一、压力超负荷心肌肥厚过程中血清TNF-α、IL-1β、IL-6的变化（论文文献综述）
赵淋淋[1]（2021）在《有氧运动调节AMPK相关信号通路减缓TAC诱导病理性心肌肥厚的机制研究》文中研究指明研究目的心力衰竭作为许多心血管疾病终端末期心脏功能失代偿的临床综合征,已经成为世界范围内的主要死亡原因。虽然心力衰竭的诊断和治疗已经取得了一些进展,但死亡率仍旧居高不下,因此寻找改善心血管功能的有效治疗靶点和干预手段至关重要。适度的有氧运动训练对心血管系统有许多益处。适当的运动训练可以减低多种心血管疾病的发病率,并同时改善心室功能。先前研究表明,适度运动训练可以增强心力衰竭病人的运动耐量、改善其血管内皮功能、并有效抑制病人的交感神经兴奋性,从而提高病人心输出量,改善左室功能和神经激素水平,因此认为运动训练对心衰有一定减缓作用,但有氧运动减缓心力衰竭的分子机制尚不清楚。因此,本研究通过四周有氧运动（在体实验）结合血管紧张素干预心肌细胞系（离体实验）,探究有氧运动通过AMPK（AMP-activated protein kinase）相关信号通路减缓病理性心肌肥厚的作用以及分子机制,为减缓心力衰竭提供坚实的理论依据。研究方法1、在体实验,本课题分别采用C57BL/6J小鼠以及AMPKα2基因敲除小鼠通过主动脉弓缩窄术（transverse aortic constriction,TAC）建立病理性心肌肥厚模型,术后一周进行运动预适应一周,有氧运动干预四周,通过小鼠超声仪评价小鼠心功能。通过马松染色分析、天狼星红染色,偏振光观察评价小鼠心肌纤维化状况。通过麦胚凝集素（wheat germ agglutinin,WGA）免疫荧光染色评价小鼠心肌细胞面积。使用Western blot检测小鼠心力衰竭标志性蛋白（ANP）,心肌纤维化相关蛋白（collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、MMP-9）,促纤维化信号通路（TGF-β/Smad、NLRP3/IL-1β）,AMPK介导的自噬关键蛋白（p-AMPKα/AMPKα、p-mTOR/T-mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1 和 p62）,硫化氢合成酶（CBS、CSE）。采用ZnAc捕捉法进行H2S提取,并使用酶标仪检测内源性H2S含量。2、离体实验,本课题组采用H9C2心肌细胞系,进行传代后采用血管紧张素（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）干预建立心肌细胞肥大模型,采用NaHS干预肥大心肌细胞,并进行AMPK抑制剂（CompoundC dihydrochloride,CC）,自噬抑制剂（3-Methyladenine,3-MA）干预实验,干预实验结束后,采用WGA免疫荧光实验评价心肌细胞大小,通过Western blot检测促纤维化信号通路（NLRP3/IL-1β）,AMPK 介导的自噬关键蛋白（p-AMPKα/AMPKα、p-mTOR/T-mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ,Beclin-1 和 p62）。研究结果第一部分、有氧运动对TAC诱导C57BL/6J小鼠病理性心肌肥厚的影响1、与Sham组相比,TAC导致C57BL/6J小鼠心脏质量（HW）、左心室质量（LV MASS）、左心室重量/体重比（LV/BW）、左心室重量/胫骨长度比（LV/TL）、心脏重量/体重比（HW/BW）和心脏质量/胫骨长度比（HW/TL）明显增高。与TAC组相比,运动训练四周显着减轻了 TAC诱导的C57BL/6J小鼠的心脏质量（HW）、左心室质量（LVMASS）、左心室重量/体重比（LV/BW）、左心室重量/胫骨长度比（LV/TL）、心脏重量/体重比（HW/BW）和心脏质量/胫骨长度比（HW/TL）的增加。而四组C57BL/6J小鼠的质量以及胫骨长度无显着性差异。2、与Sham组小鼠相比,TAC组左室舒张末期直径（LVEDD）和左室收缩末期直径（LVESD）显着增加,缩短分数（FS）和射血分数（EF）明显降低。与Sham+Ex组比较,TAC+Ex组小鼠左室舒张末期直径（LVEDD）和收缩末期直径（LVESD）增加,缩短分数（FS）和射血分数（EF）显着下降。与TAC组比较,TAC+Ex组小鼠左室舒张末期直径（LVEDD）和左室收缩末期直径（LVESD）显着减小,缩短分数（FS）和射血分数（EF）显着增加。3、与Sham组小鼠心肌细胞横截面积相比,TAC组小鼠心肌细胞横截面积明显增大。TAC+Ex组小鼠心肌细胞横截面积比与Sham+Ex组较大。而TAC+Ex组小鼠心肌横截面积与TAC组相比,显着性减小。4、与Sham+Ex组相比,TAC+Ex组ANP蛋白也成显着增加,但是有氧运动五周后的TAC+Ex组与TAC组相比,TAC+Ex组ANP蛋白显着降低。5、与Sham组相比,TAC组C57BL/6J小鼠心肌胶原纤维显着性增加（p<0.01）。与Sham+Ex组相比,TAC+Ex组心肌胶原纤维也显着性增加（p<0.01）,但TAC+Ex组心肌胶原纤维与TAC组相比,显着性降低（p<0.01）。,与Sham组相比,TAC组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白水平显着性增加（p<0.01）,而TAC+Ex组Ⅰ型胶原蛋白水平显着性高于与Sham+Ex组（p<0.05）,两组的Ⅲ型胶原蛋白水平无显着性差异。但TAC+Ex组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白水平比TAC组显着性降低(p<0.01。与Sham组相比,TAC组MMP-9蛋白水平显着升高（p<0.01）。与TAC组相比,有氧运动训练四周后MMP-9蛋白水平显着降低（p<0.01）（图 1-6A,D）。6、与Sham组比较,TAC组TGF-β、Smad2/3磷酸化和Smad4蛋白表达显着升高（p<0.01）,而与TAC小鼠相比,四周有氧运动训练后TAC+Ex组TGF-β、Smad2/3磷酸化和Smad4蛋白表达显着降。7、与Sham组相比,TAC组NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β蛋白水平显着性增加（p<0.01）,而Pro.caspase-1也呈上升趋势,但没有显着性差异。与Sham+Ex组相比,TAC+Ex组中c1.caspase-1蛋白水平显着性增加（p<0.01）,而NLRP3,Pro.caspase-1,IL-1β蛋白水平也呈升高趋势,但没有显着性差异。与TAC组相比,TAC+Ex 组 NLRP3（p<0.01）,c1.caspase-1（p<0.01）,IL-1β（p<0.05）蛋白水平显着性降低,而Pro.caspase-1蛋白水平呈下降趋势,但没有显着性差异。8、与Sham组相比,TAC显着降低了 LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值以及Beclin-1蛋白表达水平,增加了 p62蛋白表达水平,说明压力负荷过载抑制了自噬水平的升高。与TAC组相比,TAC+Ex组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值以及Beclin-1蛋白表达水平增加,p62的蛋白表达下降。与Sham组相比,TAC组的p-AMPKα/AMPKα以及p-mTOR/T-mTOR蛋白表达率显着加,与TAC组相比,TAC+Ex组p-AMPKα/AMPKα蛋白表达率显着性增加,而p-mTOR/T-mTOR蛋白表达率显着降低。9、与Sham组相比,TAC组左室组织中CBS（P<0.05）和CSE（P<0.01）蛋白表达均显着降低。运动训练四周后,TAC+Ex组CBS（P<0.05）和CSE（P<0.01）蛋白水平较TAC组明显升高。此外,与Sham组相比,TAC诱导的C57BL/6J小鼠心肌组织中内源性H2S含量显着性降低,而有氧运动显着增加了 TAC诱导的C57BL/6J小鼠心肌组织中内源性H2S含量。第二部分、AMPK α2基因敲除阻滞有氧运动减缓病理性心肌肥厚的作用1、与KO+Sham组相比,KO+TAC组小鼠心脏质量（HW）、左心室质量（LV MASS）、左心室重量/体重比（LV/BW）、左心室重量/胫骨长度比（LV/TL）、心脏重量/体重比（HW/BW）和心脏质量/胫骨长度比（HW/TL）明显升高而与KO+Sham+Ex相比,TAC诱导的AMPKα2-/-小鼠的心脏质量（HW）、左心室质量（LVMASS）、左心室重量/体重比（LV/BW）、左心室重量/胫骨长度比（LV/TL）、心脏重量/体重比（HW/BW）和心脏质量/胫骨长度比（HW/TL）显着增加。而与KO+TAC组相比,KO+TAC+Ex组AMPKα2-/-小鼠的心脏质量（HW）、左心室质量（LVMASS）、左心室重量/体重比（LV/BW）、左心室重量/胫骨长度比（LV/TL）、心脏重量/体重比（HW/BW）和心脏质量/胫骨长度比（HW/TL）未显着降低。四组AMPKα2-/-小鼠的质量以及胫骨长度无显着性差异。2、与KO+Sham组小鼠相比,KO+TAC组左室舒张末期直径（LVEDD）和缩末期直径（LVESD）显着增加,缩短分数（FS）和射血分数（EF）明显降低,与KO+Sham+Ex组比较,KO+TAC+Ex组小鼠左室舒张末期直径（LVEDD）和收缩末期直径（LVESD）增加,缩短分数（FS）和射血分数（EF）显着下降。与KO+TAC组比较,KO+TAC+Ex组小鼠左室舒张末期直径（LVEDD）和左室收缩末期直径（LVESD）未显着减小,缩短分数（FS）和射血分数（EF）未显着增加。3、与KO+Sham组小鼠心肌细胞横截面积相比,KO+TAC组小鼠心肌细胞横截面积明显增大。KO+TAC+Ex组小鼠心肌细胞横截面积比KO+Sham+Ex组较大。而KO+TAC+Ex组小鼠心肌横截面积与KO+TAC组相比,心肌细胞面积未显着性减小。4、KO+TAC组与KO+Sham组相比,ANP蛋白显着性升高,与KO+Sham+Ex组相比,KO+TAC+Ex组ANP蛋白也成显着增加,但是有氧运动五周后的KO+TAC+Ex组与KO+TAC组相比,ANP蛋白水平未显着降低。5、与KO+Sham组相比,KO+TAC组AMPKα2-/-小鼠心肌胶原纤维显着性增加。与KO+Sham+Ex组相比,KO+TAC+Ex组心肌胶原纤维也显着性增加,但KO+TAC+Ex组心肌胶原纤维与KO+TAC组相比,未显着性降低。与KO+Sham组相比,KO+TAC组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白水平显着性增加,而KO+TAC+Ex组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白水平显着性高于KO+Sham+Ex组,但KO+TAC+Ex组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白水平与KO+TAC组相比,未显着性降低。KO+TAC组MMP-9蛋白水平显着升高。与KO+TAC组相比,有氧运动训练四周后MMP-9蛋白水平未显着降低。6、与KO+Sham组比较,KO+TAC组TGF-β、Smad2/3磷酸化和Smad4蛋白表达显着升高,而与KO+TAC小鼠相比,四周有氧运动训练后KO+TAC+Ex组TGF-β、Smad2/3磷酸化和Smad4蛋白表达未显着降低。7、与 KO+Sham 组相比,KO+TAC 组 NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β 蛋白水平显着性增加,而Pro.caspase-1也呈上升趋势,但没有显着性差异。与KO+Sham+Ex 组相比,KO+TAC+Ex 组中 NLRP3,Pro.caspase-1,IL-1β 蛋白水平也显着性升高。与KO+TAC组相比,KO+TAC+Ex组NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β蛋白水平未显着性降低。8、与KO+Sham组相比,KO+TAC显着降低了 LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值以及Beclin-1蛋白表达水平,增加了 p62蛋白表达水平。与KO+TAC组相比,KO+TAC+Ex组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值以及Beclin-1蛋白表达水平未显着增加,p62的蛋白表达未显示下降。与KO+Sham组相比,KO+TAC组的p-mTOR/T-mTOR蛋白表达率显着加,与KO+TAC组相比,KO+TAC+Ex组p-mTOR/T-mTOR蛋白表达率未显着降低。9、与KO+Sham组相比,KO+TAC组左室组织中CBS和CSE蛋白表达均显着降低。运动训练四周后,KO+TAC+Ex组CBS（P<0.01）和CSE（P<0.05）蛋白水平较,KO+TAC组明显升高。此外,与KO+Sham组相比,TAC诱导的AMPKα2小鼠心肌组织中内源性H2S含量显着性降低,而有氧运动显着增加了 TAC诱导的AMPK α2小鼠心肌组织中内源性H2S含量。第三部分、AMPK介导的H2S及细胞自噬在病理性心肌肥厚中的机制研究1、与control相比,AngⅡ诱导的心肌细胞面积显着性增大,而与AngⅡ组相比,NaHS干预显着减小心肌细胞的肥大面积。与control相比,降低了 LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比例和Beclin-1蛋白表达,增加了 p62蛋白表达（P<0.01）,与AngⅡ组相比,外源H2S增加LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达率,增加Beclin-1蛋白质的表达,同时p62的蛋白表达下降。与control相比,AngⅡ组p-AMPK/AMPK和p-mTOR/mTOR蛋白表达率增加。与AngⅡ组相比,外源H2S干预进一步增加了 p-AMPK/AMPK蛋白表达率,而降低了 p-mTOR/mTOR蛋白表达率。与control 相比,AngⅡ 组,NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β 蛋白水平显着性增加（p<0.01）,而Pro.caspase-1没有显着性差异。与AngⅡ组相比,外源性H2S降低NLRP3（p<0.05）,c1.caspase-1,IL-1β 蛋白水平,而 Pro.caspase-1 蛋白水平呈下降趋势,但没有显着性差异。2、与control组相比,AngⅡ组,LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达比以及Beclin-1蛋白表达水平降低,p62的蛋白表达显着升高。与AngⅡ组相比,外源性NaHS溶液显着增加LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达比以及Beclin-1蛋白表达水平,降低p62的蛋白水平表达。3-MA作为自噬抑制剂能浓度依赖性的降低LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达比以及Beclin-1蛋白表达水平,同时升高P62蛋白水平,与NaHS+AngⅡ相比。与control相比,AngⅡ诱导的心肌细胞面积显着性增大,而与AngⅡ组相比,NaHS干预显着减小心肌细胞的肥大面积。与NaHS+AngⅡ组,自噬抑制剂干预后,外源性硫化氢对肥大心肌细胞的减少作用消除。与control相比,AngⅡ组,NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β 蛋白水平显着性增加,而 Pro.caspase-1 没有显着性差异。与AngⅡ组相比,外源性H2S降低NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β蛋白水平,而Pro.caspase-1但没有显着性差异。与NaHS+AngⅡ组相比,3-MA+NaHS+AngⅡ 组 NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β 蛋白水平显着性增加。3、与 control 相比,AngⅡ 组 p-AMPK/AMPK 和 p-mTOR/mTOR 蛋白表达率增加。与AngⅡ组相比,外源H2S干预进一步增加了 p-AMPK/AMPK蛋白表达率,而降低了 p-mTOR/mTOR蛋白表达率。CC作为AMPK抑制剂能浓度依赖性的降低p-AMPK/AMPK的蛋白表达比,同时p-mTOR/mTOR蛋白表达率增加,与NaHS+AngⅡ相比。提示,10uMCC可显着性抑制AMPK蛋白活性。与control相比,AngⅡ诱导的心肌细胞面积显着性增大,而与AngⅡ组相比,NaHS干预显着减小心肌细胞的肥大面积。与NaHS+AngⅡ组,AMPK抑制剂干预后,外源性H2S对肥大心肌细胞的减少作用消除。与control组相比,AngⅡ组,LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达比以及Beclin-1蛋白表达水平降低,p62的蛋白表达显着升高。与AngⅡ组相比,外源性H2S显着增加LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达比以及Beclin-1蛋白表达水平,降低p62的蛋白水平表达。与NaHS+AngⅡ相比,CC+3-MANaHS+AngⅡ组LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达比以及Beclin-1蛋白表达水平显着下降,同时升高P62蛋白水平提高。与control相比,AngⅡ组,NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β蛋白水平显着性增加,而Pro.caspase-1没有显着性差异。与 AngⅡ 组相比,外源性 H2S 降低 NLRP3,c1.caspase-1,IL-1 β（p<0.01）蛋白水平,而Pro.caspase-1没有显着性差异。与NaHS+AngⅡ组相比,CC+NaHS+AngⅡ 组 NLRP3,c1.caspase-1,IL-1β 蛋白水平显着性增加。研究结论1、本实验研究证实TAC手术诱导的压力超负荷可导致C57BL/6J小鼠心脏以及左心室重量增加、小鼠心肌细胞横截面积增大,并伴有心肌组织纤维化的发生,以及小鼠心脏的收缩和舒张功能下降。四周有氧运动干预可以提高压力超负荷诱导的病理性心肌肥厚C57BL/6J小鼠的射血分数,改善心功能障碍,提高心肌组织内源性H2S产生,抑制心肌细胞肥大以及减轻心肌纤维化,激活AMPK介导的细胞自噬,抑制NLRP3/IL-1β蛋白信号通路的激活,在一定程度上减缓了C57BL/6J小鼠病理性心肌肥厚的发展,从而对C57BL/6J小鼠心脏组织起到一定的保护作用。2、AMPKα2基因敲除阻滞有氧运动训练干预减轻TAC诱导的心肌损伤,其可能机制是AMPKα2敲除阻滞有氧运动激活心肌细胞自噬,从而造成对NLRP3/IL-1β蛋白信号通路的抑制不起作用。AMPKα2基因敲除未阻滞有氧运动干预增加心肌组织内源性H2S产生。3、外源性H2S激活AMPK,降低mTOR活性表达,激活心肌细胞自噬,抑制NLRP3/IL-1β信号通路蛋白水平表达,抑制AngⅡ诱导的心肌肥大从而减缓心肌肥厚,提示我们,有氧运动通过增加心肌组织内源性H2S产生,激活细胞自噬,抑制NLRP3/IL-1β蛋白信号通路的激活,从而预防病理性肥厚是由AMPKα2介导的。
