剂作用下向成骨细胞定向分化，与同种异体松质冻干骨组织相容性好。第三部分羊MSCs-CFDB复合体成骨行为的体内研究目的：研究MSCs-CFDB复合体在大动物体内的成骨行为，为同种异体MSCs-CFDB复合体在临床使用提供实验依据。方法：将9只2.5-3年龄40-50kg的实验绵羊，速眠新Ⅱ注射液麻醉后，在羊胫骨内侧距膝关节面下3-5mm处，截骨形成10×10×10mm3干骺端骨缺损模型。A组（实验组）：将培养24h的MSCs-FDB复合体填充左下肢骨缺损区。对照组用DMEM液培养24h的羊松质冻干骨植入右下肢相应部位骨缺损区。术后观察实验动物的一般活动情况及伤口愈合情况；分别术后4w、8w、12w随机各处死3只动物，取植骨块表面软组织和3cm×3cm×3cm大小骨标本，微-CT检查并重建骨小梁形态结构，分析测量主要骨形态计量参数包括骨矿物质密度（BMD）、组织骨密度（TMD）、骨体积分数（BVF）、骨小梁厚度（Tb.Th.）、骨小梁间隙宽度（Tb.Sp.）和骨小梁数量（Tb.n.）。脱钙后行HE染色和Masson三色染色，分析植入物的成骨情况。结果：术后实验动物活动正常，切口正常愈合。大体观察植骨周围软组织，术后4w见表面纤维组织疏松，淡粉色，于8w、12w时，逐渐变致密，颜色渐接近周围正常骨膜组织，无感染；组织切片未见淋巴浸润。微-CT显示实验组与对照组骨组织结构变化趋势一致，术后4w时骨小梁结构略增粗，孔隙增大，8w时小梁结构增粗，12w时骨小梁结构再次变细，孔隙增多变小，于所在部位的骨结构整合，不能区分。微-CT检测移植物在4w、8w和12w时的骨矿物质密度BMD：实验组为145.10±19.96mg/cc，238.41±33.73mg/cc和215.30±28.50mg/cc；对照组为134.08±23.79mg/cc，240.20±23.02mg/cc和218.70±31.60mg/cc。实验组的BVF在4w、8w和12w时分别为0.3772±0.0474，0.6038±0.1099和0.4016±0.0575；对照组为0.3629±0.0510，0.5967±0.0699和0.4453±0.0503；实验组和对照组4w、8w、12w时的Tb.Th.分别为0.1535±0.0282mm和0.1600±0.0258mm，0.2974±0.0448mm和0.2830±0.0445mm，0.1710±0.0239mm和0.1650±0.0224mm；实验组和对照组的Tb.Sp.在4w、8w、12w时分别为0.2591±0.0360mm和0.2932±0.0359mm，0.1866±0.0254mm和0.2193±0.0382mm，0.2681±0.0342mm和0.2273±0.0332mm。实验组和对照组的Tb.n.在4w、8w、12w时分别为2.5573±0.3052mm和2.2531±0.3610mm，2.2149±0.2599mm和2.2469±0.2650mm，2.4632±0.2844mm和2.8050±0.3384mm。组织学检查显示实验组与对照组骨组织结构变化趋势基本一致，术后4w时骨小梁结构稀疏，略增粗，孔隙增大，有新纤维骨生成，在原骨小梁的周边可见条状编织骨，原骨小梁组织少部降解,无炎症细胞；8w时骨小梁结构增粗，小梁变密，新骨的形成及移植骨的降解都明显增加，出现新骨旧骨的相互交织状态；12w时骨小梁结构变细，孔隙增多变小，原骨小梁组织大部分被取代，新骨逐渐向成熟骨组织转变。总体上，MSCs-FDB组的变化趋势比单纯FDB组更快更明显。Mason三色染色于术后4w可见两组中红色骨纤维周边少量蓝绿色骨纤维，8w时蓝绿色新生骨纤维组织增多，与红色纤维组织骨相互交织包绕，组织内细胞核明显。12w时可见大量蓝绿色新生骨组织，有少量红色纤维组织，重建的骨小梁规整。与实验组相比，这一变化过程在对照组中发生缓慢。结论：羊松质冻干骨复合骨髓间充质干细胞后在同种异体干骺端有较好的成骨性能。但在成骨过程的4w时，骨骼总量明显下降，影响其生物学性能的组织结构发生变化。
刘守应,王继芳,蔡谞[8]（2014）在《骨再生的研究进展》文中研究指明骨骼是一种高度血管化并受神经支配的结缔组织,处于一种连续不断的更新及重建过程中,其独特的再生能力属损伤修复反应的一部分[1]。骨再生由一系列协调的骨传导和骨诱导的生物过程所组成,新形成的骨与周围正常的骨骼没有区别[2]。在临床中,常见的骨再生形式是骨折愈合,创伤、肿瘤切除、感染、骨骼发育异常、缺血性骨坏死及关节置换翻修等造成的骨缺损[3]。临床应用自体骨移植、同种异体骨移植和牵张成骨促进或加强骨再生,新的方法有组织工程和基因治疗,系统性增加骨修复的方法[4]。以及增强骨形成的辅助物理治疗手段,如低频脉冲超声（low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS）、脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields,PEMF）等。1骨移植骨移植是最常用的促进骨再生的方法,包括自体骨移植、
