一、重组人干细胞因子生物学活性测定的质量控制研究（论文文献综述）
马洁,刘彩霞,谭琴,童春容,吴迪,昌晓红,程洪艳,王征旭,游嘉,武立华,程金莲,王少华,曹彩[1]（2021）在《细胞产品质量控制与质量管理》文中研究指明随着细胞治疗相关研究的不断推进,部分细胞治疗产品已经应用于临床研究。然而,我国相应的细胞治疗监管政策仍需进一步完善,这有利于我国的细胞治疗产业发展,同时保障患者利益。从不同类型的细胞治疗出发,结合现有技术能力,就目前细胞治疗可行的质量控制和管理方法做出论述,以期起到抛砖引玉的作用,引导社会各方制定更为科学规范的管理措施。
孙开青[2]（2020）在《重组人源化单克隆抗体翻译后修饰与生物学功能研究》文中进行了进一步梳理单抗药物由于其免疫原性小,副作用低,治疗效果显着等特点,被广泛运用于肿瘤、自身免疫性疾病、器官移植排斥、心血管疾病、感染等疾病的治疗。然而,单抗药物的生产及临床使用过程中,由于不同的理化因素而使单抗药物发生糖化修饰和氧化修饰,而这些翻译后修饰可能会导致其理化性质发生改变,最终影响产品的生物学功能。因此,研究单克隆抗体药物的糖化修饰和氧化修饰与其生物学功能之间的关系对单抗药物的工艺开发、制剂生产及质量控制具有重要的意义。本研究建立的糖化定量分析方法精密度好,两位实验员分别测定6份供试品溶液,其RSD值分别为0.5%、1.2%,12份的RSD值为0.9%;在糖化含量0.3125%～20%范围具有较好的线性,其线性相关系数r=0.9999,y轴截距的绝对值与100%浓度点糖化含量响应值的比值为0.7%;方法准确度良好,各水平的准确度测定溶液的回收率分别为分别为（95.9±1.355）%、（100.3±0.402）%、（102.0±0.336）%、（102.6±0.569）%、（103.7±1.000）%、（106.6±2.369）%、（108.6±1.212）%,且回收率的RSD值在0.3%～2.2%之间。本研究建立的重组人源化单克隆抗体药物氧化定量分析方法精密度好,两位实验员分别测定6份供试品溶液,其RSD值分别为0.9%、3.4%,12份的RSD值为2.5%,在氧化含量3.6%～28.4%之间具有良好的线性,其线性相关系数r=1.0000;y轴截距的绝对值与100%浓度点氧化含量响应值的比值为2.4%;方法的准确度好,各水平的准确度测定溶液的回收率分别为（100.8±0.413）%、（99.3±1.632）%、（98.4±0.721）%、（99.8±1.0）%,均在90%～110%之间,且回收率的RSD值在0.4%～1.6%之间。本研究建立的重组人源化单克隆抗体药物生物学活性分析方法专属性强,除了与VEGF-110和VEGF-121因子有剂量曲线关系,与VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、PLGF因子,抗TNF–α单抗药物和高温破坏的样品均无剂量曲线关系;方法的精密度好,两位试验员分别测定6份供试品溶液,其RSD分别为4.5%、3.0%,12份的RSD为6.4%;在66%～144%的线性范围内线性较好,线性相关系数r=0.9950,斜率为1.0973;方法的准确度好,各水平下的回收率在（106.00±3.46）%、（99.98±6.08）%、（102.27±1.53）%、（91.03±4.58）%、（99.52±5.86）%,回收率的RSD在1.7%～7.7%之间;并且该方法在细胞数目8000 cell/m L～12000 cell/m L、细胞代次4～11代,细胞批次均具有较好的耐用性。本研究分别比较商业化和自研的单抗药物在糖化含量、氧化含量及生物学活性差异,结果显示在糖化含量上自研略高于商业化单抗药物,而氧化含量与生物学活性两者相当。通过测定不同糖化含量及不同氧化含量的重组人源化单克隆抗体的生物学活性,建立糖化修饰与生物学功能的关系及氧化修饰与生物学功能的关系。结果显示,高含量的糖化修饰和高含量的氧化修饰均能使重组人源化单克隆抗体的生物学活性降低,特别是当糖化修饰增加到20.7%以上和氧化修饰增加到7.8%以上时,其生物学活性已经超出80%～125%的质控范围。
