一、人类同种异体肾移植急性排斥反应中肾组织内Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的变化（论文文献综述）
马玉杰[1]（2021）在《Necrostatin-1对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用》文中研究指明目的:通过体外实验,研究坏死性凋亡抑制剂（Necrostatin-1,Nec-1）能否在人近端肾小管上皮（Human kidney proximal tubular epithelial,HK-2）细胞受到高糖诱导的损伤情况下,对其产生保护作用及机制。方法:在体外对HK-2细胞株进行培养,将细胞随机分为5组:对照组（Control,CON）:5.5mmol/L葡萄糖、甘露醇组（Mannitol,MN）:5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇、Nec-1组（Necrostatin-1,Nec-1）:5.5mmol/L葡萄糖+100μmol/L Nec-1、高糖组（High glucose,HG）:30mmol/L葡萄糖和高糖+Nec-1组（High glucose+Necrostatin-1,HG+Nec-1）:30mmol/L葡萄糖+100μmol/L Nec-1,每组分别处理24小时后,各组细胞活力采用细胞增殖-毒性检测法（CCK-8）检测;各组细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成采用二氯二氢荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）法结合流式细胞法检测;选用流式细胞法检测细胞凋亡率;超氧化物歧化酶2（Superoxide dismutase 2,SOD2）、NADPH氧化酶4（NADPH oxidase 4,NOX4）、单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl2-associated X,Bax）、受体相互作用蛋白1（Receptor interaction protein 1,RIP1）和受体相互作用蛋白3（Receptor interaction protein 3,RIP3）的表达选取免疫印迹法进行测定。结果:与CON组和MN组相比,HG组HK-2细胞活力降低,ROS的生成增加,SOD2蛋白表达降低,NOX4、MCP-1蛋白表达增加,细胞凋亡率增加,Bcl-2/Bax蛋白表达降低,RIP1和RIP3蛋白表达增加（均P<0.01）;与HG组相比,HG+Nec-1组细胞活力增加,ROS生成减少,SOD2蛋白表达增加,NOX4、MCP-1蛋白表达降低,细胞凋亡率下降,Bcl-2/Bax蛋白表达升高,RIP1和RIP3蛋白表达降低（均P<0.01）,差异均具有统计学意义。结论:Necrostatin-1对高糖诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Nec-1抗氧化应激、抑制炎症反应、抗凋亡以及抑制坏死性凋亡有关。
刘浩[2]（2021）在《缺血损伤相关的新生表位在器官移植术后体液性排斥中的作用及机制研究》文中认为新型免疫抑制剂的发明应用使器官移植术后的排斥反应发生率逐渐下降。临床上广泛使用的免疫抑制剂主要机制为T细胞抑制,这是因为既往认为细胞性排斥反应是移植术后发生排斥的直接原因,然而不断有临床数据发现即使采取了足量的T细胞免疫抑制治疗,仍然有排斥反应发生。直到后来研究发现是供体特异性抗体介导了排斥反应的发生,并对移植物失功甚至移植失败产生重要影响,进而影响着受体术后生存质量和存活率。抗体介导的排斥反应主要是由B细胞为主、T细胞辅助的体液免疫反应介导参与的。导致体液性排斥反应发生的抗体有很多,主要是抗供者HLA的抗体或ABO血型系统抗原的抗体。