刘房春[9]（2013）在《经静脉或冠脉移植脐带间充质干细胞治疗猪急性心肌梗死实验研究》文中进行了进一步梳理目的：观察经静脉或冠脉移植脐带间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）对急性心肌梗死猪的心功能、梗死面积、新生毛细血管数量的影响。方法：实验于2011年1月至2012年6月在泰达国际心血管病医院动物实验室在用球囊封堵前降支制作急性心肌梗死模型。造模成功并完成干细胞移植的23只猪分为3组：冠脉组8只,静脉组8只,对照组7只。移植组于心肌梗死后2周分别经静脉和冠脉的方式移植干细胞,对照组经静脉注射等量的生理盐水。所有实验猪分别于干细胞移植前和移植后6周行超声心动图检查,测量左室舒张末容积（LVEDV）.左室收缩末容积（LVESV）、左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）；所有实验猪分别于干细胞移植前和移植后6周行心肌核素灌注显像检查,计算左室梗死面积及梗死质量比；移植后6周时,氯化钾注射法处死猪,分别取梗死区、梗死周边区心肌,行vWF免疫组化染色,计算毛细血管密度。并行透射电镜观察细胞移植后分化情况。结果：1.与对照组相比,静脉移植组和冠脉移植组的左室舒张末容积（LVEDV）、左室收缩末容积（LVESV）缩小、左室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）增加,差异具有统计学意义[冠脉组：56.86±7.62mm,16.25±6.45mm,71.25±8.94%,39.52±6.85%;静脉组：59.38±5.55mm,17.63±6.14mm,69.38±6.93%,38.25±6.69%;对照组：70.57±8.50mm,25.57±7.55mm,59.71±7.18%,31.29±5.19%;（P<0.05）]。冠脉移植组与静脉移植组比较,无明显差异（P>0.05）。2.与对照组相比,冠脉组和静脉组的左室心肌梗死面积、梗死质量比明显缩小,差异具有统计学意义[冠脉组：15.13±2.99%,16.13±2.99%；静脉组：13.13±3.23%,15.00±3.07%；对照组：21.43±5.88%,22.86±6.49%；（P<0.05）]。冠脉组与静脉组间无显着性差异（P>0.05）。3.与对照组相比,冠脉组和静脉组的新生毛细血管的数量明显增加,差异具有统计学意义[冠脉组：14.71±2.99个；静脉组：13.58±2.65个；对照组：10.24±1.71个；（P<0.05）]。冠脉组与静脉组间无显着性差异（P>0.05）。4.移植组脐带间充质干细胞可分布于梗死区及梗死周边区,透射电镜下可见由干细胞分化而来的的血管内皮细胞及心肌样细胞。结论：经静脉或冠脉两种途径移植脐带MSCs均能有效地改善急性心肌梗死猪的心功能,缩小左室舒张末期容积和收缩末期容积,缩小梗死面积,增加毛细血管的数量,两种途径之间无显着的差异。
吴云,谯川南,程洁慧,洪梅[10]（2010）在《深低温冻存脐血的回输及护理》文中研究说明目的探讨如何做好深低温冻存脐血的安全有效输注和护理。方法对78例患者11 1份脐血经不同输注途径回输过程中出现的不良反应进行观察及护理。结果静脉回输途径:67例中1例发生急性溶血反应;1例突发意识丧失,全身抽搐;4例发生剧烈头痛,伴呼吸困难、血压急剧升高;46例发生部分及不同程度的手脚、颜面部麻木,恶心呕吐,腹痛伴便意,呼吸困难伴胸部压迫感,血压升高,心率减慢或血压降低、心率加快,其中1例出现无症状性频发早搏;大部分病例出现回输后肉眼血红蛋白尿。骨髓腔注射回输途径:11例患者在注射过程仅发生局部及双下肢放射生酸胀,血红蛋白尿症状轻或无血红蛋白尿症状。78例患者111份脐血均成功输完,患者生命安全。结论静脉回输脐血不良反应以严重的全身反应为主,病情变化快且复杂,护理重点为充分预防准备,严密病情观察和积极有效对症处理;骨髓腔注射脐血不良反应以局部胀痛为主,护理重点为严格遵守无菌操作,掌握脐血注射时间。
二、深低温保存骨髓细胞及其移植效果（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、深低温保存骨髓细胞及其移植效果（论文提纲范文）
（1）可注射人脱细胞脂肪组织基质匀浆填充材料的制备与应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 人脂肪组织细胞外基质匀浆的制备与检测 |
| 1.1 主要材料、试剂与器材 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 人脂肪组织细胞外细胞基质支架的制备 |
| 1.2.2 肉眼观察 |
| 1.2.3 组织学观察 |
| 1.2.4 DNA残留观察 |
| 1.2.5 DAT匀浆的制备 |
| 1.2.6 DAT匀浆外观、扫描电镜观察 |
| 1.2.7 细胞复苏与培养传代 |
| 1.2.8 ADSCs与 DAT匀浆黏附率检测 |
| 1.2.9 ADSCs在 DAT匀浆中的细胞增殖能力检测 |