董世建[3]（2020）在《聚乙二醇化重组人干扰素α2b的制备工艺及质量研究》文中提出重组人干扰素α2b（rh IFNα2b）是最早运用基因工程技术实现量产的细胞因子之一,临床上主要用于急慢性病毒性肝炎（乙型、丙型等）、尖锐湿疣、白血病、淋巴瘤、艾滋病相关性卡波济氏肉瘤、恶性黑色素瘤等的治疗。但因其用药间隔短,很多研究人员致力于开发长效干扰素制剂,聚乙二醇修饰技术是解决蛋白质药物半衰期短的有效手段之一。本学位论文采用分子量20KD的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯（m PEG-Succinimidyl Carbonate,m PEG-SC）对rh IFNα2b进行修饰,开发了能够获取高纯度聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEG-rh IFNα2b）的制备方法,并对所获产品进行了理化性质、生物学活性、稳定性等质量研究。（1）聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEG-rh IFNα2b）的制备和纯化。采用DOE试验设计,优化p H、投料比、rh IFNα2b浓度等参数,确定PEG-rh IFNα2b的制备工艺;以离子交换层析结合凝胶过滤层析纯化目标物。最优的工艺为:修饰反应在p H7.0、温度2～8℃、时间约4小时、rh IFNα2b浓度为1.8mg/ml～2.7mg/ml、投料比为2.2～3.0条件下,所获PEG-rh IFNα2b单体含量为44%以上;建立的阳离子交换层析、凝胶过滤层析两步纯化工艺,能有效去除修饰反应副产物NHS和副产物游离PEG,所获PEG-rh IFNα2b纯度在95%以上。（2）聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEG-rh IFNα2b）的理化性质和稳定性。所获PEG-rh IFNα2b相对分子质量为39206.6道尔顿,等电点为5.8～6.0,紫外最大吸收峰波长为280nm,电泳纯度为98.1%～98.4%,HPLC纯度为98.08%～99.74%,产品中未检出游离PEG;通过PEG-rh IFNα2b位置异构体电荷性质存在的微弱差异,采用离子交换高效液相色谱可有效分离出电泳条带位置一致的5个位置异构体;将PEG-rh IFNα2b分别置于2～8℃、25±2℃、37±2℃条件下,在不同时间点考察蛋白含量、电泳纯度、HPLC纯度、游离干扰素、比活性、游离PEG等指标,3批PEG-rh IFNα2b原液在2～8℃条件下保存时间12个月,在25℃±2℃条件下保存3个月,37℃±2℃条件下保存2个月,各项考察指标均符合规定,37℃贮存条件下放置3个月纯度检测不合格。（3）聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEG-rh IFNα2b）的生物活性。对《中国药典》中干扰素生物学活性测定法进行专属性和精密度考察。结果表明《中国药典》中收录的干扰素生物学活性测定法测定PEG-rh IFNα2b生物活性专属性强,溶媒和少量游离PEG对PEG-rh IFNα2b生物活性测定无干扰;精密度良好,RSD=14%（n=6）。
杨慧[4]（2020）在《抗人CD271单克隆抗体的制备和基于CRISPR/Cas9介导的基因定点整合技术的HEK293T稳定细胞株高效构建》文中进行了进一步梳理干细胞是一类在特定条件下具有自我更新、增殖和分化等多种功能的细胞,它可以根据机体需要有组织地分化产生更多特异性的细胞类型,达到组织再生的目的。间充质干细胞（MSC）是目前临床应用和研究最成熟的干细胞类型之一。CD271是一种存在于骨髓、脐带等多种组织来源的间充质干细胞以及肿瘤干细胞的特异性标记分子,研究表明抗CD271抗体有望应用于间充质干细胞和肿瘤干细胞的分离、富集及靶向,因此高效靶向人CD271的单克隆抗体在基础研究及应用转化方面均具有重要价值。氨基酸序列的亲水性、柔性、二级结构以及翻译后修饰等多项因素决定了蛋白分子的抗原性。大多数蛋白分子的疏水性残基都埋藏在分子内部,而暴露在分子表面的N-和C-末端肽段具有较好的柔性、带电性以及亲水性,因此是成为抗原良好的选择。CD271的胞外区富含N-和O-糖基化和磷酸化修饰以及4个重复的半胱氨酸富集区（CRD1-4）,具有复杂的蛋白特性和二级结构,而靠近细胞膜的stalk区无糖基化、磷酸化修饰或高级空间结构,结构稳定,识别此区域的抗体理论上具有较好的通用性。目前关于人CD271单克隆抗体的研究较少,有明确报道的抗体识别CRD1区,因此,我们选取stalk区作为靶点开发新型的抗CD271单克隆抗体,为该领域研究提供新的工具。我们首先设计了胞外区全长（CD271F）及截短的stalk区（CD271T）两种重组人CD271蛋白,并分别采用哺乳动物细胞和大肠杆菌两种系统进行表达纯化,先后应用于小鼠免疫及效价检测、杂交瘤细胞株筛选阶段,以保证获得能够识别天然结构抗原的抗体。经过杂交瘤融合及筛选阶段,我们最终获得了7株杂交瘤细胞,采用诱生腹水法纯化获得单克隆抗体,测得7株抗体的平衡解离常数均为n M水平,且流式细胞术检测其均能识别人间充质干细胞（MSC）表面的CD271分子。我们选取与MSC结合最优的一株进一步检测,证实其也能够识别肿瘤细胞A375-S2和SGC表面的CD271分子。通过杂交瘤细胞测序获得该抗人CD271单克隆抗体株的可变区序列,可用于后续基因工程抗体的研究。