但越来越多的研究发现“非HLA抗体”也在损害移植器官中发挥了重要作用,“非HLA抗体”在移植中一般指的是自身反应性抗体和同种异体反应性抗体,种类繁多,其特异性针对HLA以外的靶点。炎症环境、抗原表达的增加以及通过翻译后修饰形成的新抗原都有助于非HLA抗体的形成,随后对移植物造成损伤。缺血再灌注损伤是影响器官移植术后受体发病率和死亡率的重要原因,因为缺血再灌注损伤与围手术期并发症息息相关,包括再灌注后综合征、移植延迟、原发性无功能以及急、慢性排斥反应。研究发现,细胞在缺血再灌注损伤的过程中会产生新抗原表位,然后引起机体产生获得性免疫分泌抗体与之结合进而加重再灌注损伤。这些缺血损伤相关的新生表位所带来的危害可能并不局限于缺血再灌注损伤本身,可能也会诱发或加重器官移植后机体的体液性排斥反应。一、缺血损伤导致新生表位的产生我们通过建立小鼠单次和二次肾脏缺血再灌注损伤模型来进行此部分研究（单次缺血:左肾行假手术,100天后行右肾缺血手术;二次缺血:左肾先行缺血手术,100天后再行右肾缺血手术）。病理及生化结果发现经历二次缺血的右肾组织和功能比单次缺血的右肾损害严重（p<0.05）,且首次左肾缺血时间越长,右肾损害越明显,表明首次左肾缺血对后期缺血的右肾产生了影响。ELISA结果提示血清中新生抗原表位ANAX4的抗体滴度在二次缺血损伤后较单次缺血小鼠显着升高（p<0.01）,提示ANAX4抗体可能与肾损害相关。流式细胞技术检测发现二次缺血损伤后小鼠脾脏中Tfh细胞、生发中心B细胞、记忆性B细胞比例增高,说明二次缺血损伤诱导了体液免疫的发生。免疫荧光结果显示ANAX4的新生抗原表位在各组中的表达情况无明显差异（p>0.05）,而血清中ANAX4抗体在二次缺血损伤后却增高,可能与记忆性B细胞激活分化为可分泌抗体的浆细胞有关。我们进一步在左肾缺血期间加用了T细胞免疫抑制剂FK506,结果显示FK506不仅可以减少二次缺血损伤后Tfh细胞在脾脏中的比例,也减少了生发中心B细胞、记忆性B细胞在脾脏中的比例,同时减少了血清中ANAX4抗体水平,右肾功能和病理损伤情况也得到好转,再次证明新生表位激活了体液免疫分泌抗体参与对机体的损害。此外,免疫荧光结果证实C4d和Ig G在肾缺血损伤时候会浸润肾组织,说明补体系统也参与了肾缺血损伤引起的体液免疫反应。二、缺血损伤相关的新生表位在器官移植中的作用及机制此部分我们建立了小鼠肾缺血100天后行异种小鼠肾移植的动物模型,在肾缺血时候或肾移植术时加用FK506,观察其对移植效果的影响。具体分组如下:sham,肾移植+FK506,肾缺血+肾移植,肾缺血+肾移植+FK506,肾缺血+FK506+肾移植+FK506。结果发现在肾缺血+移植组中的肾组织损害最严重,血清中ANAX4抗体水平也最高。而肾移植+FK506组与肾缺血+肾移植+FK506组比较,病理损害则较轻,ANAX4抗体水平也较低,这提示前期肾缺血对后期的移植肾组织产生不利影响,且可能与新生表位产生有关。而在移植肾的免疫荧光中,ANAX4抗原表位在各组间无明显差异,表明ANAX4抗体水平的变化与移植术后体液免疫反应有关。此外C4d和Ig G在肾缺血+肾移植+FK506组中沉积比在肾移植+FK506组中多（p<0.05）,也说明早期肾缺血更易导致补体对移植肾的损害。我们进一步检测了脾脏和移植肾引流淋巴结中的Tfh细胞、生发中心B细胞、记忆性B细胞的比例,结果显示肾缺血+肾移植+FK506小鼠的三种细胞比例较肾移植+FK506组更高（p<0.05）,这些结果再次表明早期肾缺血损伤更易导致移植术后体液免疫发生,从而对移植肾造成损害。而在肾缺血+FK506+肾移植+FK506组中,由于缺血期间应用了FK506,其病理损害、C4d和Ig G沉积较肾缺血+肾移植+FK506都有所下降,三种免疫细胞比例也降低（p<0.05）,提示早期应用FK506可以适当减轻损伤和免疫反应。移植术后体液免疫的活跃可能预示抗体介导的排斥反应的发生,于是我们进一步对供体特异性抗体进行了检测,如预期所料,前期肾缺血会导致肾移植术后DSA-Ig G升高,说明了抗体介导的排斥反应的发生,从而对移植肾造成排斥。