王耀振[2]（2021）在《基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制》文中指出二型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）是全球范围内的主要健康问题,其对血管可产生严重的危害作用,即糖尿病血管病变,这也是导致T2DM患者致残致死的主要原因。胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）作为T2DM的典型特点,不仅是促进其发生发展的关键因素,还是代谢综合征导致内皮功能障碍的重要原因。内皮是血管的第一道屏障,承担多种自分泌、旁分泌和内分泌功能,而内皮功能障碍是血管功能障碍的早期致病事件,其与IR相互促进,共同在糖尿病心血管并发症中发挥了重要作用。肾素血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）是一种具有内分泌特点的肽能系统,主要负责维持血压和水电解质的平衡,其中血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）/血管紧张素II（angiotensin II,Ang II）/血管紧张素1型受体（angiotensin type 1 receptor,AT1R）轴在糖尿病及其并发症的发生发展中起到了重要作用,该轴的关键效应分子-Ang II,参与多种病理生理过程,包括氧化应激、炎症反应、纤维化、肥大和内皮功能障碍等。血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2,ACE2）/血管紧张素1-7[angiotensin-（1-7）,Ang-（1-7）]/Mas轴拮抗了ACE/Ang II/AT1R轴的功能,其保护作用不仅依赖于对Ang II的降解,还依赖于生成Ang-（1-7）作用于Mas所产生的抗氧化、抗炎、抗肥大、血管舒张及改善内皮功能障碍等作用。尽管有研究表明ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴可改善代谢IR,并且Ang-（1-7）可改善db/db小鼠内皮功能障碍和Ang II诱导的内皮细胞IR,但ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴与内皮IR的相关研究仍鲜有报道,因此进一步研究其与内皮细胞IR的关系有助于深入理解IR的分子机制,从而以新的角度防治糖尿病心血管并发症。人参皂苷Rc是原人参二醇组皂苷的单体成分并且是人参皂苷的主要成分之一,有关人参皂苷Rc药理活性的研究相对较少,仅有少数研究报道了其具有强大的抗炎和抗氧化活性,而人参皂苷Rc对糖尿病心血管并发症是否具有潜在的保护作用尚不清楚。其同分异构体人参皂苷Rb2与人参皂苷Rb3已被证实具有显着的心血管保护作用,并且还有研究表明了人参皂苷与RAS具有密切关系。鉴于炎症和氧化应激是导致IR的关键机制以及ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴在心血管疾病中的重要保护作用,我们推测人参皂苷Rc可能通过激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴改善内皮IR与内皮功能障碍,故开展此研究对其进行初步验证。我们首先应用高糖（high glucose,HG）建立了人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）IR模型（30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h）。实验结果显示,HG对HUVECs的存活率和形态无明显影响;HG可显着降低HUVECs的NO分泌含量并升高ET-1 mRNA水平,提示其破坏了血管舒缩因子的平衡;HG可显着降低HUVECs的p-IRS1Tyr896、p-PI3K p85Tyr607、p-Akt Ser473及p-eNOSSer1177水平并升高p-IRS1Ser307水平,提示其损害了胰岛素信号转导;HG可显着减少HUVECs的ACE2及Mas蛋白表达,提示其可能损害了ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴的保护作用。以上结果表明HG成功诱导HUVECs IR并可减少ACE2及Mas蛋白表达。我们进而加入人参皂苷Rc（25、50 mmol/L）与HG同步处理,观察其对HUVECs IR是否具有改善作用。实验结果显示,人参皂苷Rc可显着升高HUVECs的NO分泌含量并降低ET-1 mRNA水平,提示其纠正了血管舒缩因子的失衡;人参皂苷Rc可减少HUVECs的ROS产生,显着降低培养液上清MDA含量并升高SOD活性,提示其增强了HUVECs的抗氧化应激能力;人参皂苷Rc可显着降低HUVECs的TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA水平,提示其增强了HUVECs的抗炎能力;人参皂苷Rc可显着降低HUVECs培养液上清Ang II含量,进一步升高Ang-（1-7）含量,增加ACE2及Mas蛋白表达,而HG或人参皂苷Rc对ACE2及Mas mRNA水平无明显影响,提示人参皂苷Rc可通过非转录调控方式激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴;人参皂苷Rc可显着升高HUVECs的p-IRS1Tyr896、p-PI3K p85Tyr607、p-AktSer473及p-eNOSSer1177水平并降低p-IRS1Ser307水平,提示其恢复了胰岛素信号转导;人参皂苷Rc可显着减少NOX2蛋白表达,降低p-IKKβSer177/181、p-JNKThr183/Tyr185及p-NF-κB p65Ser536水平,提示其抑制了IR相关的氧化应激和炎症信号。以上结果表明,人参皂苷Rc可能通过抗氧化、抗炎和上调ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴改善内皮IR。为进一步明确人参皂苷Rc改善内皮IR的潜在机制,我们应用ACE2特异性抑制剂MLN-4760（100 nmol/L）与HG及人参皂苷Rc同步处理。实验结果显示,MLN-4760可显着抑制人参皂苷Rc纠正血管舒缩因子失衡、抗炎、激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴、恢复胰岛素信号转导及抑制IR相关氧化应激和炎症信号的作用;然而,MLN-4760未能抑制人参皂苷Rc减少HUVECs的ROS产生、降低培养液上清MDA含量并升高SOD活性的作用,提示人参皂苷Rc具有独立于ACE2的抗氧化应激能力。以上结果表明,人参皂苷Rc的抗氧化及抗炎作用一定程度上依赖于上调ACE2,并且其通过上调ACE2改善了内皮IR。基于体外实验结果,我们应用T2DM模型的db/db小鼠和MLN-4760,进一步观察人参皂苷Rc是否对在体的内皮功能障碍同样具有改善作用及其机制是否同样依赖于上调ACE2。实验结果显示,人参皂苷Rc对db/db小鼠体重、空腹血糖、血清脂质（TC、TG、LDL-C、HDL-C）及胰岛素含量无明显影响,提示其无降血糖及调血脂的作用;人参皂苷Rc可显着降低db/db小鼠血清TNF-α含量,提示其在体内同样具有抗炎作用,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc对db/db小鼠血清Ang II、Ang-（1-7）及主动脉Ang-（1-7）含量无明显影响,但可显着降低主动脉Ang II含量并增加ACE2及Mas蛋白表达,提示其在体内同样可上调ACE2及Mas,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc可显着改善db/db小鼠胸主动脉内皮依赖性舒张并恢复Akt/eNOS信号转导,提示其在体内可改善内皮功能,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc可显着减少db/db小鼠主动脉NOX2及NOX4蛋白表达,提示其在体内同样具有抗氧化作用,而MLN-4760可一定程度拮抗这种作用。以上结果表明,人参皂苷Rc可改善db/db小鼠主动脉内皮功能障碍,其机制可能更依赖于降解Ang II而不是生成Ang-（1-7）,且不依赖于对血糖和血脂的调节。综上所述,本研究从细胞水平和整体动物水平上,证实了人参皂苷Rc可通过上调ACE2蛋白改善HUVECs IR及db/db小鼠内皮功能障碍,不仅发现了人参皂苷Rc的新作用及其潜在机制,还为防治糖尿病心血管并发症提供了新的视角。
甘家丽[3]（2021）在《基于代谢组学的生脉饮治疗慢性心力衰竭抑制心肌纤维化的机制研究》文中提出目的气阴两虚证是慢性心力衰竭（CHF）的重要证型,生脉饮（SMY）是治疗气阴两虚证的经典名方。本课题组前期研究结果表明,SMY可显着改善CHF模型大鼠的心功能,然其作用机制尚未明确。故本研究拟在体复制CHF大鼠模型,在明确SMY治疗CHF,抑制心肌纤维化的基础上,借助代谢组学技术探究其抑制心肌纤维化进而治疗CHF的机制,为CHF基础研究及临床治疗提供实验依据,丰富生脉饮益气养阴的科学内涵。方法1.采用“左冠状动脉前降支结扎术”结合“力竭式游泳”复制CHF模型,以SMY作为研究药物、沙库巴曲缬沙坦钠片（S）作为阳性对照药,以心功能、血清NT-pro BNP水平、HE染色和Masson染色四者相结合鉴定CHF模型并初步评价药效;以血清半乳糖凝集素3（Gal-3）水平结合心肌纤维化关键因子CollagenⅠ、MMP-2/3/9和TIMP-2的m RNA和蛋白表达水平明确SMY治疗CHF,抑制心肌纤维化的药效。2.采用UPLC-Q/TOF-MS技术采集血清代谢数据,利用多元统计方法进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判断分析（OPLS-DA）,得到变量权重（VIP）进行t检验,筛选VIP>1且P<0.05的物质作为CHF模型大鼠的疾病代谢标志物。对比分析SMY干预后CHF模型大鼠的回调标志物,以此作为SMY治疗CHF,抑制心肌纤维化的药物靶点代谢标志物,结合Metabo Analyst5.0网站映射成集并绘制代谢通路图。同时,将SMY的靶点代谢标志物与NT-pro BNP和Gal-3分别进行Pearson相关性分析,最终得到SMY治疗CHF抑制心肌纤维化的潜在靶点。采用ELISA、RT-q PCR和Western blotting法验证预测靶点,阐明SMY治疗CHF抑制心肌纤维化的作用机制。结果1.“左冠状动脉前降支结扎术”结合“力竭式游泳”可复制稳定可靠的CHF模型以心功能、血清NT-pro BNP水平、HE染色和Masson染色相结合鉴定CHF模型,发现Model组大鼠的左室射血分数（LVEF）较Sham组显着降低（P<0.01）且均≤45%,Model组大鼠血清NT-pro BNP的水平较Sham组显着升高（P<0.01）;HE染色后形态学观察发现:Sham组大鼠心肌形态结构基本正常,肌纤维排列整齐、着色均匀,未见炎细胞浸润。Model组大鼠左室前壁（低倍镜下）存在明显的陈旧性心肌梗死灶,残存肌纤维排列紊乱,其间分布大量结缔组织;（高倍镜下）心肌细胞显着减少、纤维细胞显着增多,纤维细胞之间可见炎细胞浸润。Masson染色后形态学观察发现,Sham组大鼠心肌细胞间隙仅见少量胶原纤维;心肌形态结构基本正常。Model组大鼠左心室前壁心肌组织可见大片被苯胺蓝着蓝色的心肌胶原纤维,呈条索状分布,期间夹杂少量排列不规则的、残存的心肌细胞。2.生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的药效评价2.1生脉饮改善CHF大鼠的精神状态和症状与Sham组相比,Model组大鼠精神状态较差,呼吸频率较快,四肢出现不同程度的水肿,抓取时反抗意识强烈,但反抗力量较弱;与Model组相比,SMY组和S组大鼠的上述症状均有不同程度地减轻,SMY组大鼠精神状态和症状与S组相当。2.2生脉饮具有改善CHF大鼠心功能的作用（1）与Sham组比较,Model组大鼠舒张期左室前壁厚度（LVAWd）、收缩期左室前壁厚度（LVAWs）、舒张期左室后壁厚度（LVPWd）、LVEF和左室短轴缩短分数（LVFS）显着降低（P<0.01）,左室舒张末期内径（LVEDd）和左室收缩末期内径（LVESd）显着升高（P<0.01）;与Model组相比,SMY组和S组的LVESd显着降低（P<0.05）,LVEF和LVFS显着升高（P<0.05）。（2）与Sham组相比,Model组大鼠血清中NT-pro BNP的水平显着升高（P<0.01）;与Model组相比,SMY组和S组大鼠血清中NT-pro BNP的水平显着上调（P<0.05）;S组NT-pro BNP的水平较SMY组明显降低（P<0.05）。2.3生脉饮改善CHF大鼠心肌结构病变（1）HE染色:Sham组大鼠心肌形态结构正常,肌纤维排列整齐、着色均匀;未见炎细胞浸润。Model组大鼠左室前壁心肌陈旧性梗死灶明显,肌纤维排列紊乱,间隙增宽;心肌细胞显着减少,纤维细胞显着增多,见少量炎细胞。与Model组相比,SMY组和S组大鼠左室前壁可见心肌陈旧性梗死灶,肌纤维排列较整齐均匀,心肌细胞增多,可见少量炎细胞。（2）Masson染色:Sham组大鼠心肌见少量胶原纤维,心肌形态结构正常;Model组大鼠左室前壁心肌组织可见大片被苯胺蓝着蓝色的心肌胶原纤维区域,CVF显着升高（P<0.01）;与Model组相比,SMY组和S组大鼠左室前壁心肌组织被苯胺蓝着蓝色的心肌胶原纤维区域缩小,CVF均显着下调（P<0.05）;SMY组与S组的CVF水平无差异。（3）与Sham组相比,Model组血清中Gal-3水平显着升高（P<0.01）;与Model组相比,SMY组和S组的Gal-3水平显着降低（P<0.05）。（4）与Sham组相比,Model组心肌组织的CollagenⅠ蛋白水平显着升高（P<0.01）;与Model组相比,SMY组和S组CollagenⅠ蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。（5）与Sham组相比,Model组心肌组织的MMP-2、MMP-9和TIMP-2的m RNA和蛋白水平显着升高（P<0.05）,MMP-3的m RNA水平显着升高（P<0.05）;与Model组相比,SMY组和S组MMP-2和MMP-9的m RNA和蛋白水平显着下调（P<0.05）,MMP-3的m RNA水平显着下调（P<0.05）。3.预测并验证生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的靶点3.1采用代谢组学技术预测生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的作用靶点UPLC-Q/TOF-MS技术结合多元变量统计分析方法,鉴定出19种CHF大鼠的血清代谢标志物,其中12种代谢物是生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的靶点代谢标志物。经Met PA代谢途径结合Pearson相关性分析,发现生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的靶点为色氨酸代谢通路。因此,从色氨酸代谢通路入手进行后续研究,进一步验证代谢组学的结果。3.2在体实验验证代谢学组结果（1）与Sham组相比,Model组的血清中Kyn/Trp比值显着上升（P<0.05）。（2）与Sham组相比,Model组心肌组织IDO的m RNA和蛋白水平显着升高（P<0.05）;与Model组相比,SMY组IDO的m RNA水平和蛋白水平显着下调（P<0.05）。（3）与Sham相比,Model组血清中IL-1β、IFN-γ、IL-18、TNF-α、IL-4和IL-10的水平显着升高（P<0.05）,Model组心肌组织IL-1β、IFN-γ、COX-2、TNF-α、IL-18、IL-6和IL-10的m RNA表达水平显着升高（P<0.05）;与Model组相比,SMY组血清中IL-1β、IFN-γ、IL-18、TNF-α的表达水平显着下调（P<0.05）,IL-10的表达水平显着上调（P<0.05）,SMY组心肌组织IL-1β、IFN-γ、COX-2、TNF-α的m RNA表达水平显着下调（P<0.05）,IL-10的m RNA表达水平显着上调（P<0.05）。结论1.“左冠状动脉前降支结扎术”结合“力竭式游泳”,可复制稳定可靠的CHF模型;生脉饮通过抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠的心功能从而治疗CHF;2.生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的作用机制可能与调节色氨酸代谢通路,减轻炎症反应有关。