哺乳动物细胞表达重组蛋白、单克隆抗体主要采用瞬时表达和稳定表达两种方式,其中稳定表达能够获得持续稳定的质量和产量,但稳定细胞株的构建较为困难。传统的稳定细胞株主要通过瞬时基因表达质粒的随机整合及后续筛选,目的基因（GOI）被转染到宿主细胞系中,其基因插入位点无法控制,细胞株在长期培养的过程中会表现出异质性,从而影响目的蛋白的产量及质量。HEK293细胞是最常用的哺乳动物细胞表达宿主之一,广泛应用于瞬时表达重组蛋白或抗体,本研究结合CRISPR/Cas9介导的基因定点整合方法,建立高效的HEK293细胞的稳定细胞株构建技术,提高HEK293细胞在生物技术药物领域的应用水平。我们以腺相关病毒位点1（AAVS1）为整合位点,首先验证了以EGFP作为模式蛋白的定点整合HEK293T细胞系的可行性,并进一步以CTLA4Ig为模式蛋白建立了多株稳定表达细胞株。我们对CTLA4Ig稳转细胞株构建过程及筛选克隆的CTLA4Ig表达能力进行了一致性评估,证实HEK293T细胞中采用CRISPR/Cas9技术介导AAVS1位点的基因定点整合能够实现高效的稳定细胞株构建,且细胞株之间的产量一致性达到83%以上。我们所建立的方法大大简化了HEK293T稳定细胞株构建流程,具有较好的应用潜力。综上,本课题制备了两种CD271重组蛋白应用于小鼠免疫、细胞融合、杂交瘤细胞筛选及鉴定,成功获得高效靶向人CD271分子stalk区的单克隆抗体杂交瘤细胞株和相关序列,并证实所得到的抗体能够特异性识别人间充质干细胞和肿瘤细胞表面的CD271分子。为提高单克隆抗体制备效率,我们采用CRISPR/Cas9介导的基因定点整合技术,实现了重组HEK293T稳定细胞株的高效构建,且证实该方法具有较好的可靠性和成功率,为本课题所筛选的抗人CD271单克隆抗体的制备奠定了工艺基础,并能够广泛应用于生物药物的生产及研发。
王晓冬,李硕[5]（2019）在《生物制品监管论坛 为生物制品把好质量关》文中提出10月21日上午,第四届中国药品监管科学大会（2019）4个分论坛之一——生物制品监管论坛在北京会议中心举办。以生物制品质量控制为主题,参会嘉宾通过翔实的研究数据、质量标准设定、国内外法规对比等,阐述了生物技术药物、重组药物、基因治疗药物、抗体药物、HPV疫苗、干细胞产品等质量控制研究成果,传达出让人民用上安全有效产品的信心与决心。来自监管部门、医药企业、研发机构等的100余名代表参加论坛。
焦茜[6]（2019）在《单克隆抗体KM113生物学活性检测及质量标准研究》文中提出单克隆抗体药物生物学活性检测项目是抗体质量控制中的一个关键指标。生物学活性与药效密切相关,为产品的有效和质量可控提供了重要保障。KM113抗体是由北京康明百奥新药研发有限公司研制的阿达木单抗生物类似药,建立KM113抗体生物学活性（结合活性和体外细胞生物学活性）方法及企业质量内控标准对该公司KM113成品的临床申报具有重要意义。本研究以KM113抗体（CKP-A20150704）为对照品,运用间接ELISA（酶联免疫吸附）法和细胞毒性法测定其生物学活性。通过对ELISA法和对细胞毒性法的建立及优化,并对以上两种方法的专属性、重复性、中间精密度和准确度进行验证,确定了KM113抗体生物学活性的检测方法。运用两种活性方法对三批KM113样品、三批市售生物类似药和三批KM113长期稳定性样品进行测定,依据中国药典单抗类产品质量标准及样品的测定结果,最终建立了 KM113生物学活性的质量标准。首先,建立了KM113单抗在两个活性方法,两种方法均存在明显的量效关系,且四参数方程R2均大于0.95。结合活性中,重复试验EC50平均值为（82.83±7.04）ng/ml,其RSD为8.50%,准确度验证的相对效价分别为（83.74±1.09）%和（120.43±4.04）%,对应的回收率分别为（104.68±1.36）%和（100.36±3.37）%,其RSD均小于 10%;细胞生物学活性中,重复试验IC50平均值为（27.63±1.73）ng/ml,其RSD为6.29%;中间精密度的IC50平均值分别为（27.57±0.12）ng/ml和（25.40± 1.59）ng/ml,其RSD为0.42%和6.25%,准确度验证的相对效价分别为（85.83±3.63）%和（115.90±2.93）%,对应的回收率分别为（107.29±4.54）%和（96.58±2.44）%,RSD均不大于10%。其次,对同一市售生物类似产品和对照品进行的三次平行实验,得到市售产品相对结合活性平均值为（96.67±7.64）%,RSD为7.90%,市售产品细胞生物学活性平均值为（101.00±7.21）%,RSD为7.14%;对三批次的KM113抗体和三批次的市售产品进行相对结合活性检测平均值为（98.97±4.09）%和（104.63±7.02）%,RSD为4.13%和6.71%,生物学活性平均值为（98.33±2.08）%和（93.00±2.65）%,RSD为2.12%和2.84%。依据检测结果和中国药典收录单抗质量标准,制定了生物学活性质量标准,即供试品相对结合活性应为对照品的70～130%,供试品细胞生物学活性应为对照品的 70～130%。本研究成功建立了KM113抗体的结合活性和体外细胞生物学活性的测定方法,并证明该方法的专属性强,精密度良好,准确度较高,为KM113样品生物学活性检测提供了切实可行的方法。通过样品活性分析结果成功建立了生物学活性的质量标准。