| 1.2.10 统计学分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 肉眼观察 |
| 1.3.2 组织学观察 |
| 1.3.3 DNA残留观察 |
| 1.3.4 DAT匀浆外观、扫描电镜观察 |
| 1.3.5 ADSCs与 DAT匀浆黏附率结果 |
| 1.3.6 细胞增殖能力 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 DAT匀浆填充作用的体内实验研究 |
| 2.1 主要材料、试剂及仪器 |
| 2.1.1 材料来源 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 DAT匀浆的制备 |
| 2.2.2 DAT匀浆的处理以及细胞接种 |
| 2.2.3 体内实验 |
| 2.2.4 移植物取材及大体观察 |
| 2.2.5 移植物的体积测量 |
| 2.2.6 移植物HE、Masson染色 |
| 2.2.7 移植物的免疫组织组化染色 |
| 2.2.8 微血管计数 |
| 2.2.9 平均光密度值反映炎症反应程度 |
| 2.2.10 数据统计 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 移植物皮下注射后大体观察 |
| 2.3.2 移植物体积以及体积保留率 |
| 2.3.3 移植物的HE染色分析 |
| 2.3.4 移植物的Masson染色分析 |
| 2.3.5 CD31 染色及微血管计数 |
| 2.3.6 巨噬细胞浸润情况 |
| 2.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 脱细胞脂肪组织的发展与应用 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
| 附图 |
（2）两性离子分子对细胞超低温冻存保护的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 超低温冻存技术 |
| 1.2.1 超低温冻存技术介绍及冻存损伤理论 |
| 1.2.2 超低温冻存保护剂研究现状及存在的问题 |
| 1.3 抗冻蛋白与仿生聚合物作为细胞冻存保护剂的研究现状 |
| 1.3.1 抗冻蛋白 |
| 1.3.2 仿抗冻蛋白聚合物 |
| 1.4 两性离子分子 |
| 1.4.1 天然两性离子小分子 |
| 1.4.2 两性离子聚合物 |
| 1.5 本文的研究意义和研究内容 |
| 1.5.1 研究意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第2章 两性离子分子对人软骨细胞冻存保护的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验耗材与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 PCBMA及 PSBMA的合成 |
| 2.3.2 实验细胞准备 |
| 2.3.3 渗透压调节能力测试 |
| 2.3.4 差示扫描量热(DSC)测试 |
| 2.3.5 细胞毒性测试 |
| 2.3.6 细胞存活率测试 |
| 2.3.7 细胞超低温冻存实验 |
| 2.3.8 细胞贴壁能力测试 |
| 2.3.9 细胞增殖能力测试 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 甜菜碱结合两性离子聚合物防止渗透压损伤的能力 |
| 2.4.2 甜菜碱结合两性离子聚合物防止冰晶损伤的能力 |
| 2.4.3 甜菜碱结合两性离子聚合物的生物相容性 |
| 2.4.4 甜菜碱结合两性离子聚合物保护液配方的探索 |
| 2.4.5 细胞复苏后的功能 |
| 2.4.6 PSBMA分子量对软骨细胞复苏存活率的影响 |
| 2.4.7 甜菜碱结合两性离子聚合物冻存保护作用机理 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 基于温敏两性离子水凝胶对细胞冻存保护的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验材料与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 Poly(SBMA–co–NiPAAm)的合成 |
| 3.3.2 凝胶形成 |
| 3.3.3 实验细胞准备 |
| 3.3.4 差示扫描量热(DSC)测试 |
| 3.3.5 细胞毒性测试 |
| 3.3.6 细胞存活率测试 |
| 3.3.7 细胞超低温冻存实验 |
| 3.3.8 细胞贴壁能力测试 |
| 3.3.9 细胞增殖能力测试 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 Poly(SBMA-co-NIPAAm)聚合物水溶液的相变物理状态 |