张玉婕[4]（2021）在《基于网络药理学探讨芪苈强心胶囊抗慢性心力衰竭的作用机制》文中研究表明目的:芪苈强心胶囊（QLQX）由11种中草药组成,在中国已被临床用于治疗慢性心力衰竭（CHF）,为治疗CHF提供了一种有效的疗法。QLQX具有一般中药复方“多成分、多靶点、多通路”的治疗特点,故很难对QLQX组方中所有的药物靶点逐一进行研究。为了在系统层次深入了解QLQX抗CHF的药理机制,我们采用网络药理学和实验相结合的方法设计本研究。材料与方法:1.QLQX抗CHF的网络药理学研究:QLQX由石家庄以岭药业股份有限公司生产,其中草药组成包括黄芪、人参、附子、丹参、葶苈子、泽泻、玉竹、桂枝、红花、香加皮、陈皮。首先,采用传统中药系统药理学数据库及分析平台（TCMSP）联合中国知网、Google Scholar数据库和Pubmed文献数据库,逐一检索QLQX中所有中草药的化学成分和靶点,构建QLQX中草药—化学成分—靶点相互作用网络,并利用Cytoscape软件自带的分析模块计算靶点在网络中的拓扑参数、利用Rich Fun软件分析靶点在不同组织中的富集情况,利用Metascape在线数据库分析靶点参与的生物学过程和分子功能。其次,利用多个在线数据库（Disgenet,Gene Card,TTD和Drugbank）检索CHF的治疗靶点,并利用韦恩图得到QLQX抗CHF相关靶点。利用THE HUMAN PROTEIN ATLAS数据库分析这些靶点在心脏内不同种细胞中的高表达情况,并建立QLQX抗CHF中靶点—高表达细胞种类相互作用网络。利用Metascape数据库对心肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、免疫细胞和平滑肌细胞上的高表达靶点分别进行生物学过程的富集分析,阐释QLQX对心脏中不同种类细胞的调节作用。最后,为了在蛋白质蛋白质相互作用水平研究QLQX抗CHF的潜在生物学机制,对核心蛋白质相互作用网络进行Go和KEGG富集分析。2.QLQX改善CHF小鼠心脏重塑及心功能损害:为了验证网络药理学的分析结果,我们采用微量泵泵入AngⅡ（1000ng/kg·min）制备慢性心力衰竭小鼠模型。将60只C57小鼠随机分为空白对照组（Control组,蒸馏水灌胃）,CHF模型组（AngⅡ组,蒸馏水灌胃）,芪苈强心胶囊给药组（AngⅡ+QLQX组,QLQX 1g/kg·d灌胃）,卡托普利给药组（AngⅡ+Captopril组,Captopril 10mg/kg·d灌胃）,每组各15只,在AngⅡ刺激的同时给予药物干预,实验时间为4周。每周观察小鼠的一般状态和血压。实验中止前1天,采用高分辨率小动物超声对各组小鼠的心脏结构和心功能进行检测,如左室收缩期内径（LVIDs）、左室舒张期内径（LVIDd）、左室射血分数（EF%）、缩短分数（FS%）等指标。提取各组小鼠血清及心脏,并对心脏进行称重,计算心脏肥大指数,包括心脏重量与体重的比值（HW/BW）及心脏重量与胫骨长度的比值（HW/HL）。制备小鼠心脏组织病理学切片,HE染色观察心脏的大体形态,WGA染色观察左心室心肌细胞横截面积,Masson和天狼猩红染色观察心脏纤维化,免疫荧光染色观察心脏中炎症反应的情况。采用Elisa法检测小鼠血清中BNP、IL-6、IL-1β和TNF-a的表达,评估心衰的严重程度及炎症水平。运用RT-PCR和Western blot法检测各组小鼠心脏中与心肌肥大、纤维化和炎症反应通路相关的m RNA和蛋白表达量。结果:1.QLQX抗CHF的网络药理学研究:通过网络药理学研究得到了700个CHF治疗靶点和239个QLQX作用靶点。QLQX作用靶点显着富集在人免疫细胞、心肌等细胞和组织中,参与了炎症反应,细胞黏附、迁移、凋亡的负调节和活性氧代谢过程等生物学过程,表明QLQX对CHF的潜在治疗作用。将QLQX作用靶点和CHF治疗靶点进行交集,得到99个交集靶点,分别在心脏内不同细胞中有着不同的高表达情况:免疫细胞（52个）,内皮细胞（51个）,心肌细胞（34个）,平滑肌细胞（33个）和成纤维细胞（31个）。分析这些靶点在心肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和免疫细胞中参与的生物学过程,该生物学过程与CHF的发生发展密切相关。对核心蛋白质相互作用网络进行拓扑分析,得到了一个含有99个节点,1747条边的蛋白质相互作用网络,平均节点度值为38,其中节点表示靶点,边表示两个靶点之间的关联,度值表示关联的强度。关联强度前十的靶点分别是白细胞介素-6（IL-6）、白蛋白（ALB）、苏氨酸激酶1（AKT1）、血管内皮生长因子（VEGFA）、肿瘤坏死因子（TNF）、一氧化氮合成酶3（NOS3）、表皮细胞生长因子（EGF）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、趋化因子-8（CXCL8）和内皮素1（EDN1）,提示它们在QLQX抗CHF中的重要性。对该网络中节点进行KEGG信号通路分析发现,以P值排序,排名前15个与CHF相关的信号通路包括AGE-RAGE、IL-17、血流剪切应力与动脉粥样硬化、HIF-1、TNF、NF-kappa B、c GMP-PKG、JAK-STAT、MAPK、AMPK、NOD样受体、PI3K-AKT、TGF-β、Toll样受体和细胞因子与细胞因子受体信号通路,提示QLQX很可能通过上述通路发挥治疗CHF的作用。2.QLQX改善CHF小鼠心脏重塑及心功能损害:2.1小鼠血压情况:在实验初始,各组小鼠的收缩压和舒张压没有显着差异。在埋泵后1周,AngⅡ组小鼠收缩压较Control组明显升高。经药物治疗后,AngⅡ+QLQX组和AngⅡ+Captopril组小鼠收缩压均较AngⅡ组明显降低,且AngⅡ+QLQX组和AngⅡ+Captopril组小鼠收缩压差异不明显。与此同时,舒张压与收缩压的趋势相一致。提示QLQX可以降低AngⅡ诱导的小鼠血压的升高。2.2小鼠心功能情况:在埋泵后4周检测各组小鼠的心功能情况,AngⅡ组小鼠的心功能较Control组明显降低,可从EF和FS指标的降低反映出来。经药物治疗后,AngⅡ+QLQX组小鼠EF值较AngⅡ组显着升高,AngⅡ+Captopril组小鼠EF值亦较AngⅡ组显着升高,AngⅡ+QLQX组小鼠与AngⅡ+Captopril组小鼠EF值差异不明显,与此同时,FS值与EF值的趋势一致。各组小鼠血清中BNP水平及心脏超声结果LVIDd、LVIDs亦支持心功能结果,可见慢性心衰小鼠模型建立成功,且QLQX可以改善慢性心衰小鼠的心功能损害。2.3小鼠心肌肥大情况:心脏大体图片、HE染色、WGA染色显示:给予AngⅡ干预后,AngⅡ组小鼠心脏较Control组明显增大,给予QLQX或Captopril后可以缓解AngⅡ诱导的心肌肥大。心脏肥大指数（HW/BW、HW/TL）和心肌肥大指标（ANP、BNP、MYH7 m RNA）亦支持上述结果。此外,通过Western blot法发现,QLQX可以降低AngⅡ诱导的小鼠心脏中肥大相关通路ERK1/2、AKT/STAT3的激活,提示QLQX通过调节ERK1/2、AKT/STAT3通路缓解慢性心衰小鼠心肌肥大。2.4小鼠心肌纤维化情况:Masson和天狼猩红染色显示:给予AngⅡ干预后,AngⅡ组小鼠心脏纤维化程度较Control组明显增加,给予QLQX或Captopril后可以缓解AngⅡ诱导的心肌纤维化。RT-PCR检测的心肌纤维化指标（TGF-β、SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ）亦支持上述结果。此外,通过Western blot法发现QLQX可以降低AngⅡ诱导的小鼠心脏中纤维化相关通路TGF-β/Smad3的激活,提示QLQX通过调控TGF-β/Smad3通路缓解慢性心衰小鼠心肌纤维化。2.5小鼠血清及心脏炎症情况:免疫荧光染色显示:给予AngⅡ干预后,AngⅡ组小鼠心脏炎症指标IL-6较Control组明显增加,给予QLQX或Captopril后可以缓解AngⅡ诱导的心脏炎症反应。RT-PCR检测的心脏中炎症指标（IL-6、IL-1β、TNF-a）和Elisa检测的血清中炎症指标（IL-6、IL-1β、TNF-a）亦支持上述结果。此外,通过Western blot法发现QLQX可以降低AngⅡ诱导的小鼠心脏中炎症反应相关通路RAGE/NF-κB的激活,提示QLQX通过调控RAGE/NF-κB通路缓解慢性心衰小鼠心脏炎症反应。结论:1.本研究利用网络药理学的分析模式,将QLQX化学成分、成分靶点、CHF疾病靶点、靶点高表达细胞种类等进行可视化,分析不同层面间的相互作用关系,以研究QLQX治疗CHF的多靶点作用及在生物网络中重要的信号通路,排名前十的靶点分别是IL-6、ALB、AKT1、VEGFA、TNF、NOS3、EGF、MAPK8、CXCL8和EDN1,发挥重要作用的信号通路包括AGE-RAGE、NF-κB、MAPK、AKT、TGF-β等。2.制备慢性心力衰竭小鼠模型,进行实验研究,通过大体观察、组织病理和分子生物学多种方法证实QLQX改善AngⅡ诱导的慢性心衰小鼠心脏重构及心功能损伤,主要是通过对心肌肥大通路ERK1/2、AKT/STAT3,心肌纤维化通路TGF-β/Smad3通路,炎症通路RAGE/NF-κB这三个方面的调控产生治疗CHF的作用,充分体现了中药复方“多成分、多靶点、多通路”的治疗特点。
沈建芬[5]（2021）在《LCZ696通过TAK1/JNK途径抑制NLRP3调控细胞焦亡减少心肌梗死后心肌损伤》文中研究表明目的:心肌梗死常继发于冠状动脉病变基础上,使梗死相关动脉供血区域心肌细胞发生严重的缺血性损伤以及再灌注后造成的二次损伤,诱导心室重构的发生,即心室肌纤维化改变,导致局部心室僵硬度增加,舒张及收缩功能障碍,最终导致心力衰竭。多项研究表明,心肌梗死时心肌细胞焦亡诱导胞内炎性因子及其代谢产物的释放,是加重心室肌重构的主要病理机制。炎症反应是细胞焦亡参与心室重构的关键环节,免疫激活产生的NLRP3炎性小体介导心肌细胞焦亡,诱导心肌细胞纤维化,促进心脏重塑。因此靶向抑制心肌焦亡治疗,是防止和改善心肌梗死后心室重构的关键。TGFβ在心室重构过程发挥重要作用,可通过激活TGFβ激活激酶1（TAK1）及其下游的JNK靶向调节心肌细胞。TAK1参与心肌细胞的分化和心脏的生长发育,对心脏疾病至关重要。TAK1过表达转基因小鼠出现心脏肥大、间质纤维化、胚胎基因的表达、严重的心肌功能紊乱和早期死亡等表型。研究显示,TAK1通过激活下游效应因子如NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）来控制细胞活性和炎症。TAK1-JNK通路作为NLRP3炎性小体激活的关键调节因子,是否参与心肌梗死损伤尚有待证实。LCZ 696是一种新型的神经内分泌抑制剂,能够高选择性抑制血管紧张素Ⅱ受体和脑啡肽酶,在心力衰竭病人中广泛应用,能够改善患者的心功能及预后,降低慢性心衰患者远期发生心血管事件的风险。研究表明,LCZ696可通过抑制转化生长因子-β（TGF-β）表达抑制心室重构,改善心功能,从而为慢性心力衰竭提供了一种超越RAAS阻断的新的治疗选择。但短期内是否也能改善心功能障碍仍有待阐明。本研究旨在探讨LCZ696对实验性心肌梗死（MI）大鼠急性期的影响,观察LCZ696对心肌梗死大鼠心肌细胞炎性损伤和早期心室重构的作用。探讨细胞焦亡在心肌梗死损伤中的调控机制,并阐明LCZ696降低心肌梗死远期死亡率及调控机制作用,为临床心肌梗死心肌损伤和梗死后心衰防治提供理论依据。方法:1、SPF级SD大鼠45只,雄性,260～300 g,采用冠状动脉结扎法建立大鼠心肌梗死模型,随机数字表法将大鼠分为3个组:假手术组（Sham组）,心肌梗死模型组（MI组）,心肌梗死+LCZ696Z组（LCZ696组）。LCZ696组于模型建立后每天灌胃给予LCZ696（68 mg/kg）溶液,Sham组及MI组给予等量生理盐水,连续给药7d。2、用M型超声收集左室舒张末内径（LVDd）、左室收缩末内径（LVDs）、左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）以评价各组大鼠心脏结构及功能改变。3、TTC染色观察各组大鼠心肌梗死面积,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理性损伤情况,Masson染色评价各组大鼠心肌组织纤维化程度。4、ELISA检测外周血清中炎性因子IL-6及TNF-α表达来评价各组大鼠炎症反应情况,ELISA检测心肌组织中IL-1、IL18表达以评价焦亡产物对梗死后心肌细胞的损伤。5、免疫荧光检测心肌组织中ROS表达以评价各组大鼠氧化应激反应、检测各组大鼠心肌组织中NLRP3炎症小体表达、检测TUNEL和GSDMD表达评价各组大鼠心肌细胞凋亡与焦亡的关系。6、Westen blot检测NLRP3炎症小体表达、NLRP3介导下游蛋白pro-caspase-1、pro-caspase-1p10、pro-IL-1β和pro-IL-18的水平、GSDMD蛋白的N端和C端的表达评价梗死后心肌细胞焦亡发生机制;检测各组大鼠心肌组织中TAK1/JNK通路相关蛋白初步评价TAK1/JNK通路在心肌梗死发生后的水平变化。7、q PCR法检测各组大鼠心肌组织中NLRP3炎症小体表达、检测各组大鼠心肌组织中TAK1/JNK通路相关蛋白初步评价TAK1/JNK通路在心肌梗死发生后的水平变化。8、通过体外实验模拟心肌梗死模型,将H9C2心肌细胞分为4个组:对照组（control）、缺氧组（hypoxia）、LCZ696+缺氧组（LCZ696）、过表达TAK1+LCZ696+缺氧组（TAK1+LCZ696）。Western blot、免疫荧光、q PCR检测各组大鼠心肌组织中TAK1/JNK通路相关蛋白初步评价TAK1/JNK通路在心肌梗死发生后的水平变化。Western blot及q PCR进一步检测各组细胞中TAKI、p-JINK、NLRP3、pro-caspase-1、GSDMD、GSDMD-NT表达以明确TAK1/JNK通路在LCZ696改善心肌细胞损伤中的作用机制,ELISA检测各组细胞IL-1、IL18表达评价焦亡产物对梗死后心肌细胞的损伤。结果:1、与MI组相比,LCZ696组LVDd、LVDs明显缩小,LVEF、LVFS明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,LCZ696减少MI大鼠心肌梗死面积,改善心肌损伤,抑制心肌纤维化,同时抑制血清及心肌组织中IL-6、TNF-α表达及心肌细胞死亡（P<0.05）。2、LCZ696可以显着抑制心肌组织中ROS表达,下调NLRP3、GSDMD、GSDMD-NT的表达。同时抑制NLRP3下游蛋白pro-caspase-1、pro-caspase-1p10、pro-IL-1β、pro-IL-18表达及心肌组织中IL-1β、IL18浓度,且这种调控水平随着缺损时间延长呈依赖性改变（P<0.05）。3、与MI组相比,LCZ696组TAK1、p-JNK表达明显降低,LCZ696可以下调心肌组织中TAK1/JNK通路相关蛋白表达,且随缺损时间延长呈依赖性改变（P<0.05）;过表达TAK1情况下,LCZ696对MI大鼠NLRP3、GSDMD、GSDMD-NT、pro-caspase-1、pro-caspase-1p10、pro-IL-1β、pro-IL-18调控作用被抑制（P<0.05）。结论:1、LCZ696短期使用可以改善急性心肌梗死后早期心室重构;2、LCZ696通过抑制炎症反应减少心肌梗死后心肌损伤;3、LCZ696可以抑制心肌梗死后NLRP3炎症小体表达;4、LCZ696通过抑制NLRP3炎症小体介导的心肌细胞焦亡减少心肌细胞损伤;5、LCZ696通过TAK1/JNK途径介导NLRP3的下调抑制细胞焦亡减少心肌梗死后心肌损伤。