饶春明[7]（2016）在《我国重组药物质量控制技术体系的建立和应用研究》文中认为为确保生物技术药物安全和有效,国家食品药品监督管理总局发布了一系列法规和指南,中国食品药品检定研究院建立了有效的重组药物质量控制技术体系。笔者简要回顾生物技术制药领域重要发展阶段和我国重组药物研究开发情况,详细介绍我国30年来重组药物质量控制技术体系的建立和应用情况,内容包括:质量标准研究依据及法规要求,《中国药典》三部重组药物质量标准以及新版药典对重组药物质量控制的相关要求;1986年以来国家科技课题对中检院生物技术药质量控制技术体系的支持以及相关重组药物质量标准及其各类检定方法如生物学活性测定、蛋白含量测定、理化分析与蛋白结构鉴定、纯度与杂质测定等方法的建立与应用情况;生物学活性测定和含量测定国家标准品的研究建立以及用于肽图分析和等电点测定用的重组药物理化对照品质量标准建立和鉴定;2001年以来由重组药物室完成的包括注册检验、进口检验、抽验检验、委托检验、合同检验等各类生物技术药检验共计5 920批次检验报告结果分析。
李萍,陆俭,马亚茹,应莲芳,蒋琳[8]（2012）在《细胞增殖法检测rhCNTF生物活性方法的建立和验证》文中研究指明建立检测rhCNTF生物活性的TF-1.CN5a.l细胞增殖法（简称细胞增殖法）,并用该法检测不同浓度的CNTF1和CNTF2,确定样品的检测范围;不同时间重复检测样品CNTF4,证明细胞检测法的重复性。检测国际标准品CNTF、CNTF3、其它细胞因子及CNTF冻干保护液对TF-1.CN5a.l细胞的增殖效应,验证细胞检测法的专属性。实验结果显示,CNTF的有效检测范围为40～0.001 ng/mL;CNTF4的活性均值为1.42×106IU/mg;rhCNTF、NGF与TF-1.CN5a.1细胞存在明显量效关系,而其它细胞因子则不存在量效关系,但NGF与CNTF是不同性质的细胞因子。细胞增殖法有较好的重复性和专属性,该法能很好地应用于rhCNTF的生物活性测定。
段明华[9]（2010）在《重组人干扰素α-2b直肠栓的制备及其在猕猴体内生物利用度研究》文中认为本研究旨在研制出具有较好生物利用度的重组人干扰素α-2b的栓剂剂型,从而达到增强患者用药的顺应性、降低患者用药成本的目的。本研究从重组人干扰素α-2b脂溶性栓剂基质处方的制备入手,将重组人干扰素α-2b原液制备成高浓度的冻干粉,结合栓剂在大鼠体内的吸收情况,以市售注射剂作为对照,筛选出以脂质作为栓剂的基质组分,通过加入蛋白稳定剂和蛋白促吸收剂使得重组人干扰素α-2b具有较强的稳定性和较好的动物体内吸收效果。在确定处方的前提下,进行了直肠栓剂制备工艺的中试放大研究,进一步摸索中试工艺参数,确定生产规模的工艺参数范围,验证生产工艺的稳定性。通过对研制的三批中试规模样品的质量研究、加速稳定性实验、长期稳定性实验研究以及猕猴体内的吸收研究结果表明,以半合成甘油酯为基质、Triton X-100为促吸收剂所制备的重组人干扰素α-2b栓的产品质量在融变时限、微生物限度、重量差异等方面完全符合《中华人民共和国药典》（2005年版）中关于栓剂和重组人干扰素α-2b的质量标准的相关要求;样品在6℃±2℃条件下放置24个月具有良好的稳定性;以肌肉注射剂作为对照,重组人干扰素α-2b栓在猕猴体内的吸收效率可达到注射剂的74.0%。本研究的创新之处在于:在国内外首次摸索了一种能够促进蛋白质大分子物质透过直肠粘膜吸收的促吸收剂,并在猕猴动物体内获得了较高的吸收率,为重组人干扰素α-2b栓临床应用提供了重要的实验室数据。
刘玉应,邓小晨,刘忠荣,吴洽庆,陈松森[10]（2008）在《重组人干细胞因子中试工艺研究》文中研究说明人干细胞因子（Human stem cell factor,hSCF）是一种重要的造血细胞因子,能刺激造血细胞的生长、增生与分化.本文在重组hSCF工程菌的基础上,通过高密度发酵培养、包涵体分离纯化、变复性、SP-Sepharose FF、Source 30RPC与Q-Sepharose FF层析等技术分离纯化出具有生物学活性的重组人干细胞因子,建立了适合大规模生产重组人干细胞因子的分离纯化工艺.纯化的rhSCF纯度达98%以上,生物活性为1·0×106IU/mg,各项质量检测指标均符合质量控制标准.该纯化工艺简单易行,一批次能制备克级样品,且产品回收率高,重复性好.