三、新生表位诱导的移植术后体液性排斥反应的防治探讨第二部分证实早期肾血损伤相关新生表位会诱发移植术后的体液性排斥反应,此部分,针对免疫反应不同环节,我们将眼镜蛇毒因子、CTLA4-Ig和（或）FTY720用于移植术后体液排斥反应的治疗。结果发现眼镜蛇毒因子可以减轻移植肾病理损害,改善肾功能,同时降低血清中ANAX4抗体和DSA-Ig G水平,尤其在抑制补体沉积上作用明显,但其对新生表位生成和免疫细胞的比例变化上无作用。而CTLA4-Ig除了改善移植肾功能和损害等效果外,还能通过抑制Tfh细胞、生发中心B细胞、记忆性B细胞的活化、增值进而抑制体液性排斥反应。当与FTY720合用后这些效果进一步增强。以上结果说明CTLA4-Ig和FTY720联用是预防和治疗缺血损伤相关表位诱导的移植术后体液性排斥反应的有效方法。四、褪黑素对肾缺血再灌注损伤的作用及机制研究减轻缺血再灌注损伤也一直是研究热点。因为褪黑素具有调节节律、抗炎、抗氧化等作用,因此我们将褪黑素用于肾脏缺血再灌注损伤的研究。实验证明褪黑素预处理对肾脏有保护作用,褪黑素预处理后的小鼠即使经历缺血再灌注,组织损伤也较少,血清肌酐和尿素氮水平没有明显升高。褪黑激素的保护作用进一步通过降低氧化应激得到证实,表现为脂质过氧化降低,抗氧化能力增强。随后研究证明褪黑素预处理显着限制了肾缺血损伤时引起的促炎细胞因子产生和中性粒细胞、巨噬细胞的浸润。透射电镜和Western blot等结果提示褪黑素在缺血再灌注过程中可以诱导肾脏自噬产生,TUNEL结果证实褪黑素预处理可以减少细胞凋亡。进一步研究发现褪黑素可通过下调TLR4/My D88激发自噬发挥保护作用,此外,MEK/ERK/m TORC1通路的下调对于褪黑素介导的自噬也是必需的。综上所述,我们通过小鼠二次肾缺血损伤模型验证了新生抗原表位的产生以及对体液免疫的影响。然后通过肾缺血+肾移植模型明确了缺血损伤相关的新生表位可以诱导移植术后的体液性排斥反应并对移植物造成损害,进一步实验表明缺血早期或移植术后通过干预抑制免疫反应可减轻移植物损害和排斥反应。最后我们证实褪黑素可以在肾缺血损伤中通过诱导自噬发挥保护性作用。
薛梦姣[3]（2019）在《三氧化二砷通过线粒体凋亡通路诱导淋巴细胞凋亡机制研究》文中研究指明目的:器官移植是当前器官衰竭患者最有效的治疗方法,而免疫排斥和术后恶性肿瘤高发是器官移植受者面临的最大障碍。目前临床使用的移植免疫抑制剂尽管延长了移植物生存期,但也增加了移植受者术后恶性肿瘤发生率,亟需开发具有抗癌作用的新型免疫抑制剂。本实验室在新型免疫抑制剂筛选中发现抗癌药物—三氧化二砷能减弱啮齿类动物同种异体心脏移植、胰岛移植急性排斥反应,延长移植物生存期。本文在此基础上,运用蛋白质组学技术体外探究三氧化二砷免疫抑制机制,为其后续开发为移植免疫抑制剂提供理论基础。方法:首先,通过细胞免疫学实验、流式细胞术检测T淋巴细胞亚型、Caspase-3酶活性检测、细胞凋亡检测等实验探究三氧化二砷对抗原特异性激活小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响;其次,提取淋巴细胞总蛋白,运用蛋白质组学技术Lable Free明确三氧化二砷作用靶点和信号通路;接着,通过检测淋巴细胞线粒体膜电位、细胞内ROS水平以及运用透射电镜观察淋巴细胞和线粒体形态来验证三氧化二砷对线粒体的影响;最后,对Lable Free技术挖掘出的信号通路进行蛋白和mRNA水平验证。结果:三氧化二砷作用于小鼠脾脏淋巴细胞后,激活细胞内Caspase-3酶,诱导淋巴细胞凋亡。Lable Free分析结果表明,三氧化二砷主要作用于线粒体凋亡通路。验证结果表明,三氧化二砷降低线粒体膜电位,升高细胞内ROS水平,破坏线粒体形态结构。最后,Western Blot结果表明三氧化二砷促进胞浆中凋亡蛋白Bax、Cytochrome C蛋白表达、激活真核细胞中凋亡执行者Caspase-9、Caspase-3蛋白,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达。在mRNA水平上,激活bax、p53,升高bax/bcl-2比值,抑制Bcl-2和抗氧化物酶SOD、Gpx基因转录。结论:三氧化二砷通过细胞内源性凋亡途径即线粒体凋亡通路来诱导淋巴细胞凋亡。