刘谋杰[6]（2021）在《二甲双胍抑制TLR4/MyD88炎症信号通路及调控线粒体动力学改善心肌肥厚的机制研究》文中研究表明目的:病理性心肌肥厚是高血压发生发展过程中的一种适应反应。长期的心肌肥厚会增加心力衰竭或不良心血管事件的风险,如何预防或逆转心肌肥厚对高血压的治疗具有重要意义。二甲双胍（Metformin,Met）是2型糖尿病的常见治疗药物,近年来不少文献报道二甲双胍在降低血糖同时还具有改善心肌肥厚等心脏保护作用,但这些多集中在糖尿病相关研究中,单一应用二甲双胍对心血管疾病治疗的研究较少,目前仍然没有明确二甲双胍对心脏的保护作用及其具体分子机制。Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）是激活先天免疫、引起慢性炎症的跨膜蛋白。TLR4的激活后可招募髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）,诱导核因子кB（nuclear factor-кB,NF-кB）转位入核,上调炎症因子如TNF-α、IL-1β等,促进和维持炎症的发生。TLR4介导的炎症反应在心肌肥厚的发生进展中起了重要促进作用,但二甲双胍能否通过抑制TLR4/MyD88炎症信号通路改善高血压所致心肌肥厚目前尚无报道。线粒体是人体内生物合成和能量产生的重要细胞器,线粒体在细胞中并非静止不动,而是处于不断融合与分裂的平衡状态,线粒体的这种特性称为线粒体动力学。线粒体动力学在线粒体稳态、慢性炎症及细胞凋亡等过程中发挥了重要作用。线粒体动力学平衡紊乱,体内严重受损的线粒体不能及时去除,将引发或促进慢性炎症、引起细胞色素C（Cyt-C）释放,并激活细胞凋亡。目前关于心肌肥厚与线粒体动力学的研究较少,二甲双胍能否通过调控线粒体动力学改善心肌肥厚也尚不清楚。本研究的目的是明确二甲双胍对病理性心肌肥厚的作用,并探究二甲双胍是否通过抑制TLR4/MyD88炎症信号通路改善心肌肥厚;是否通过调控线粒体动力学、抑制线粒体通路细胞凋亡而发挥其对心脏的保护作用。本研究结果也许能为二甲双胍对心血管疾病的多样保护作用提供新思路和新方向。方法:第一部分:二甲双胍改善自发性高血压大鼠心肌肥厚的作用研究:以WKY雄性大鼠为对照组（WKY组,n=8只）。以同周龄雄性自发性高血压大鼠（SHR）大鼠为实验对象,并随机分为心肌肥厚模型组（SHR组,n=8只）和二甲双胍干预组（SHR+Met组,n=8只）。SHR+Met组按照体重给予二甲双胍悬浊液（300mg/kg/d）灌胃,连续给药6周。其余两组大鼠均给予等量生理盐水灌胃。给药前后测量大鼠血压,6w后用小动物心脏超声多普勒仪评价各组大鼠左室室间隔厚度及心功能。随后取大鼠心脏并分离左室,称取大鼠左室重量（LVW）,并计算LVW占大鼠体重（BW）的百分比等。采用HE染色、Masson染色观察各组大鼠心肌形态结构变化及纤维化。Western blot检测三组大鼠ANP、BNP的蛋白表达改变,Real-time PCR检测三组大鼠ANP、β-MHC、CollagenⅠ的m RNA水平,免疫组化检测三组大鼠α-SMA的蛋白表达,以明确二甲双胍对该周龄SHR大鼠心肌肥厚的改善作用。第二部分:二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠TLR4/MyD88信号通路的影响:实验对象、分组及给药方法同第一部分。常规采血、提取血清,采用Elisa方法检测并比较各组大鼠血清中炎症因子IL-1β与TNF-α含量;采用免疫组化检测并比较各组大鼠心肌组织切片中IL-1β与TNF-α的蛋白表达,以了解二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠血清及心肌组织中炎症因子的影响。采用Western blot、免疫组化检测各组大鼠TLR4蛋白表达,了解二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠TLR4表达的影响。同时采用Western blot及免疫组化检测各组大鼠TLR4下游靶蛋白MyD88、NF-κB的蛋白表达改变,以明确二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠TLR4/MyD88信号通路的作用。第三部分:二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠线粒体动力学及线粒体通路细胞凋亡的影响:实验对象、分组及给药方法同第一部分。采用透射电镜观察WKY组、SHR组、SHR+Met组左室心肌组织线粒体形态改变。采用Western blot方法检测各组大鼠线粒体融合指标OPA1、MFN2;线粒体分裂指标Drp1、MTP18蛋白表达,以了解二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠线粒体融合分裂蛋白的影响。采用Elisa检测并比较各组大鼠心肌ROS水平;采用Western blot检测并比较各组大鼠胞浆Cyt-C蛋白表达及Bcl-2、Bax蛋白表达水平的比值,并应用TUNEL方法观察比较三组大鼠心肌组织中凋亡情况,以了解二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠线粒体通路细胞凋亡的影响。结果:第一部分:1、给予二甲双胍治疗6周后,SHR+Met组大鼠血压仍处于高血压,与SHR组无统计学差异。超声心动图示三组心功能未见明显差异,但SHR组舒张末期平均室间隔厚度（LVAWd）较WKY组明显增加,而给予Met治疗后SHR大鼠LVAWd明显降低。2、SHR组大鼠LVW/BW值明显高于WKY组,Met干预6周后大鼠LVW/BW明显降低。3、HE及Masson染色发现SHR组大鼠心肌细胞横截面面积明显增加且心肌组织纤维化程度最重,经过6周的Met治疗后明显改善。4、Western blot结果表明SHR组大鼠ANP、BNP的蛋白表达较WKY组明显增加,二甲双胍治疗可显着下调SHR组大鼠ANP、BNP的表达。5、Real-time PCR示SHR组大鼠心肌组织ANP、β-MHC、CollageⅠ的m RNA水平明显高于WKY组,而给予Met治疗后这些指标m RNA水平明显下调。6、免疫组化检测示α-SMA在SHR大鼠心肌间质尤其是血管壁及周围的阳性表达明显增加,而Met干预后α-SMA阳性表达显着减少。第二部分:1、血清Elisa检测结果显示SHR大鼠IL-1β与TNF-α含量均较WKY组大鼠明显升高,而二甲双胍能明显降低血清中IL-1β与TNF-α水平。2、免疫组化结果表明SHR组大鼠左室心肌组织切片中IL-1β与TNF-α蛋白表达增加,而给予二甲双胍干预后IL-1β与TNF-α水平表达均明显减少。3、Western blot及免疫组化结果表明SHR组TLR4蛋白表达明显升高,而SHR+Met组TLR4蛋白表达显着下降,提示二甲双胍能抑制TLR4蛋白的表达。4、Western blot结果示SHR组TLR4下游蛋白MyD88表达增加,而给予Met治疗后SHR组大鼠MyD88蛋白表达减少。5、免疫组化结果示SHR组大鼠NF-κB蛋白主要在细胞核表达,呈棕黄色颗粒,且NF-κB阳性表达明显多于WKY组,而Met治疗后NF-κB阳性表达明显减少。第三部分:1、透射电镜结果显示SHR组大鼠多数线粒体肿胀,肌原纤维间线粒体片段化明显;线粒体嵴排列紊乱、甚至有断裂或消失。二甲双胍干预后SHR大鼠线粒体嵴重构明显。2、SHR组大鼠心肌组织线粒体融合指标OPA1、MFN2蛋白水平明显较WKY组降低,而给予二甲双胍治疗后OPA1、MFN2蛋白水平明显升高。SHR组大鼠心肌组织线粒体分裂指标Drp1、MTP18在线粒体内表达上升,而二甲双胍干预后Drp1、MTP18线粒体内蛋白含量明显降低。3、SHR组ROS水平较WKY组升高,同时胞浆内Cyt-C蛋白表达增加,而二甲双胍治疗后ROS水平降低、胞浆内Cyt-C含量减少。4、SHR组Bcl-2/Bax蛋白表达比率降低,给予二甲双胍干预后明显上升。5、TUNEL检测结果示SHR组TUNEL阳性细胞比率高于WKY组,而二甲双胍治疗能降低SHR组TUNEL阳性细胞比率。结论:通过本实验研究我们明确了二甲双胍对SHR大鼠心肌肥厚的改善作用,同时二甲双胍的这种心脏保护作用也许与其抑制TLR4/MyD88介导的炎症信号通路及调控线粒体动力学平衡、抑制线粒体通路细胞凋亡有关。本研究结果为高血压心肌肥厚提供了新的可能机制,为二甲双胍的多样保护心血管提供了新的方向。
马雪洁[7]（2021）在《异叶青兰总黄酮体外抗氧化及对H9c2心肌细胞的抗炎抗凋亡作用研究》文中研究指明目的:本研究主要通过对异叶青兰总黄酮体外抗氧化活性的考察,以及异叶青兰总黄酮（DHBF）对LPS及H2O2诱导的H9c2心肌细胞的影响及作用机制研究,以期为该药材的开发利用提供参考依据。方法:1.采用70%乙醇回流提取,AB-8大孔吸附树脂纯化制备DHBF,通过硝酸铝比色法测定DHBF含量,并建立方法学考察。2.以维生素C作为阳性对照,通过考察DHBF对DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力,以及总抗氧化能力（T-AOC）,评价其体外抗氧化活性。3.以10μg/m L的脂多糖（LPS）诱导H9c2细胞建立炎症模型,以300μM过氧化氢（H2O2）诱导H9c2细胞,建立H9c2细胞损伤模型。4.采用细胞增殖-毒性检测法（CCK-8）检测不同浓度DHBF对H9c2心肌细胞活性的影响,以及DHBF对H2O2诱导H9c2细胞存活率的影响。5.利用ELISA法检测IL-6、IL-1β、IL-10以及TNF-α等炎症因子的分泌。6.采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测细胞凋亡情况。7.采用激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位（JC-1）。8.采用Western blot法检测TLR4,My D88,NF-κB,Bax、Caspase-3的蛋白表达水平。结果:1.DHBF平均含量为48.6%,其对DPPH和ABTS自由基清除率可高达82.94%和98.47%,IC50值分别为0.063 mg/m L和0.079 mg/m L。总抗氧化能力（T-AOC）达5.81μmol/m L。2.CCK-8结果表明,当浓度≦50μg/m L时,其对H9c2细胞的活性无抑制现象。与正常组相比,H2O2模型组H9c2细胞存活率显着下降（P<0.05）,不同浓度的DHBF均可以提高H2O2诱导的H9c2细胞存活率,其中25、50μg/m L的DHBF可以显着提高H2O2诱导的H9c2细胞存活率（P<0.05）。3.与正常对照组相比,LPS模型组细胞上清液中IL-6、IL-1β及TNF-α表达显着提高（P<0.01）,IL-10的表达显着降低（P<0.01）。给予不同浓度DHBF的H9c2细胞组,均能够降低IL-6、IL-1β以及TNF-α的表达。其中25、50μg/m L的DHBF能够显着降低IL-6、IL-1β以及TNF-α的表达（P<0.05,P<0.01）。给予50μg/m L的DHBF的H9c2细胞组,能够提高IL-10的表达（P<0.05）。4.与正常组相比较,模型组TLR4蛋白表达水平显着提高（P<0.05）,My D88以及NF-κB的蛋白表达水平也显着升高（P<0.01）。给予不同浓度DHBF的H9c2细胞组,均能够降低TLR4蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。给予不同浓度DHBF的H9c2细胞组,均能够降低My D88蛋白的表达,其中25、50μg/m L的DHBF能够显着降低My D88蛋白的表达水平（P<0.05）。给予不同浓度DHBF的H9c2细胞组,均能够降低NF-κB蛋白的表达（P<0.01）。5.与正常对照组相比较,H2O2模型组细胞形态损伤明显,线粒体膜电位下降,不同浓度DHBF能够改善细胞损伤,使线粒体膜电位上升。6.与正常对照组相比较,模型组Caspase-3及Bax的蛋白表达显着升高（P<0.05,P<0.01）,50μg/m L的DHBF能够显着降低Caspase-3及Bax的蛋白表达（P<0.05）。结论:1.DHBF具有良好的体外抗氧化活性。2.DHBF可以有效抑制LPS诱导的H9c2细胞相关炎症因子与蛋白的表达,其机制可能与抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路有关。3.DHBF能够抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。提示DHBF可以通过抑制炎症反应以及氧化应激反应保护心肌细胞。
张颖[8]（2021）在《健脾化湿通络法改善类风湿关节炎心功能的数据挖掘及对miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR的影响》文中研究说明1 目的采用数据挖掘方法整理、分析类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）心功能的变化及其与免疫炎症指标的相关性、关联性,探讨健脾化湿通络法对其作用。应用临床体内实验探讨RA患者心功能参数、免疫炎症指标与细胞因子、microRNA-23a-3p/第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（microRNA-23a-3p/phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten/phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR）信号通路的相关性,探究RA心功能下降的初步机制。通过体外细胞实验,研究健脾化湿通络方-新风胶囊（Xinfeng Capsule,XFC）改善RA心功能的生物学机制。2 方法2.1 数据挖掘研究研究安徽中医药大学第一附属医院风湿科2016年9月-2020年07月RA住院患者病历资料。观察RA患者心功能参数的变化及与免疫炎症指标的相关性、关联性,二元Logistics回归分析RA心功能下降的危险因素。通过复杂网络图分析RA心功能变化患者核心处方,统计中药性味归经频数,采用关联规则探究中医药对RA心功能变化患者免疫炎症指标、心功能参数的影响。2.2体内实验研究选取30例RA心功能下降患者为研究组（RA组）,30例正常健康人为对照组（HCs组）,分析两组心功能参数、免疫炎症指标的变化,采用实时荧光定量（real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR）检测 miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、mTOR 的表达,ELISA 法（enzyme-linked immunosorbent method）检测白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α的变化。分析RA心功能下降患者心功能参数、免疫炎症指标与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路、细胞因子的相关性。2.3 体外实验研究2.3.1 XFC含药血清对RA-CD4+T细胞联合RA-FLS共培养中miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响从正常人与RA患者外周血中分离出CD4+T细胞,并利用transwell小室与RA滑膜成纤维细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）进行共培养,分为7组,control-1组:RA-FLS;control-2组:正常CD4+T和RA-FLS 共培养;model组:RA-CD4+T和RA-FLS共培养;XFC组:model+XFC（最佳浓度）含药血清;mimics-NC组:model+mimics-miR-23a-3p-NC;mimics组:model+mimics-miR-23a-3p;mimics+XFC组:model+mimics-miR-23a-3p+XFC（最佳浓度）含药血清。采用 RT-qPCR 法检测下室细胞中 miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、mTOR的表达。采用ELISA法检测上清液中细胞因子的表达。采用蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）检测下室细胞中 PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。采用SPSS 21.0统计软件分析数据。2.3.2 XFC含药血清对RA-CD4+T细胞联合人正常心肌细胞共培养中miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响从正常人与RA患者外周血中分离出CD4+T细胞,并利用transwell小室与正常人心肌细胞（Human Cardiac Myocyte,HCM）进行共培养,分为7组,control-1 组:HCM;control-2 组:正常 CD4+T 细胞和 HCM 共培养;model 组:RA-CD4+T细胞和HCM共培养;XFC组:model+XFC（最佳浓度）含药血清;mimics-NC 组:model+mimics-miR-23a-3p-NC;mimics 组:model+mimics-miR-23a-3p;mimics+XFC 组:model+mimics-miR-23a-3p+XFC（最佳浓度）含药血清。用 RT-qPCR 法检测下室细胞中 miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、mTOR 的表达。采用ELISA法检测上清液中细胞因子表达。采用WB法检测下室细胞中PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。