二、重组人干细胞因子生物学活性测定的质量控制研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重组人干细胞因子生物学活性测定的质量控制研究（论文提纲范文）
（1）细胞产品质量控制与质量管理（论文提纲范文）
| 1 免疫细胞治疗质量控制和质量管理标准 |
| 1.1 质量管理 |
| 1.2 质量控制 |
| 1.2.1 免疫细胞制备工艺与过程控制 |
| 1.2.2 细胞培养质量保证 |
| 1.2.3 耗材质量保证 |
| 2 干细胞制剂的质量控制和管理标准 |
| 2.1 干细胞的采集、分离及干细胞（系）的建立 |
| 2.1.1 对干细胞供者的要求 |
| 2.1.2干细胞采集、分离及干细胞（系）建立阶段质量控制的基本要求 |
| 2.2 干细胞制剂的制备 |
| 2.2.1 培养基 |
| 2.2.2 滋养层细胞 |
| 2.2.3 干细胞制剂的制备工艺 |
| 2.3 干细胞制剂的检验 |
| 2.3.1 干细胞制剂质量检验的基本要求 |
| 2.3.2 细胞检验 |
| 2.4 干细胞制剂的质量研究 |
| 2.4.1 干细胞制剂的质量及特性研究 |
| 2.4.2 干细胞制剂稳定性研究及有效期的确定 |
| 2.4.3 快速检验方法的研发 |
| 3 基因修饰体细胞治疗质量控制与管理标准 |
| 3.1 基因修饰免疫细胞治疗质量控制与管理标准 |
| 3.1.1 制定依据与适用范围 |
| 3.1.2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 |
| 3.1.3 基本要求 |
| 3.1.4 细胞群体的鉴定 |
| 3.1.5 基因修饰用构建物的分子遗传学特征 |
| 3.1.6 临床前试验 |
| 3.1.7 免疫学考虑要点 |
| 3.1.8 不同批号制品的质控 |
| 3.1.9 关于重组病毒的操作及设施 |
| 3.1.1 0 临床研究的要点 |
| 3.2 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（CAR-T）细胞技术产品的质量控制 |
| 3.2.1 风险管理 |
| 3.2.2全过程控制 |
| 3.2.3 全生命周期管理 |
| 3.3 基因修饰干细胞治疗质量控制与管理标准 |
| 3.3.1 范围 |
| 3.3.2基因修饰的干细胞定义 |
| 3.3.3 基本要求 |
| 3.3.4 细胞群体的鉴定 |
| 3.3.5 基因修饰用构建物的分子遗传学特征 |
| 3.3.6 临床前试验 |
| 3.3.7 免疫学考虑要点 |
| 3.3.8 不同批号制品的质控 |
| 3.3.9 关于重组病毒的操作及设施 |
| 3.3.1 0 临床研究的要点 |
| 4 细胞和基因治疗产品的监管历程 |
| 4.1 国外细胞技术产品监管政策 |
| 4.2 中国细胞治疗产品和技术的监管现状 |
| 5 结语 |
（2）重组人源化单克隆抗体翻译后修饰与生物学功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 单克隆抗体药物的研究进展 |
| 1.1.1 单克隆抗体药物 |
| 1.1.2 单克隆抗体药物前景 |
| 1.1.3 单克隆抗体药物国内外研究现状 |
| 1.2 抗体药物的翻译后修饰 |
| 1.3 糖化修饰研究进展 |
| 1.3.1 影响单抗药物糖化修饰的因素及其影响 |
| 1.3.2 糖化修饰的检测方法 |
| 1.4 氧化修饰研究进展 |
| 1.4.1 影响单克隆抗体药物氧化修饰的因素及其影响 |
| 1.4.2 氧化修饰的检测方法 |
| 1.5 生物学活性 |
| 1.6 研究的目的意义和研究内容 |
| 1.6.1 研究目的意义 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 第二章 重组人源化单克隆抗体糖化分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 主要实验材料 |
| 2.2.1 色谱柱 |
| 2.2.2 主要的仪器设备 |
| 2.2.3 主要的试剂 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 硼酸亲和色谱法 |
| 2.3.2 分析方法优化 |
| 2.3.3 方法验证 |
| 2.3.4 方法应用 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 方法优化结果与讨论 |
| 2.4.2 方法验证结果与讨论 |
| 2.4.3 方法运用 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 重组人源化单克隆抗体氧化修饰分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 主要实验材料 |
| 3.2.1 色谱柱 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 主要溶液配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 氧化修饰检测方法 |
| 3.3.2 氧化抗体峰的鉴定 |
| 3.3.3 方法优化 |
| 3.3.4 方法验证 |
| 3.3.5 方法运用 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 氧化峰鉴定 |
| 3.4.2 方法优化结果与讨论 |
| 3.4.3 方法验证结果与分析 |
| 3.4.4 方法运用 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 重组人源化单克隆抗体生物学活性分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 主要实验材料 |
| 4.2.1 主要实验设备 |
| 4.2.2 主要的试剂 |
| 4.2.3 主要的溶液配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 HUVEC细胞增殖抑制 |
| 4.3.2 分析方法优化 |
| 4.3.3 方法验证 |
| 4.3.4 自研批次和商业化批次单抗药物的检测 |
| 4.3.5 糖化修饰对生物学活性的影响 |
| 4.3.6 氧化修饰对生物学活性的影响 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 方法优化结果与讨论 |
| 4.4.2 方法验证结果与讨论 |