| 3.4.2 甜菜碱结合温敏两性离子聚合物防止冰晶损伤的能力 |
| 3.4.3 甜菜碱结合温敏两性离子聚合物的生物相容性 |
| 3.4.4 细胞复苏存活率 |
| 3.4.5 细胞复苏后的功能 |
| 3.4.6 甜菜碱结合温敏两性离子聚合物冻存保护作用机理 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 总结与展望 |
| 4.1 研究结论 |
| 4.2 主要创新点 |
| 4.3 工作展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 致谢 |
（3）冻存脂肪生物学性状改变及移植后存活率检测的基础研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 冻存不同时间的脂肪组织生物学活性检测 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 冻存不同时间的脂肪组织移植后存活率检测 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表文章 |
| 致谢 |
（4）不同冻存条件对人颗粒脂肪活性影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 第一部分 脂肪标本的收集 |
| （一）临床资料 |
| （二）试剂、仪器及耗材 |
| 1.试剂 |
| 2.仪器与耗材 |
| （三）方法 |
| 1.颗粒脂肪组织的获取与纯化处理 |
| 2.颗粒脂肪组织的冻存 |
| 3.颗粒脂肪组织的分组 |
| （四）结果 |
| 第二部分 脂肪细胞活性的体内、外实验研究 |
| （一）体外检测脂肪细胞活力 |
| 1.材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 设备及耗材 |
| 2.方法 |
| 2.1 颗粒脂肪组织的复温 |
| 2.2 台盼蓝染色法脂肪细胞计数 |
| 2.3 肌酸激酶测定比较脂肪细胞活力 |
| 2.4 HE染色 |
| 2.5 免疫组化检测 |
| （二）颗粒脂肪裸鼠移植建模 |
| 1. 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 人颗粒脂肪组织 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 设备及耗材 |
| 2. 裸鼠移植方法 |
| 2.1 颗粒脂肪组织的复温 |
| 2.2 移植准备工作 |
| 2.3 颗粒脂肪的裸鼠移植 |
| 2.4 裸鼠移植后观察 |
| 2.5 裸鼠移植物取出及大体标本观察 |
| 3. 实验方法 |
| （三）数据统计 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 不同获取、纯化方法影响脂肪细胞活性研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（5）不同培养液保存兔骨软骨组织效果的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 不同培养液体外保存兔骨软骨组织效果研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 不同培养液保存的兔骨软骨组织体内移植效果研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 壳聚糖导管预防周围神经瘢痕的实验研究 |
| 实验一 壳聚糖导管预防兔面神经周瘢痕的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验二 壳聚糖导管复合透明质酸预防大鼠坐骨神经瘢痕的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验三、壳聚糖导管植入对腮腺术后面神经功能恢复的临床效果观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 第一部分 小结 |
| 第二部分 GDNF 基因慢病毒载体的构建、病毒的包装及细胞转染 |
| 实验一 GDNF 基因慢病毒载体的构建及慢病毒的包装 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验二、兔骨髓间充质干细胞的培养及诱导鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验三、携带 EGFP 和 GDNF 的慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 第二部分 小结 |
| 第三部分 脱细胞神经复合 GDNF 转染的间充质干细胞修复兔面神经缺损的实验研究 |