采用免疫荧光法（Immunofluorescence,IF）检测下室细胞中脑利钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）、连接蛋白-43（Connexin-43,Cx43）、心肌肌钙蛋白 I（Cardiac Troponin I,cTnI）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）的表达。采用SPSS 21.0统计软件分析数据。3 结果3.1 数据挖掘研究结果3.1.1 RA心功能参数的变化及与免疫炎症指标相关性分析在1596例患者中,心功能参数变化的例数共有1011例,占63.35%,其中,每搏输出量（stroke volume,SV）下降的例数最多为611例,占38.28%。相关性分析显示,右心室流出道内径（right ventricular outflowtract diameter,RVOTd）、主动脉内径（aorta diameter,AODd）、左心房内径（left atrium diameter,LADs）、SV与补体C3（Complement3,C3）呈正相关,左心室舒张末期内径（left ventricular end-diastolic diameter,LVDd）与C3呈负相关（P<0.05）;AODd、LADs、右心室舒张末期内径（right ventricular end-diastolic diameter,RVDd）与超敏-C 反应蛋白（Hypersensitive c-reactive protein,hs-CRP）呈正相关,射血分数（ejection fraction,EF）、缩短分数（fractional shortening,FS）与 hs-CRP、抗环瓜氨酸肽抗体（Anti cyclic citrullinated peptide antibody,anti-CCP）呈负相关（P<0.05）;LVDd 与补体 C4（C4）呈正相关（P<0.05）。3.1.2 RA患者心功能参数与免疫炎症指标关联分析关联规则发现AODd升高、SV降低与anti-CCP、血沉（Erythrocyte sedimentation rate,ESR）、hs-CRP、类风湿因子（Rheumatoid factor,RF）的升高有强关联,最小支持度为20%,最小置信度为85%。3.1.3 RA患者心功能参数与免疫炎症指标的二元Logistics回归分析结果发现C3、ESR、免疫球蛋白M（Immunoglobulin M,IgM）、RF的升高是RA心功能降低的危险因素。3.1.4 RA心功能变化患者中药使用情况在4622张处方314味中药中,使用频率前20名的药物为:a)活血化瘀药:红花、丹参、桃仁、鸡血藤、川芎、当归;（b）健脾化湿药:茯苓、薏苡仁、泽泻、麦芽、陈皮、姜半夏、甘草、山药;（c）祛风除湿药:豨签草、威灵仙、忍冬藤、徐长卿;（d）清热解毒药:蒲公英、白花蛇舌草。寒、温药性,甘、苦、辛药味,肝、肺、脾、胃、肾、心经的中药出现频率及使用频率较高。常用药对为健脾化湿药（陈皮、薏苡仁、茯苓）与活血化瘀药（红花、丹参）、清热解毒药（蒲公英）。3.1.5 RA心功能变化患者中药与免疫炎症指标的关联分析蒲公英、薏苡仁、茯苓、红花与hs-CRP下降关联度高,蒲公英、陈皮、茯苓与C4下降关联度高,薏苡仁、红花、蒲公英、茯苓与ESR下降关联度高。红花配伍桃仁、蒲公英、陈皮、薏苡仁、茯苓、丹参与hs-CRP下降关联度较高,茯苓配伍薏苡仁、陈皮与hs-CRP下降关联度较高,蒲公英配伍薏苡仁与hs-CRP下降关联度较高,红花配伍茯苓、陈皮与ESR下降关联度较高,陈皮配伍茯苓与C4下降关联度较高。3.1.6 RA心功能变化患者中药与心功能参数的关联分析桃仁、茯苓、山药、甘草、红花、丹参、陈皮与SV升高关联度高,丹参、陈皮与AODd下降关联度高,丹参、红花与FS升高关联度高,茯苓与RVDd下降关联度高,红花与EF升高关联度高。红花配伍茯苓、桃仁、丹参、陈皮及茯苓配伍陈皮、丹参与SV关联度高。3.1.7 XFC联合中药与免疫炎症指标及心功能参数关联分析XFC联合薏苡仁与hs-CRP下降关联度高,XFC联合豨签草、蒲公英与ESR下降关联度高,XFC联合陈皮、蒲公英与C3下降关联度高,XFC联合桃仁、威灵仙、茯苓、陈皮、红花、薏苡仁、蒲公英、丹参与RF下降关联度高。XFC联合红花与RVOTd、AODd下降关联度高。3.2体内实验研究3.2.1一般情况RA组中男4例,女26例,年龄为58.2（45-72）岁,病程11.5（0.5-35）年;HCs组中男7例,女23例,年龄为57.0（45-70）岁。两组在年龄、性别等方面比较无差异（P>0.05）。3.2.2两组免疫炎症指标、心功能参数的比较与HCs组相比,RA组hs-CRP、ESR、RF、anti-CCP水平显着升高（P<0.05）;RA 组 EF、SV、FS 显着降低（P<0.05）。3.2.3 两组 miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR 通路相关指标比较与HCs组相比,RA组miR-23a、PI3K、AKT、mTOR表达水平显着升高,PTEN表达水平显着下降（P<0.05）。3.2.4两组细胞因子比较与HCs组相比,RA组IL-1β、IL-6、TNF-α表达上调,而IL-10表达下调（P<0.05）。3.2.5 RA心功能下降患者免疫炎症指标与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路、细胞因子的相关性分析miR-23a-3p、IL-6 与 ESR 呈正相关,PTEN、IL-10 与 ESR 呈负相关（P<0.05）;miR-23a-3p、PI3K、TNF-α、IL-1β 与 hs-CRP、RF 呈正相关,PTEN、IL-10 与 hs-CRP、RF 呈负相关（P<0.05）。3.2.6 RA心功能下降患者心功能参数与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路、细胞因子的相关性分析miR-23a-3p 与 RVOTd、LADs、RVDd、SV 呈正相关,PTEN 与 RVOTd、LADs、RVDd、SV呈负相关,PI3K与RVOTd呈正相关,AKT与LVDd呈正相关（P<0.05）;TNF-α、IL-1β 与 RVOTd、LADs、RVDd、LVDd、AODd、SV呈正相关,IL-6 与 RVOTd、LADs、AODd 呈正相关,IL-10 与 RVOTd、RVDd、SV呈负相关（P<0.05）。3.3 体外实验研究3.3.1 XFC 含药血清对 RA-CD4+T 细胞联合 RA-FLS 共培养 miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响3.3.1.1 CCK-8检测XFC含药血清对RA-CD4+T细胞联合RA-FLS共培养的抑制作用细胞抑制率随时间及浓度的增加逐渐的增强。10%XFC含药血清在作用48h对细胞的抑制率接近50%。故10%XFC含药血清为最佳作用浓度,48h为最佳作用时间。3.3.1.2 RT-qPCR 检测各组 miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR 的表达水平相较于 control-1、control-2 组,model 组中 miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达上调,PTEN表达下调（P<0.05）;而相较于model组,XFC组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR 表达下调,而 PTEN 表达上调（P<0.05）。与mimics-NC 组相比,mimics 组中 miR-23a-3p 表达上调,PI3K、AKT、mTOR 表达上调,PTEN表达下调（P<0.05）。相较于mimics组,mimics+XFC组中miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR 表达下调,PTEN 表达上调（P<0.05）。3.3.1.3 ELISA检测各组细胞因子的表达水平相较于 control-1、control-2 组,model 组中 IL-1β、IL-6、TNF-α 表达上调,IL-10 表达下调（P<0.05）;而相较于 model 组,XFC 组 IL-1β、IL-6、TNF-α 表达下调,IL-10表达上调（P<0.05）。与mimics-NC组相比,mimics组中IL-1β、TNF-α表达上调,IL-10表达下调（P<0.05）。相较于mimics组,mimics+XFC 组中 IL-1β、IL-6、TNF-α 表达下调,IL-10 表达上调（P<0.05）。3.3.1.4 WB检测各组PTEN/PI3K/AKT/mTOR蛋白的表达水平相较于 control-1、control-2 组,model 组中 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达上调,PTEN表达下调（P<0.05）;而相较于model组,XFC组PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR 表达下调,而 PTEN 表达上调（P<0.05）。与 mimics-NC 组相比,mimics 组中 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达上调,PTEN表达下调（P<0.05）。相较于mimics组,mimics+XFC 组中 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR 表达下调,PTEN 表达上调（P<0.05）。3.3.2 XFC含药血清对RA-CD4+T细胞联合HCM共培养中miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响3.3.2.1 CCK-8检测XFC含药血清对RA-CD4+T细胞联合HCM共培养的抑制作用随着药物浓度的增加,细胞抑制率逐渐增强;10%XFC含药血清在作用48h对细胞的抑制率接近50%。故10%XFC含药血清为最佳作用浓度,48h为最佳作用时间。3.3.2.2 RT-qPCR 检测各组 miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR 的表达水平相较于 control-1、control-2组,model 组中 miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达上调（P<0.01）,PTEN表达下调（P<0.05）;而相较于model组,XFC 组 miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR 表达下调,而 PTEN 表达上调（P<0.01）。与mimics-NC 组相比,mimics 组中 miR-23a-3p 表达上调,PI3K、AKT、mTOR表达上调,PTEN表达下调（P<0.01）。相较于mimics组,mimics+XFC 组中 miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR 表达下调,PTEN 表达上调（P<0.01）。3.3.2.3 ELISA检测各组细胞因子的表达水平相较于 control-1、control-2 组,model 组中 IL-1β、IL-6、TNF-α 表达上调,IL-10 表达下调（P<0.01）;而相较于 model 组,XFC 组 IL-1β、IL-6、TNF-α 表达下调,IL-10表达上调（P<0.01）。与mimics-NC组相比,mimics组中IL-lβ、TNF-α表达上调,IL-10表达下调（P<0.01）。相较于mimics组,mimics+XFC 组中IL-lβ、IL-6、TNF-α 表达下调,IL-10 表达上调（P<0.01）。3.3.2.4 WB检测各组PTEN/PI3K/AKT/mTOR蛋白的表达水平相较于 control-1、control-2 组,model 组中 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达上调,PTEN表达下调（P<0.01）;而相较于model组,XFC组PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR 表达下调,而 PTEN 表达上调（P<0.01）。与 mimics-NC 组相比,mimics 组中 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达也明显上调（P<0.01）,PTEN表达下调（P<0.05）。相较于 mimics 组,mimics+XFC 组中 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR 表达下调,PTEN表达上调（P<0.01）。3.3.2.5 IF检测各组心肌细胞标志物表达的影响与 control-1、control-2 相比,model 组 BNP、Cx43、cTnI、cTnT 阳性表达显着增加（P<0.05）;与model组相比,XFC组BNP、Cx43、cTnI、cTnT表达降低（P<0.05）;与 mimics-NC 组相比,mimics组BNP、Cx43、cTnI、cTnT阳性表达显着增加（P<0.05）;与mimics组相比,mimics+XFC组BNP、Cx43、cTnI、cTnT 表达降低（P<0.05）。4 结论4.1 有63.35%的RA患者心功能参数异常,以SV下降为主;且其与免疫炎症指标有强关联,我院风湿科治疗RA心功能异常以主要有以下4类药物:健脾化湿药、清热解毒药、活血化瘀药、祛风湿通络药,以健脾化湿药为核心。健脾化湿药的使用与患者免疫炎症指标、心功能参数的改善有强关联,且中药联合XFC后改善作用更明显。4.2 RA心功能下降患者miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路异常活化,细胞因子表达失衡,且心功能参数、免疫炎症指标与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路、细胞因子明显相关。4.3 XFC能够改善RA患者心功能,其作用机制包括:XFC通过下调miR-23a-3p,上调PTEN,抑制PI3K/AKT/mTOR活化,进一步下调促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,上调抑炎因子IL-10的表达,降低BNP、Cx43、cTnI、cTnT的表达,改善患者免疫炎症反应,从而改善RA患者心功能。
李佳欣[9]（2021）在《趋化因子受体CXCR2抑制剂SB225002在TAC诱导的小鼠心力衰竭中的保护作用及分子机制的研究》文中提出背景心力衰竭是一种复杂的慢性疾病,由任何心脏结构或功能异常引起。心脏内免疫反应的激活与心力衰竭的发生息息相关。趋化因子是一类具有趋化作用的蛋白质家族,是介导早期免疫炎症反应的重要分子。研究表明,趋化因子受体CXCR2与多种心血管疾病具有相关性。然而,趋化因子受体CXCR2在由压力负荷过重所致的心力衰竭中的作用机制尚不清楚。目的探讨趋化因子CXCR2抑制剂SB225002在由压力超负荷所致的小鼠心力衰竭中的保护作用及其分子机制,明确有效抑制CXCR2是否可以作为临床上治疗心力衰竭的新靶点。方法1.动物模型建立:采用野生型小鼠（WT,C57BL/6J,8周龄）应用CXCR2选择性抑制剂N-（2-羟基-4-硝基苯基）-脲（SB225002）（2mg/kg/天,腹腔注射）,采用主动脉弓缩窄术（TAC）处理四周,构建压力超负荷诱导的小鼠心衰模型。2.心脏功能检测:通过应用小动物高分辨率超声影像系统,在小鼠心脏左室短轴切面评估小鼠左室射血分数（EF%）与左室缩短分数（FS%）。同时评估小鼠心室的收缩功能包括:小鼠心室收缩期及舒张期的左室内径及前壁与后壁的厚度。通过主动脉压力-容积环评估小鼠心脏舒张功能。计算小鼠的心重与体重的比率（HW/BW）及心重与胫骨长的比率（HW/TL）。3.心脏组织病理学检测:应用H&E（Hematoxylin&Eosin,H&E）染色检测炎细胞浸润情况;MASSON三色染色及α-SMA免疫组化检测心肌纤维化程度;小麦胚芽凝集素（WGA）染色检测心肌细胞横截面积,观察心肌细胞肥大情况。4.心脏组织蛋白和组织分析:通过蛋白免疫印迹（Western Blot）检测心肌肥厚及纤维化信号通路相关蛋白表达水平;通过实时定量PCR（Quantitative Real-time PCR）检测炎症、肥大及氧化应激等相关标志物的表达水平。5.统计分析方法:使用SPSS20.0进行统计分析,所有数据以平均值±SEM表示。当数据满足正态性和均方差假设时,使用t检验确定两组之间的显着差异,使用ANOVA方差分析确定两组之间的差异比较。P值<0.05被认为具有统计学差异。结果:1.SB225002可显着改善TAC处理后的心衰及舒张功能障碍TAC处理4周后,TAC组出现明显心衰特征,超声心动图结果显示收缩功能指标（EF%、FS%）显着降低;与此同时,压力-容积曲线也显示出同样的EF%值变化,及末端斜率减少。这些结果表明心肌顺应性显着降低以及心室舒张功能障碍。而TAC+SB225002组的EF%及FS%得到显着改善,心肌顺应性及舒张功能显着改善。2.SB225002可抑制TAC处理后的心肌重构及心肌纤维化TAC处理4周后,TAC组发生心肌重构,包括:心重和体重比值与心重和胫骨长比值增大、WGA染色及心脏横切面H&E染色均较对照组增加,而TAC+SB225002组的这些指标均得到显着改善;TAC组MASSON染色提示出现心肌组织及血管周围和间质纤维化明显,而TAC+SB225006组心肌纤维化面积显着减少。另外α-SMA免疫组化染色提示TAC组α-SMA阳性区域显着增高,而TAC+SB225002组α-SMA阳性区域显着降低。3.SB225002可减少TAC处理后的炎细胞浸润TAC处理4周后,TAC组心脏组织切片H&E染色炎细胞浸润显着增高,而TAC+SB225002组H&E染色提示炎细胞浸润显着减少。RT-PCR结果显示:TAC组炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及MCP-1的基因水平显着升高,而TAC+SB225006组的炎症因子水平得到显着改善。4.SB225002可抑制炎症及纤维化相关的信号通路TAC处理4周后,TAC组心肌肥厚信号通路相关蛋白（p-AKT、p-ERK1/2）、成纤维细胞转分化的信号相关蛋白（TGF-β）的表达被激活,而TAC+SB225002组的表达均显着减少。结论:本研究证明了CXCR2抑制剂SB225002在压力超负荷所致的小鼠心力衰竭模型中起保护作用。其主要的作用机制是SB225002抑制CXCR2后可以减少单核细胞向心肌组织的聚集进而减少心肌内炎细胞浸润、炎症因子的表达及氧化应激水平,达到改善心力衰竭的目的。这些结果显示抑制CXCR2的表达可作为改善心衰的新靶点。