| 4.4.3 自研批次及商业化批次的检测 |
| 4.4.4 糖化修饰对生物学活性的影响 |
| 4.4.5 氧化修饰对生物学活性的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件 |
（3）聚乙二醇化重组人干扰素α2b的制备工艺及质量研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 蛋白质药物 |
| 1.1.1 蛋白质药物发展历程简介 |
| 1.1.2 我国蛋白质药物的开发现状 |
| 1.2 干扰素 |
| 1.2.1 α-干扰素 |
| 1.2.2 重组人干扰素α |
| 1.3 蛋白质类药物的修饰方法 |
| 1.3.1 蛋白质的定点突变 |
| 1.3.2 蛋白质的聚乙二醇(Polyethyleneglyeol,PEG)化修饰 |
| 1.3.3 蛋白质的脂肪酸链修饰 |
| 1.3.4 蛋白质的糖基化修饰 |
| 1.3.5 融合蛋白药物 |
| 1.3.6 微球及脂质体技术 |
| 1.4 聚乙二醇(Polyethyleneglyeol,PEG) |
| 1.4.1 聚乙二醇的发现 |
| 1.4.2 聚乙二醇的理化性质 |
| 1.4.3 不同空间结构聚乙二醇 |
| 1.5 聚乙二醇(Polyethyleneglyeol,PEG)化修饰 |
| 1.5.1 聚乙二醇修饰剂 |
| 1.5.2 聚乙二醇修饰位点 |
| 1.6 聚乙二醇(Polyethyleneglyeol,PEG)化干扰素 |
| 1.7 课题研究背景和意义 |
| 1.8 论文研究主要内容和技术方案 |
| 1.8.1 论文主要研究内容 |
| 1.8.2 技术方案 |
| 第二章 聚乙二醇化重组人干扰素α2b制备工艺研究 |
| 2.1 材料与仪器设备 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 材料 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.2 试验内容与方法 |
| 2.2.1 试验内容 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 修饰偶联反应条件的摸索与优化 |
| 2.3.2 聚乙二醇化重组人干扰素α2b的纯化 |
| 2.3.3 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的去除 |
| 2.3.4 游离聚乙二醇(PEG)的去除 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 聚乙二醇化重组人干扰素α2b理化性质研究 |
| 3.1 材料与仪器设备 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要材料 |
| 3.2 试验内容与方法 |
| 3.2.1 试验内容 |
| 3.2.2 试验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 PEG-rhIFNα2b的理化性质 |
| 3.3.2 PEG-rhIFNα2b的纯度分析 |
| 3.3.3 位置异构体的分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 聚乙二醇化重组人干扰素α2b稳定性研究 |
| 4.1 材料与仪器设备 |
| 4.1.1 主要仪器 |
| 4.1.2 主要材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 稳定性放样方法 |
| 4.2.2 检测方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 聚乙二醇化重组人干扰素α2b生物学活性研究 |
| 5.1 材料与仪器设备 |
| 5.1.1 主要仪器 |
| 5.1.2 主要材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 专属性 |
| 5.2.2 精密度 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 专属性检测结果 |
| 5.3.2 精密度测定结果 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 |
（4）抗人CD271单克隆抗体的制备和基于CRISPR/Cas9介导的基因定点整合技术的HEK293T稳定细胞株高效构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 .干细胞研究进展 |
| 1.1.1 .人间充质干细胞(MSC) |
| 1.1.2 .MSC表面标记分子及其靶向的应用 |
| 1.1.3 .CD271 的结构、功能及其应用 |
| 1.2 .杂交瘤技术制备单克隆抗体 |
| 1.3 .哺乳动物细胞表达系统在生物大分子药物研发中的应用 |
| 1.4 .基因定点整合技术在稳定细胞株构建中的研究进展 |
| 1.5 .立题依据和研究内容 |
| 1.5.1 .立题依据 |
| 1.5.2 .研究内容 |
| 第二章 CD271 抗原的制备与纯化 |
| 2.1 .材料和试剂 |
| 2.1.1 .实验材料 |
| 2.1.2 .主要仪器和耗材 |
| 2.1.3 .主要试剂 |
| 2.2 .实验方法 |
| 2.2.1 .p CD271T和 p CD271F质粒序列设计和构建 |
| 2.2.2 .CD271T-SUMO蛋白在原核系统中的表达条件优化 |
| 2.2.3 .CD271T-SUMO蛋白亲和色谱纯化 |
| 2.2.4 .SUMO酶切条件优化及CD271T蛋白的亲和色谱纯化 |
| 2.2.5 .CD271F蛋白在真核系统中的瞬转表达 |
| 2.2.6 .CD271F蛋白的亲和色谱纯化 |
| 2.3 .实验结果 |
| 2.3.1 .CD271T-SUMO抗原蛋白的亲和色谱纯化及鉴定 |
| 2.3.2 .CD271T-SUMO蛋白酶切反应鉴定及CD271T亲和色谱纯化 |
| 2.3.3 .CD271F抗原蛋白的亲和色谱纯化及鉴定 |
| 2.4 .本章小结 |
| 第三章 抗人CD271 单克隆抗体的筛选及鉴定 |
| 3.1 .材料及试剂 |
| 3.1.1 .实验材料 |
| 3.1.2 .主要仪器和耗材 |
| 3.1.3 .主要试剂 |
| 3.2 .实验方法 |
| 3.2.1 .CD271T抗原免疫小鼠 |
| 3.2.2 .小鼠饲养层细胞的准备 |