| 实验一 周围神经脱细胞方法的改良 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验二、脱细胞神经复合 GDNF 转染的 MSCs 修复兔面神经缺损 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验三 同种异体神经移植修复面神经缺损的长期随访观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 典型病例介绍 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 附图 |
| 第三部分小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述一 周围神经瘢痕的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 脱细胞神经移植研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略语词表 |
| 个人简介 |
| 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）羊同种异体松质冻干骨生物学行为的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 羊松质冻干骨的制备及生物学检测 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 羊松质冻干骨与间充质干细胞的体外复合培养 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 羊 MSCs-FDB 复合体成骨行为的体内研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述：骨再生的研究进展 |
| 参考文献 |
| 略缩词表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（8）骨再生的研究进展（论文提纲范文）
| 1 骨移植 |
| 2 牵张成骨 |
| 3 骨组织工程 |
| 4 基因治疗 |
| 5 系统促进骨再生的方法 |
| 6 促进骨生成的物理方法 |
（9）经静脉或冠脉移植脐带间充质干细胞治疗猪急性心肌梗死实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.1.1 实验动物 |
| 1.1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.1.3 主要实验仪器 |
| 1.1.1.4 手术器材 |
| 1.1.2 研究方法 |
| 1.1.2.1 同种异体脐带间充质干细胞的培养、分离及标记 |
| 1.1.2.2 制备心肌梗死模型 |
| 1.1.2.3 动物分组 |
| 1.1.2.4 脐带间充质干细胞移植 |
| 1.1.2.5 超声心动图检查 |
| 1.1.2.6 心肌核素显像检查 |
| 1.1.2.7 组织标本的制作 |
| 1.1.3 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 实验动物数量分析 |
| 1.2.2 猪心肌梗死模型制作成功的判断 |
| 1.2.3 各组超声心动图指标的测定 |
| 1.2.4 各组心肌核素显像指标的测定 |
| 1.2.5 各组新生血管数目的比较 |
| 1.2.6 透射电镜结果 |
| 1.3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
四、深低温保存骨髓细胞及其移植效果（论文参考文献）
- [1]可注射人脱细胞脂肪组织基质匀浆填充材料的制备与应用[D]. 郑洋洋. 兰州大学, 2021(12)
- [2]两性离子分子对细胞超低温冻存保护的研究[D]. 刘敏. 天津大学, 2020
- [3]冻存脂肪生物学性状改变及移植后存活率检测的基础研究[D]. 黄桢雅. 中国人民解放军医学院, 2019(02)
- [4]不同冻存条件对人颗粒脂肪活性影响的实验研究[D]. 魏国茜. 大连医科大学, 2017(07)
- [5]不同培养液保存兔骨软骨组织效果的实验研究[D]. 曹法民. 泰山医学院, 2016(06)
- [6]面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究[D]. 刘华蔚. 中国人民解放军医学院, 2014(03)
- [7]羊同种异体松质冻干骨生物学行为的实验研究[D]. 刘守应. 中国人民解放军医学院, 2014(03)
- [8]骨再生的研究进展[J]. 刘守应,王继芳,蔡谞. 中华保健医学杂志, 2014(01)
- [9]经静脉或冠脉移植脐带间充质干细胞治疗猪急性心肌梗死实验研究[D]. 刘房春. 天津医科大学, 2013(02)
- [10]深低温冻存脐血的回输及护理[J]. 吴云,谯川南,程洁慧,洪梅. 中国实用护理杂志, 2010(26)