史晓伟[10]（2020）在《GCN2对心衰运动康复的作用及机制研究》文中指出研究目的心力衰竭（Heart failure,HF）是心血管系统疾病发展的最后阶段,是世界上心血管疾病患者患病及死亡的主要原因。国内外的心衰指南早已明确提出将运动作为心衰的非药物治疗的I类推荐。作为一种经济、有效的手段,运动对心血管疾病的有益作用逐渐突显出来,已经得到人们的公认和重视。GCN2能够调控整体蛋白翻译,参与多种疾病的发生和发展。本课题组在之前的研究中已发现GCN2参与调节心血管疾病,例如,阿霉素引起的心肌损伤、糖尿病心肌病、压力过负荷引起的心衰等;近期,本课题组还发现运动预适应可能通过调控GCN2对LPS诱导的急性心肌损伤发挥保护作用。然而,GCN2是否在心衰运动康复中发挥作用?目前还不清楚。基于本课题组前期的研究成果,本研究通过建立心衰模型,探讨四周游泳运动对TAC（transverse aortic constriction,主动脉弓缩窄术）引起的心衰的疗效,进一步探究GCN2在此过程中的作用,揭示其中潜在的分子机制,主要目的为研究和探索GCN2在心衰运动康复中的作用与机制。研究方法本论文借助C57BL/6和GCN2 KO小鼠,通过建立TAC引起的心衰小鼠模型,采用超声心动图、HE染色、WGA免疫荧光染色、PSR染色、Masson染色、Western blot分析等多种分子生物学技术与手段,综合分析GCN2对心衰运动康复中的心功能、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢的作用,并且探索其中潜在的分子机制。本论文分为三个部分:第一部分分析TAC引起C57BL/6小鼠心衰时心功能、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢的表现特征,同时观察心衰小鼠运动康复后的心功能、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢的变化情况,探索运动对心衰小鼠的分子机制;第二部分通过使用GCN2 KO小鼠,分析GCN2基因敲除在心衰小鼠运动康复中的心功能、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢的表现,借助GCN2 KO小鼠探索心衰小鼠运动康复的分子机制;第三部分,在亮氨酸缺乏的条件下,GCN2被激活,探究GCN2激活在心衰小鼠运动康复中的心功能、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢的变化情况,进一步探索亮氨酸缺乏激活GCN2对心衰小鼠运动康复的分子机制。以心功能、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢角度,将三部分实验综合起来,分层次研究GCN2在心衰运动康复中的作用以及潜在的分子机制。研究结果本论文三个部分的实验结果如下:（1）本研究成功建立TAC诱导的心衰小鼠模型,心衰小鼠表现出心功能下降、心肌肥厚、心肌间质纤维化、炎症反应和能量代谢异常的特征,心衰上调GCN2（p<0.05）和m TOR（p<0.01）的磷酸化水平,下调Sestrin2（p<0.05）的表达,GCN2/Sestrin2/m TOR信号通路可能参与心衰的发生和发展过程。四周游泳运动改善上述心衰小鼠表征（改善心功能、缓解心肌肥厚、改善心肌间质纤维化、减轻炎症反应和改善能量代谢异常）,值得注意的是,运动下调p-GCN2/GCN2（p<0.01）和p-m TOR/m TOR（p<0.01）的水平,增加Sestrin2（p<0.05）的表达,这表明运动可能通过调控GCN2/Sestrin2/m TOR信号通路对心衰心脏发挥保护作用。（2）GCN2基因敲除改善TAC引起的心功能降低、心肌肥厚、心肌间质纤维化、心脏炎症、心肌能量代谢紊乱的表征。在GCN2缺乏的状况下,运动通过下调p-e IF2α/e IF2α（p<0.01）、ATF4（p<0.01）、p-m TOR/m TOR（p<0.01）、p-P70S6K/P70S6K（p<0.01）、p-4EBP1/4EBP1（p<0.01）的蛋白表达,上调Sestrin2（p<0.01）的蛋白水平促进心衰小鼠的康复作用。（3）在亮氨酸剥夺条件下,运动并未改善野生型小鼠心衰后心功能降低、心肌肥厚、心肌间质纤维化、心脏炎症、心肌能量代谢紊乱,也未能调控e IF2α/ATF4（p>0.05）和m TOR/P70S6K/4EBP1（p>0.05）通路。在GCN2缺乏的状况下,运动通过下调p-e IF2α/e IF2α（p<0.05）、ATF4（p<0.01）、p-m TOR/m TOR（p<0.05）、p-P70S6K/P70S6K（p<0.01）和p-4EBP1/4EBP1（p<0.05）的蛋白表达,并且上调Sestrin2（p<0.01）的蛋白水平,改善GCN2基因敲除小鼠的心衰表征。研究结论（1）四周有氧运动能够改善TAC引起的小鼠心衰,具体表现为提高心衰小鼠的心脏射血分数,缓解心肌肥厚、心肌间质纤维化、心脏炎症、心肌能量代谢紊乱。同时运动还缓解心衰小鼠心脏中GCN2/e IF2α/ATF4和m TOR的活化,增加Sestrin2蛋白的表达,表明运动可能通过调控GCN2/Sestrin2/m TOR信号通路对心衰心脏发挥保护作用。（2）GCN2 KO不但缓解TAC引起的心衰表征,还可以进一步促进运动对TAC引起的心衰小鼠的康复作用,其机制可能与抑制e IF2α/ATF4和m TOR/P70S6K/4EBP1通路,上调Sestrin2的表达有关。（3）在缺少亮氨酸的条件下,运动对野生型小鼠和GCN2基因敲除小鼠心衰表征的作用不同,这表明抑制GCN2活化是运动对心衰康复的重要机制,当剥夺亮氨酸激活心脏中的GCN2通路时,能够影响运动对心肌的保护作用。
二、压力超负荷心肌肥厚过程中血清TNF-α、IL-1β、IL-6的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、压力超负荷心肌肥厚过程中血清TNF-α、IL-1β、IL-6的变化（论文提纲范文）
（1）有氧运动调节AMPK相关信号通路减缓TAC诱导病理性心肌肥厚的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 心力衰竭 |
| 2 AMPK与心力衰竭 |
| 3 运动与心力衰竭 |
| 4 总结与展望 |
| 5 参考文献 |
| 第一部分 有氧运动对TAC诱导C57BL/6J小鼠病理性心肌肥厚的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与实验设计 |
| 2.2 TAC模型制备 |
| 2.3 运动方案 |
| 2.4 超声检测小鼠心功能 |
| 2.5 小鼠心脏取材 |
| 2.6 小鼠心肌组织石蜡包埋、切片步骤 |
| 2.7 小鼠心肌组织马松染色 |
| 2.8 天狼星红染色 |
| 2.9 偏振光 |
| 2.10 WGA染色 |
| 2.11 W B |
| 2.12 内源性H_2S含量的检测 |
| 2.13 统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 有氧运动对C57BL6/J小鼠心肌肥厚的影响 |
| 3.2 有氧运动可减缓TAC引起的心功能障碍 |
| 3.3 有氧运动对TAC诱导左室纤维化和心肌细胞肥大的影响 |
| 3.4 有氧运动对C57BL6/J小鼠心肌TGF-β/Smad信号通路的影响 |
| 3.5 NLRP3/IL-1β蛋白在有氧运动预防TAC诱导C57BL6/J小鼠心肌肥厚中的表达变化 |
| 3.6 自噬相关蛋白在有氧运动预防TAC诱导C57BL6/J心肌肥厚中的表达变化 |
| 3.7 有氧运运动对TAC诱导C57BL6/J小鼠心肌肥厚中硫化氢合成酶蛋白表达水平以及内源性H_2S产生的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 病理性心肌肥厚模型的建立 |
| 4.2 有氧运动训练减轻病理性心肌肥厚 |
| 4.3 有氧运动训练减轻心肌纤维化 |
| 4.4 有氧运动训练降低TAC诱导的心肌组织NLRP3/IL-1β蛋白信号通路表达 |
| 4.5 有氧运动激活AMPK介导的心肌自噬 |
| 4.6 有氧运动增加心肌内源性H_2S合成以及硫化氢合成酶蛋白水平 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 AMPKα2 基因敲除阻滞有氧运动预防病理性心肌肥厚的作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 AMPKα2 基因敲除效率验证 |
| 3.2 有氧运动对AMPKα2~(-/-)小鼠心肌肥厚的影响 |
| 3.3 有氧运动未能改善AMPKα2~(-/-)小鼠的心功能障碍 |
| 3.4 有氧运动对AMPKα2~(-/-)小鼠左室纤维化和心肌细胞肥大的影响 |
| 3.5 有氧运动对AMPKα2~(-/-)小鼠心肌TGF-β/Smad信号通路的影响 |
| 3.6 NLRP3/IL-1β蛋白在有氧运动减缓TAC诱导AMPKα2~(-/-)小鼠心肌肥厚中的表达变化 |
| 3.7 自噬相关蛋白在有氧运动减缓TAC诱导AMPKα2~(-/-)小鼠心肌肥厚中的表达变化 |
| 3.8 有氧运运动对TAC诱导AMPKα2~(-/-)小鼠心肌肥厚中硫化氢合成酶蛋白表达水平以及内源性H_2S产生的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 AMPKα2 基因敲除阻滞有氧运动减缓小鼠心肌纤维化 |
| 4.2 AMPKα2 基因敲除阻滞有氧运动激活心肌自噬 |
| 4.3 AMPKα2 基因敲除小鼠心肌组织内源性H_2S增加未减缓病理性心肌肥厚 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第三部分 AMPK介导的H_2S及细胞自噬在病理性心肌肥厚中的机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 研究设计 |
| 2.1 小鼠心肌细胞实验设计与技术路线图 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 主要实验仪器 |
| 3.2 主要实验试剂 |
| 3.3 试剂配制 |
| 3.4 细胞传代与培养 |
| 3.5 细胞复苏与冻存 |
| 3.6 抑制剂 |
| 3.7 WGA染色 |
| 3.8 WB |
| 3.9 数据统计 |
| 4 结果 |
| 4.1 不同浓度血管紧张素Ⅱ干预对小鼠心肌细胞的影响 |
| 4.2 不同NaHS浓度溶液对肥大心肌细胞中ANP蛋白表达的影响 |
| 4.3 NaHS(H_2S供体)对血管紧张素诱导心肌肥厚的影响 |
| 4.4 自噬介导硫化氢对心肌细胞炎症的抑制作用 |
| 4.5 硫化氢通过AMPK相关的信号通路促进自噬发挥抗炎作用 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 全文讨论 |
| 研究结论 |
| 论文创新点 |
| 研究不足 |
| 7 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 学习经历 |
| 读博期间发表论文情况 |
（2）基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写表 |
| 第1章 绪论 |
| 综述1 胰岛素抵抗与内皮功能障碍 |
| 1.1 胰岛素信号通路 |
| 1.2 炎症与IR |
| 1.2.1 炎症信号 |
| 1.2.2 炎症介导IR的机制 |
| 1.3 内皮功能障碍 |
| 1.3.1 内皮分泌的主要血管活性物质 |
| 1.3.2 内皮功能障碍的发生机制 |
| 1.3.3 血管内皮的胰岛素信号通路 |
| 1.3.4 IR与内皮功能障碍的相互关系 |
| 1.4 结语 |
| 综述2 经典RAS在糖尿病及其并发症中的作用与ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的生物学功能 |
| 1.1 经典RAS在糖尿病及其并发症中的作用 |
| 1.1.1 经典RAS的构成 |
| 1.1.2 经典RAS与糖尿病及其并发症 |
| 1.2 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的构成 |
| 1.2.1 ACE2 的生物学特性及其激动剂和抑制剂 |
| 1.2.2 Ang-(1-7)的生物学特性 |
| 1.2.3 Mas的生物学特性及其激动剂和拮抗剂 |
| 1.3 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴在几种常见疾病中的作用 |
| 1.3.1 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与高血压 |
| 1.3.2 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与动脉粥样硬化 |
| 1.3.3 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与心衰 |
| 1.3.4 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与中风 |
| 1.3.5 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与糖尿病 |
| 1.4 结语 |
| 第2章 ACE2 在高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗中的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 HG对HUVECs存活率的影响 |
| 2.3.2 HG对HUVECs形态的影响 |
| 2.3.3 HG对HUVECs NO分泌含量及ET-1 mRNA水平的影响 |
| 2.3.4 HG对HUVECs胰岛素信号通路IRS1 蛋白表达的影响 |
| 2.3.5 HG对HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 2.3.6 HG对HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 人参皂苷RC改善高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要试剂与仪器 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 人参皂苷Rc对HUVECs细胞存活率的影响 |
| 3.3.2 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs NO分泌含量及ET-1mRNA水平的影响 |
| 3.3.3 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ROS产生的影响 |
| 3.3.4 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs培养液上清MDA含量及SOD活性的影响 |
| 3.3.5 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs促炎因子mRNA水平的影响 |
| 3.3.6 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs培养液上清Ang Ⅱ及Ang-(1-7)含量的影响 |
| 3.3.7 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 3.3.8 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ACE2及Mas mRNA水平的影响 |