| 3.2.3 .PEG介导的sp2/0-Ag14 与脾脏B细胞的融合 |
| 3.2.4 .有限稀释筛选单克隆细胞 |
| 3.2.5 .腹水单克隆抗体的纯化及鉴定 |
| 3.2.6 .抗人CD271 小鼠腹水单克隆抗体的亚型鉴定 |
| 3.2.7 .抗人CD271 单克隆抗体与抗原的亲和力检测 |
| 3.2.8 .抗人CD271 单克隆抗体流式亲和力鉴定 |
| 3.2.9 .CD271-2 杂交瘤细胞株重轻链可变区基因的克隆 |
| 3.2.10 .抗人CD271-2 嵌合抗体质粒设计及亲和力检测 |
| 3.3 .实验结果 |
| 3.3.1 .p CD271T抗原免疫小鼠及杂交瘤的筛选鉴定 |
| 3.3.2 .抗人CD271 单克隆抗体亚型鉴定 |
| 3.3.3 .抗人CD271 单克隆细胞株的腹水抗体制备及鉴定 |
| 3.3.4 .抗人CD271 单克隆抗体的亲和力鉴定 |
| 3.3.5 .抗人CD271 单克隆抗体株CD271-2 质粒构建 |
| 3.3.6 .抗人CD271 单克隆抗体株CD271-2 重组蛋白亲和力检测 |
| 3.4 .本章小结 |
| 第四章 CRISPR/CAS9 介导的基因定点整合技术的HEK293T稳定细胞株高效构建 |
| 4.1 .材料及试剂 |
| 4.1.1 .实验材料 |
| 4.1.2 .主要仪器和耗材 |
| 4.1.3 .主要试剂 |
| 4.2 .实验方法 |
| 4.2.1 .sg RNA质粒的设计和构建 |
| 4.2.2 .T7E1 内切酶检测sg RNA编辑效率 |
| 4.2.3 .供体质粒的构建 |
| 4.2.4 .细胞培养、转染和筛选 |
| 4.2.5 .有限稀释筛选单克隆细胞及PCR鉴定 |
| 4.2.6 .Western Blotting鉴定CTLA4Ig表达 |
| 4.2.7 .ELISA鉴定克隆细胞株CTLA4Ig产量 |
| 4.3 .实验结果 |
| 4.3.1 .EGFP基因的HEK293T定点整合 |
| 4.3.2 .sg RNA的设计及编辑效率的检测 |
| 4.3.3 .CTLA4Ig供体质粒的构建 |
| 4.3.4 .细胞池的筛选和鉴定 |
| 4.3.5 .单克隆细胞的筛选和鉴定 |
| 4.3.6 .稳定细胞株CTLA4Ig产量一致性鉴定 |
| 4.4 .本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文和专利 |
（6）单克隆抗体KM113生物学活性检测及质量标准研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 单克隆抗体 |
| 1.1.1 治疗性单克隆抗体 |
| 1.1.2 抗体的基本结构 |
| 1.1.3 抗体的作用原理 |
| 1.1.4 单克隆抗体药物的副作用 |
| 1.2 类风湿性关节炎及其治疗 |
| 1.2.1 类风湿性关节炎临床特点 |
| 1.2.2 类风湿性关节炎治疗现状及常用药物 |
| 1.3 治疗类风湿性关节炎的代表性药物 |
| 1.3.1 抗CD80/86(T细胞) |
| 1.3.2 抗CD20抗体(B细胞) |
| 1.3.3 IL-1受体拮抗剂 |
| 1.3.4 IL-6及其受体拮抗剂 |
| 1.3.5 抗肿瘤坏死因子A单抗 |
| 1.4 KM113单克隆抗体 |
| 1.5 KM113单克隆抗体药理作用及作用机制 |
| 1.6 KM113单克隆抗体生物类似药发展历史 |
| 1.6.1 国外研究进展 |
| 1.6.2 国内研究进展 |
| 1.6.3 KM113单抗类似药研发现状 |
| 1.7 KM113对照品 |
| 1.7.1 对照品(CKP-A20150704)的研制 |
| 1.7.2 KM113单抗对照品部分质量研究 |
| 1.7.3 对照品(CKP-A20150704)的质量评价 |
| 1.8 课题概述 |
| 第二章 KM113单克隆抗体结合活性检测方法研究 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 溶液试剂的配制 |
| 2.2.2 抗原和抗体浓度的初步确定 |
| 2.3 方法学验证 |
| 2.3.1 实验步骤 |
| 2.3.2 专属性 |
| 2.3.3 精密度 |
| 2.3.4 准确度 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 结合活性方法初步确定 |
| 2.4.2 方法学验证结果 |
| 2.4.2.1 专属性 |
| 2.4.2.2 KM113抗体结合活性曲线线性关系 |
| 2.4.2.3 精密度 |
| 2.4.2.4 准确度 |
| 2.4.3 讨论 |
| 第三章 KM113单克隆抗体细胞活性检测方法研究 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 靶细胞密度的初步确定 |
| 3.2.2 TNF-α浓度的初步确定 |
| 3.2.3 ActD浓度的初步确定 |
| 3.3 方法学验证 |
| 3.3.1 实验步骤 |
| 3.3.2 专属性 |
| 3.3.3 准确度 |
| 3.3.4 精密度 |
| 3.3.4.1 重复性 |
| 3.3.4.2 中间精密度 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 细胞活性方法初步确定 |
| 3.4.1.1 靶细胞密度的初步确定 |
| 3.4.1.2 TNF-α浓度的初步确定 |
| 3.4.1.3 ActD浓度的初步确定 |
| 3.4.2 方法学验证结果 |
| 3.4.2.1 专属性 |
| 3.4.2.2 准确度 |
| 3.4.2.3 精密度 |
| 3.4.3 讨论 |
| 第四章 KM113单克隆抗体生物学活性质量标准的研究 |
| 4.1 KM113单抗相对结合活性质量标准研究 |
| 4.1.1 相对结合活性测定实验方法 |
| 4.1.2 多批次样品检测 |
| 4.1.3 质量标准制定 |
| 4.2 KM113单抗体外细胞生物学活性质量标准研究 |
| 4.2.1 体外细胞活性测定实验方法 |
| 4.2.2 多批次样品检测 |
| 4.2.3 质量标准制定 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 相对结合活性质量标准研究 |
| 4.3.1.1 相对结合活性样品检测结果及分析 |
| 4.3.1.2 相对结合活性质量标准 |
| 4.3.2 体外细胞生物学活性质量标准研究 |
| 4.3.2.1 体外细胞生物学活性样品检测结果及分析 |