| 3.3.9 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs胰岛素信号通路IRS1蛋白表达的影响 |
| 3.3.10 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 3.3.11 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs NADPH氧化酶蛋白表达的影响 |
| 3.3.12 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs IR相关炎症信号通路的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 基于ACE2 探究人参皂苷RC改善高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗的作用机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂与仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs NO分泌含量及ET-1 mRNA水平的影响 |
| 4.3.2 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ROS产生的影响 |
| 4.3.3 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs培养液上清MDA含量及SOD活性的影响 |
| 4.3.4 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs促炎因子mRNA水平的影响 |
| 4.3.5 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs培养液上清Ang Ⅱ及 Ang-(1-7)含量的影响 |
| 4.3.6 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 4.3.7 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ACE2及Mas mRNA水平的影响 |
| 4.3.8 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs胰岛素信号通路IRS1 蛋白表达的影响 |
| 4.3.9 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 4.3.10 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs NOX2蛋白表达的影响 |
| 4.3.11 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs IR相关炎症信号通路的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 基于ACE2 探究人参皂苷RC改善DB/DB小鼠内皮功能障碍的作用及机制 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 |
| 5.2.3 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠体重和空腹血糖的影响 |
| 5.3.2 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清脂质及胰岛素含量的影响 |
| 5.3.3 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清促炎因子含量的影响 |
| 5.3.4 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清和主动脉Ang Ⅱ及 Ang-(1-7)含量的影响 |
| 5.3.5 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠主动脉ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 5.3.6 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠胸主动脉内皮和非内皮依赖性舒张的影响 |
| 5.3.7 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠Akt/eNOS信号通路的影响 |
| 5.3.8 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠主动脉NADPH氧化酶蛋白表达的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 讨论 |
| 第7章 结论及展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 本论文创新性 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）基于代谢组学的生脉饮治疗慢性心力衰竭抑制心肌纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究一 生脉饮治疗慢性心力衰竭抑制心肌纤维化的药效研究 |
| 1 研究材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 药品与试剂 |
| 1.4 仪器与设备 |
| 1.5 药物配制 |
| 1.6 实验试剂配制 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究流程 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 实验分组与给药 |
| 2.4 观察CHF大鼠的一般情况 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 统计学处理及方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 CHF模型鉴定指标 |
| 3.2 药效学评价指标 |
| 4 小结 |
| 研究二 基于代谢组学的生脉饮治疗慢性心力衰竭抑制心肌纤维化的机制研究 |
| 1 研究材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 药品与试剂 |
| 1.4 仪器与设备 |
| 1.5 药物配制 |
| 1.6 实验试剂配制 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究流程 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 实验分组与给药 |
| 2.4 样本的采集和处理 |
| 2.5 液相色谱/飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF/MS)分析条件 |
| 2.6 代谢组学数据处理 |
| 2.7 指标检测 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的代谢组学研究 |
| 3.2 生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的代谢标志物与NT-proBNP、Gal-3的Pearson相关性分析 |
| 3.3 在体验证生脉饮调节色氨酸代谢通路治疗CHF抑制心肌纤维化的作用靶点 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 CHF动物模型制备 |
| 1.1 实验动物的选择依据 |
| 1.2 造模方法的选择 |
| 1.3 CHF模型鉴定指标 |
| 2 干预药物选择依据 |
| 2.1 气阴两虚证是CHF的主要证型 |
| 2.2 益气养阴方药生脉饮改善CHF大鼠心功能 |
| 3 生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化药效明确 |
| 3.1 生脉饮改善CHF大鼠心功能和心肌结构病变 |
| 3.2 生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化 |
| 4 代谢组学技术探讨生脉饮治疗 CHF 抑制心肌纤维化的潜在机制 |
| 4.1 代谢组学技术已广泛用于中医药防治心血管疾病的研究 |
| 4.2 生脉饮治疗CHF抑制心肌纤维化的代谢组学研究结果及相关分析 |
| 4.3 心肌纤维化相关的炎性因子 |
| 4.4 IFN-γ对心肌纤维化的作用尚不明确 |
| 5 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 中医药治疗心肌纤维化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于网络药理学探讨芪苈强心胶囊抗慢性心力衰竭的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 芪苈强心胶囊的网络药理学研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 芪苈强心胶囊改善慢性心力衰竭小鼠心脏重塑及心功能损害 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述(一) 心力衰竭相关机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述(二) 中医药治疗慢性心力衰竭的研究现状 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）LCZ696通过TAK1/JNK途径抑制NLRP3调控细胞焦亡减少心肌梗死后心肌损伤（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:LCZ696 抑制炎症反应减少心肌梗死后心肌损伤 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验动物与分组 |
| 2.3 心肌梗死大鼠模型的建立 |
| 2.3.1 术前准备 |
| 2.3.2 结扎冠状动脉 |
| 2.3.3 给药方式 |
| 2.4 M型超声观察大鼠心脏结构及功能 |
| 2.5 取材方法 |
| 2.6 TTC染色 |
| 2.7 HE染色 |
| 2.7.1 石蜡切片制备 |
| 2.7.2 染色 |
| 2.8 Masson染色 |
| 2.8.1 石蜡切片制备 |
| 2.8.2 染色 |
| 2.9 ELISA |
| 2.9.1 样本处理 |
| 2.9.2 操作步骤 |
| 2.10 免疫荧光检测ROS |
| 2.10.1 石蜡切片制备 |
| 2.10.2 染色 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 LCZ696 抑制心肌梗死后左心室结构及功能改变 |
| 3.2 LCZ696 缩小心肌梗死后心肌损伤面积 |
| 3.3 LCZ696 显着减少心肌梗死后心肌细胞损伤 |
| 3.4 LCZ696 抑制心肌梗死后心肌胶原纤维沉积,抑制心室重构 |
| 3.5 LCZ696 抑制心肌梗死后机体炎症反应 |
| 3.6 LCZ696 抑制梗死后心肌组织中ROS表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 LCZ696 减少心肌损伤,改善心室早期重构,从而改善心脏泵血功能 |
| 4.2 LCZ696 可能通过抑制心梗后机体炎性反应减少心肌损伤 |
| 4.3 LCZ696 抑制心梗后心肌氧化应激反应,进而抑制 ROS 介导的炎症和心肌损伤 |
| 5 结论 |
| 第二部分:LCZ696 抑制NLRP3 炎症小体介导心肌梗死后心肌细胞焦亡 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验动物模型建立与分组 |
| 2.3 免疫荧光检测 |
| 2.3.1 石蜡切片制备 |
| 2.3.2 染色 |
| 2.4 Western blot |
| 2.4.1 试剂准备 |
| 2.4.2 组织中总蛋白的提取 |
| 2.4.3 蛋白定量 |
| 2.4.4 SDS-PAGE |
| 2.4.5 转印 |
| 2.4.6 染色 |
| 2.5 RT-qPCR |
| 2.5.1 总RNA的提取 |
| 2.5.2 RNA浓度检测 |
| 2.5.3 反转录 |
| 2.5.4 实时荧光定量分析 |
| 2.6 ELISA |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 LCZ696 抑制梗死后心肌组织中NLRP3 蛋白表达 |
| 3.2 LCZ696 抑制梗死后心肌组织中NLRP3 蛋白mRNA表达 |
| 3.3 LCZ696 抑制梗死后心肌组织中NLRP3 炎症小体表达 |
| 3.4 LCZ696 可以抑制焦亡相关蛋白表达 |
| 3.5 LCZ696 同时抑制梗死后心肌细胞凋亡及焦亡程序的发生 |
| 3.6 LCZ696 通过介导 NLRP3 抑制其下游蛋白表达发挥改善细胞炎性死亡损伤 |
| 3.7 LCZ696 介导梗死后心肌细胞焦亡程序抑制炎性产物释放对心肌细胞损伤 |
| 4 讨论 |
| 4.1 LCZ696 抑制心梗后NLRP3 炎症小体表达 |
| 4.2 LCZ696 抑制心肌梗死发生细胞焦亡 |
| 5 结论 |
| 第三部分:LCZ696 通过TAK1/JNK途径介导NLRP3 的下调抑制细胞焦亡减少心肌梗死后心肌损伤 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验动物模型建立与分组 |
| 2.3 Western blot |
| 2.4 RT-qPCR |
| 2.5 细胞培养 |
| 2.5.1 细胞复苏 |
| 2.5.2 细胞传代 |
| 2.5.3 细胞冻存 |
| 2.6 RT-qPCR、免疫荧光、ELISA |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 LCZ696 抑制心肌梗死后心肌组织中TAK1/JNK通路相关蛋白表达 |
| 3.2 LCZ696 抑制心肌梗死后心肌组织中 TAK1/JNK 通路相关蛋白mRNA 表达 |
| 3.3 LCZ696 抑制心肌梗死后心肌组织TAK1/JNK通路激活 |
| 3.4 LCZ696 介导TAK1/JNK通路抑制梗死后心肌细胞焦亡程序的发生 |
| 3.5 LCZ696 介导 TAK1/JNK 通路抑制梗死后心肌细胞焦亡相关蛋白mRNA 表达 |
| 3.6 LCZ696 通过TAK1/JNK途径抑制促炎症因子的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 LCZ696 可抑制TAK1/JNK通路表达,可能通过TAK1/JNK途径下调NLRP3炎性小体表达 |
| 4.2 LCZ696 通过TAK1/JNK途径介导NLRP3 下调抑制细胞焦亡减少心肌梗死后心肌损伤 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞焦亡与心血管疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）二甲双胍抑制TLR4/MyD88炎症信号通路及调控线粒体动力学改善心肌肥厚的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:二甲双胍改善自发性高血压大鼠心肌肥厚的作用研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物分组及给药 |
| 2.2.2 血压测量 |
| 2.2.3 超声心动图检测 |
| 2.2.4 心脏组织的取材 |
| 2.2.5 石蜡包埋与切片 |
| 2.2.6 HE、Masson染色 |
| 2.2.7 免疫组化染色 |
| 2.2.8 蛋白提取及测定浓度 |
| 2.2.9 Western blot |
| 2.2.10 Real-time PCR检测 |
| 2.2.11 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 二甲双胍对SHR大鼠超声心动图、血压的影响 |
| 3.2 二甲双胍对SHR大鼠心脏重量的影响 |
| 3.3 二甲双胍对SHR大鼠心肌组织形态结构的影响 |
| 3.4 二甲双胍对SHR大鼠心肌肥厚相关指标的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠TLR4/Myd88 信号通路的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物分组及给药 |
| 2.2.2 Elisa检测TNF-α、IL-1β水平 |
| 2.2.3 心脏组织的取材 |
| 2.2.4 免疫组化染色 |
| 2.2.5 Western blot |
| 2.2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 二甲双胍对SHR大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平的影响 |
| 3.2 二甲双胍对SHR大鼠心肌组织中TNF-α、IL-1β水平的影响 |
| 3.3 二甲双胍对SHR大鼠心肌组织TLR4 蛋白表达的影响 |
| 3.4 二甲双胍对SHR大鼠TLR4 下游MyD88、NF-κB的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠线粒体动力学及线粒体通路细胞凋亡的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物分组与给药 |
| 2.2.2 心脏取材及电镜标本制备 |
| 2.2.3 总蛋白、胞浆蛋白、线粒体蛋白的提取 |
| 2.2.4 Western blot检测蛋白表达 |
| 2.2.5 ROS检测 |
| 2.2.6 TUNEL检测细胞凋亡 |
| 2.2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 透射电镜观察各组大鼠线粒体超微结构改变 |
| 3.2 二甲双胍对SHR大鼠线粒体动力学蛋白的影响 |
| 3.3 二甲双胍对SHR大鼠心肌组织ROS水平及细胞色素C表达的影响 |
| 3.4 二甲双胍对SHR心肌肥厚大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达的影响 |
| 3.5 TUNEL检测各组SHR心肌肥厚大鼠凋亡情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 慢性炎症、线粒体动力学与心血管疾病 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）异叶青兰总黄酮体外抗氧化及对H9c2心肌细胞的抗炎抗凋亡作用研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 异叶青兰总黄酮体外抗氧化及对H9c2 心肌细胞的抗炎抗凋亡作用研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法与内容 |
| 1.4 统计方法 |
| 1.5 技术路线图 |
| 2 结果 |
| 2.1 总黄酮含量测定及方法学考察 |
| 2.2 异叶青兰总黄酮体外抗氧化活性测定 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 异叶青兰总黄酮对LPS诱导的H9c2 细胞的影响及作用机制研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验内容与方法 |
| 1.4 统计分析 |
| 1.5 技术路线 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同浓度异叶青兰总黄酮对H9c2 细胞细胞活力的影响 |
| 2.2 异叶青兰总黄酮对LPS诱导的H9c2 细胞炎症因子表达的影响 |
| 2.3 异叶青兰总黄酮对TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 异叶青兰总黄酮对H_2O_2诱导的H9c2 的影响的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 实验内容与方法 |
| 1.4 统计分析 |
| 1.5 技术路线 |
| 2 结果 |
| 2.1 H_2O_2对H9c2 细胞存活率的影响 |
| 2.2 异叶青兰总黄酮对H_2O_2诱导的H9c2 细胞存活率的影响 |
| 2.3 异叶青兰总黄酮对H_2O_2诱导的H9c2 细胞形态的影响 |
| 2.4 细胞凋亡-Hoechst染色 |
| 2.5 线粒体膜电位(JC-1)检测 |
| 2.6 异叶青兰总黄酮对H_2O_2诱导的H9c2 凋亡蛋白的影响 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 心肌肥厚的分子机制及中药干预治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（8）健脾化湿通络法改善类风湿关节炎心功能的数据挖掘及对miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究一 健脾化湿通络法改善RA患者免疫炎症指标及心功能参数的数据挖掘研究 |
| 1 资料 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 RA西医诊断标准 |
| 1.3 纳入及排除标准 |
| 1.4 关联规则数据处理 |
| 1.5 数据统计及分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 RA患者心功能参数的变化及与免疫炎症指标相关性分析 |
| 2.2 RA患者心功能参数与免疫炎症指标关联分析 |
| 2.3 RA患者心功能参数与免疫炎症指标的二元Logistics回归分析 |
| 2.4 RA心功能变化患者中药性味归经统计情况 |
| 2.5 RA心功能变化患者中药使用情况 |
| 2.6 RA心功能变化患者核心处方分析 |
| 2.7 RA心功能变化患者常用药对分析 |
| 2.8 RA心功能变化患者中药与免疫炎症指标关联分析 |
| 2.9 RA心功能变化患者中药与心功能参数关联分析 |
| 2.10 XFC联合中药与免疫炎症指标及心功能参数关联分析 |
| 3 小结 |
| 研究二 RA患者心功能参数、免疫炎症指标与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路指标的相关性分析 |
| 1.资料与方法 |
| 1.1 病例选择 |
| 1.2 西医诊断标准 |
| 1.3 纳入及排除标准 |
| 1.4 知情同意 |
| 1.5 研究对象 |
| 1.6 主要仪器和试剂 |
| 1.7 指标检测及方法 |
| 1.8 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患者心功能参数、免疫炎症指标的比较 |
| 2.2 两组miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路相关指标比较 |
| 2.3 两组细胞因子比较 |
| 2.4 RA心功能下降患者免疫炎症指标与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路、细胞因子的相关性 |
| 2.5 RA心 功 能 下降患者心 功 能 参数与miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路、细胞因子的相关性 |
| 3 小结 |
| 研究三 XFC含药血清对RA患者CD4~+T细胞联合RA-FLS/HCM共培养中miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 一 XFC含药血清对RA患者CD4~+T细胞联合RA-FLS共培养中miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 实验动物及细胞 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要药品及试剂 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 指标检测 |
| 1.7 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 XFC含药血清对RA-CD4+T细胞联合RA-FLS共培养的抑制作用 |
| 2.2 RT-qPCR检测各组miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的表达水平 |
| 2.3 ELISA检测各组细胞因子的表达水平 |
| 2.4 WB检测各组PTEN/PI3K/AKT/mTOR蛋白的表达水平 |
| 3 小结 |
| 二 XFC含药血清对RA患者CD4~+T细胞联合HCM共培养中miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 实验动物及细胞 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要药品及试剂 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 指标检测 |
| 1.7 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 XFC含药血清对RA-CD4~+T细胞联合HCM共培养的抑制作用 |
| 2.2 RT-qPCR检测各组miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的表达水平 |
| 2.3 ELISA检测各组细胞因子的表达水平 |
| 2.4 WB检测各组PTEN/PI3K/AKT/mTOR蛋白的表达水平 |
| 2.5 IF检测各组心肌细胞标志物表达水平 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 1 RA心功能的变化及相关性分析 |
| 2 RA心功能变化患者用药规律分析 |
| 3 健脾化湿通络中药与免疫炎症指标及心功能参数的关联分析 |
| 4 RA心功能下降病因病机分析 |
| 4.1 脾胃虚弱,心气不足,血不养心 |
| 4.2 脾胃虚弱,湿浊内生,痰瘀互结 |
| 5 XFC主要组成及现代药理研究 |
| 5.1 XFC主要组成 |
| 5.2 XFC现代药理研究 |
| 6 所选指标的依据及意义 |
| 6.1 细胞因子 |
| 6.2 心肌细胞标志物 |
| 6.3 miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路及其活化过程 |
| 7 XFC通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路改善RA心功能的可能机制 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 类风湿关节炎及其心功能变化的中医药干预研究 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（9）趋化因子受体CXCR2抑制剂SB225002在TAC诱导的小鼠心力衰竭中的保护作用及分子机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验抗体 |
| 1.3 实验仪器及设备 |
| 2.实验动物及方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 主动脉弓缩窄术（TAC）构建心力衰竭模型 |
| 2.4 超声检测心脏功能 |
| 2.5 压力-容积环实验 |
| 2.6 心脏组织取材 |
| 2.7 心脏组织固定与包埋 |
| 2.8 苏木素-伊红（Hematoxylin&Eosin, H&E）染色 |
| 2.9 小麦胚芽凝集素(WGA)染色 |
| 2.10 MASSON三色染色 |
| 2.11 免疫组织化学染色 |
| 2.12 蛋白质水平测定（Western Blot） |
| 2.13 提取组织RNA及 qPCR |
| 2.14 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 B 淋巴细胞与心血管疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（10）GCN2对心衰运动康复的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 问题的提出及研究背景 |
| 2 研究目的及意义 |
| 3 研究假设 |
| 4 技术路线 |
| 文献综述 |
| 1 心衰及其运动康复现状 |
| 1.1 心衰概述 |
| 1.2 心衰的运动康复现状 |
| 2 心衰研究常用动物模型 |
| 2.1 MI模型 |
| 2.2 TAC模型 |
| 2.3 阿霉素诱导心肌毒性模型 |
| 2.4 异丙肾上腺素诱导心衰模型 |
| 2.5 血管紧张素Ⅱ诱导心衰模型 |
| 2.6 醛固酮诱导心衰模型 |
| 2.7 基因敲除动物所致心衰模型 |
| 3 心衰经典的生物标志物、心肌间质纤维化对心衰的影响 |
| 3.1 心衰经典的生物标志物在心衰发生和发展中的作用 |
| 3.2 心肌间质纤维化对心衰的影响 |
| 4 炎症对心衰的影响 |
| 5 能量代谢异常在心衰发生和发展中的作用 |
| 6 GCN2 在调节全身蛋白合成中的作用 |
| 6.1 GCN2 概述 |
| 6.2 GCN2 的表达及其经典信号通路 |
| 6.3 GCN2 及其信号通路在常见疾病中的作用 |
| 6.4 GCN2 及其信号通路与运动 |
| 7 小结与展望 |
| 8 参考文献 |
| 第一部分 GCN2 在心衰运动康复中的表达特点 |
| 1 材料和研究方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 TAC后各组小鼠生存情况 |
| 2.2 心衰小鼠的心脏基本参数、心功能、心脏形态、心脏ANP、心肌炎症与能量代谢蛋白、GCN2/Sestrin2/mTOR信号通路的变化 |
| 2.3 运动对心衰小鼠心脏基本参数、心功能、心脏形态、心脏ANP、心肌炎症和能量代谢蛋白、GCN2/Sestrin2/mTOR信号通路的作用 |
| 3 分析和讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 GCN2 敲除对心衰运动康复的作用 |
| 1 材料和研究方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 TAC后各组小鼠生存情况 |
| 2.2 TAC后 WT SED 组、WT EXE 组、KO SED 组和KO EXE 组小鼠的心脏基本参数、心功能、心脏形态、心脏ANP、心肌炎症和能量代谢蛋白、GCN2/Sestrin2/mTOR信号通路的变化 |
| 3 分析和讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第三部分 氨基酸缺乏饲料喂养激活GCN2 对心衰运动康复的作用 |
| 1 材料和研究方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 TAC后各组小鼠生存情况 |
| 2.2 亮氨酸缺乏条件下,TAC后 WTL SED组、WTL EXE 组、KOL SED组和KOL EXE 组小鼠的心脏基本参数、心功能、心脏形态、心脏ANP、心肌炎症和能量代谢蛋白、GCN2/Sestrin2/mTOR信号通路的变化 |
| 3 分析和讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 全文总结 |
| 1 研究结论 |
| 2 研究创新点 |
| 3 研究局限及展望 |
| 主要英文缩写词表 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 1 个人学习经历 |
| 2 攻读博士期间学术研究成果 |
四、压力超负荷心肌肥厚过程中血清TNF-α、IL-1β、IL-6的变化（论文参考文献）
- [1]有氧运动调节AMPK相关信号通路减缓TAC诱导病理性心肌肥厚的机制研究[D]. 赵淋淋. 上海体育学院, 2021(09)
- [2]基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制[D]. 王耀振. 吉林大学, 2021(01)
- [3]基于代谢组学的生脉饮治疗慢性心力衰竭抑制心肌纤维化的机制研究[D]. 甘家丽. 天津中医药大学, 2021
- [4]基于网络药理学探讨芪苈强心胶囊抗慢性心力衰竭的作用机制[D]. 张玉婕. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [5]LCZ696通过TAK1/JNK途径抑制NLRP3调控细胞焦亡减少心肌梗死后心肌损伤[D]. 沈建芬. 中国医科大学, 2021(02)
- [6]二甲双胍抑制TLR4/MyD88炎症信号通路及调控线粒体动力学改善心肌肥厚的机制研究[D]. 刘谋杰. 中国医科大学, 2021(02)
- [7]异叶青兰总黄酮体外抗氧化及对H9c2心肌细胞的抗炎抗凋亡作用研究[D]. 马雪洁. 新疆医科大学, 2021(08)
- [8]健脾化湿通络法改善类风湿关节炎心功能的数据挖掘及对miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR的影响[D]. 张颖. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [9]趋化因子受体CXCR2抑制剂SB225002在TAC诱导的小鼠心力衰竭中的保护作用及分子机制的研究[D]. 李佳欣. 大连医科大学, 2021(01)
- [10]GCN2对心衰运动康复的作用及机制研究[D]. 史晓伟. 上海体育学院, 2020(09)