| 4.3.2.2 体外细胞生物学活性质量标准 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文及缩略语对照表 |
| 致谢 |
| 作者和导师简介 |
| 附件 |
（7）我国重组药物质量控制技术体系的建立和应用研究（论文提纲范文）
| 1 质量标准研究依据及法规要求 |
| 2 质量标准及其检定方法研究建立 |
| 3 标准品研究及对照品鉴定 |
| 4 重组药物历年检验结果分析 |
| 5 问题与展望 |
（8）细胞增殖法检测rhCNTF生物活性方法的建立和验证（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 rhCNTF样品和CNTF标准品 |
| 1.2.2 TF-1.CN5a.l细胞 |
| 1.2.3 TF-1.CN5a.1细胞增殖法[9-10]的建立 |
| 1.2.4 细胞增殖法的测定范围 |
| 1.2.5 细胞增殖法的专属性 (特异性) |
| 1.2.6 细胞增殖法的重复性 |
| 2 结果 |
| 2.1 TF-1.CN5a.1细胞增殖法的建立 |
| 2.2 测定范围的验证 |
| 2.3 专属性 (特异性) 的验证 |
| 2.4 检测结果重复性的验证 |
| 3 讨论 |
（9）重组人干扰素α-2b直肠栓的制备及其在猕猴体内生物利用度研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 英文缩写词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 干扰素理化性质 |
| 1.2 干扰素生物学效应 |
| 1.3 干扰素的临床应用 |
| 1.4 干扰素的国内使用概况 |
| 1.5 生物技术药物新剂型的给药途径 |
| 1.6 直肠栓剂在生物大分子中的应用情况 |
| 1.7 干扰素新制剂研究进展 |
| 1.8 干扰素栓研究进展 |
| 1.9 本实验的研究内容 |
| 参考文献 |
| 第2章 重组人干扰素 α-2b 原液制备工艺研究 |
| 2.1 实验仪器和材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第3章 重组人干扰素α2b 原液质量研究 |
| 3.1 实验仪器和材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第4章 重组人干扰素 α-2b 栓制备工艺研究 |
| 4.1 实验仪器和材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 制剂处方制定的依据 |
| 4.4 制剂处方 |
| 4.5 重组人干扰素 α-2b 栓制备工艺流程图 |
| 4.6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第5章 重组人干扰素 α-2b 栓的质量研究 |
| 5.1 实验仪器和材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第6章 重组人干扰素 α-2b 栓稳定性实验研究 |
| 6.1 实验仪器和材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第7章 重组人干扰素 α-2b 栓猕猴体内药代动力学研究 |
| 7.1 实验仪器和材料 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第8章 结论 |
| 攻读博士期间发表论文及专利 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
（10）重组人干细胞因子中试工艺研究（论文提纲范文）
| 1 材 料 |
| 1.1 菌株与载体 |
| 1.2 主要材料与试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方 法 |
| 2.1 工程菌发酵 |
| 2.2 rhSCF纯化 |
| 2.2.1 包涵体的分离纯化 |
| 2.2.2 包涵体复性 |
| 2.2.3 分离纯化 |
| 2.3 检 定 |
| 2.3.1 蛋白含量测定 |
| 2.3.2 SDS-PAGE法测定蛋白纯度和相对分子量 |
| 2.3.3 高压液相法 (HPLC) 测定蛋白纯度 |
| 2.3.4 生物活性测定 |
| 2.3.5 等电点测定 |
| 2.3.6 残留外源性DNA、抗生素活性及内毒素测定 |
| 2.3.7 免疫印迹实验 |
| 2.3.8 重组蛋白的稳定性考察 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 rhSCF工程菌菌体产量及重组目的蛋白表达量 |
| 3.2 rhSCF的分离纯化 |
| 3.3 rhSCF测定 |
| 3.3.1 纯度测定 |
| 3.3.2 生物活性测定 |
| 3.3.3 等电点测定 |
| 3.3.4 重组蛋白的残留外源性DNA、抗生素活性、内毒素及免疫印迹实验 |
| 3.3.5 重组蛋白的稳定性考察 |
| 4 讨 论 |
四、重组人干细胞因子生物学活性测定的质量控制研究（论文参考文献）
- [1]细胞产品质量控制与质量管理[J]. 马洁,刘彩霞,谭琴,童春容,吴迪,昌晓红,程洪艳,王征旭,游嘉,武立华,程金莲,王少华,曹彩. 药物评价研究, 2021(02)
- [2]重组人源化单克隆抗体翻译后修饰与生物学功能研究[D]. 孙开青. 华南理工大学, 2020(03)
- [3]聚乙二醇化重组人干扰素α2b的制备工艺及质量研究[D]. 董世建. 合肥工业大学, 2020(02)
- [4]抗人CD271单克隆抗体的制备和基于CRISPR/Cas9介导的基因定点整合技术的HEK293T稳定细胞株高效构建[D]. 杨慧. 上海交通大学, 2020(01)
- [5]生物制品监管论坛 为生物制品把好质量关[J]. 王晓冬,李硕. 中国食品药品监管, 2019(11)
- [6]单克隆抗体KM113生物学活性检测及质量标准研究[D]. 焦茜. 北京化工大学, 2019(02)
- [7]我国重组药物质量控制技术体系的建立和应用研究[J]. 饶春明. 中国药学杂志, 2016(13)
- [8]细胞增殖法检测rhCNTF生物活性方法的建立和验证[J]. 李萍,陆俭,马亚茹,应莲芳,蒋琳. 药物生物技术, 2012(01)
- [9]重组人干扰素α-2b直肠栓的制备及其在猕猴体内生物利用度研究[D]. 段明华. 吉林大学, 2010(08)
- [10]重组人干细胞因子中试工艺研究[J]. 刘玉应,邓小晨,刘忠荣,吴洽庆,陈松森. 应用与环境生物学报, 2008(02)