曾巧煌[4]（2019）在《紫草素抑制小鼠皮肤移植排斥反应及其免疫调节机制研究》文中研究表明目的:器官移植作为一种有效的治疗手段,在临床上广泛应用。然而,几乎所有的移植患者都需要持续使用免疫抑制药物来防止同种异体移植排斥反应的发生。所以免疫抑制剂在器官移植中起着至关重要的作用。不过,目前常用的免疫抑制药物可能导致严重的副作用,如肾毒性、肿瘤和感染等。因此,对于长期接受免疫抑制剂治疗的临床患者来说,迫切需要开发一些具有更好的免疫抑制效果和最小副作用的新型免疫抑制分子。紫草素是一种从紫草根中提取的具有生物活性的萘醌类色素,现代药理学研究表明紫草素具有抗炎、抗癌和抗菌的作用。尤其是,紫草素被证明在动物模型中可以抑制关节炎的发展,在体外实验中还能抑制人类T淋巴细胞的活化。但目前紫草素对同种异体移植排斥反应的作用尚不明确,因此本实验通过建立小鼠皮肤移植模型,考察紫草素对同种异体排斥反应的作用,明确紫草素免疫调节的作用机制。方法:1.紫草素对小鼠同种异体皮肤移植排斥反应的研究研究采用小鼠皮肤移植模型,将BALB/C小鼠的皮肤移植到C57BL/6小鼠身上,造模成功后将C57BL/6小鼠随机分为四组,分别为同种异体皮肤移植组（Control）、环孢素A组（CsA）、紫草素低剂量组（Shikonin-20mg/kg）、紫草素高剂量组（Shikonin-40mg/kg）,考察紫草素对移植物生存时间的影响;HE染色、免疫组化和免疫荧光分别测定移植皮片中的炎性细胞浸润及Foxp3和IDO的表达,细胞流式术检测受体小鼠外周引流淋巴结和脾脏细胞中CD4+Foxp3+Treg、效应CD8+CD44high CD62LlowT细胞、CD11c+CD80+和CD11c+CD86+成熟树突状细胞的比例,荧光定量PCR 法测定移植皮片中细胞因子 IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-6、IL-10、TGF-p1、FoxP3和IDO基因表达的水平。2.紫草素联合Anti-CD25抗体对小鼠皮肤移植排斥反应的研究研究采用小鼠皮肤移植模型,造模成功后将C57BL/6小鼠随机分为五组,分别为同种异体皮肤移植组（Control）、环孢素A组（CsA）、环孢素A联合Anti-CD25抗体组（CsA+anti-CD25）、紫草素组（Shikonin）、紫草素联合Anti-CD25抗体组（Shikonin+anti-CD25）,每天给予紫草素或环孢素,在移植后第0、4和8天分别按0.2mg/只的剂量腹腔注射Anti-CD25抗体;每天观察移植皮片有无炎症、水肿、坏死、结痂及脱落等情况,并记录移植皮片的存活时间,用中位生存时间（mediansurvival time,MST）表示。3.紫草素体外实验的研究用流式细胞仪分离纯化C57BL/6小鼠的CD3+T淋巴细胞,采用CCK-8测定紫草素对T细胞的细胞毒性,流式细胞术测定CFSE标记的CD3+T淋巴细胞的增殖情况,ELISA检测培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-10、IL-17和TGF-β1的水平,Western Blotting检测mTOR信号通路的蛋白表达。分离纯化的CD4+CD25-T细胞在抗CD3e和CD28抗体（2.5μg/mL）以及rmIL-2（10ng/mL）共刺激后,分别给予TGF-β1（5ng/mL）和不同浓度的紫草素（0.25μM或0.5μM）,四天后采用流式细胞术检测CD4+Foxp3+Treg的比例。分离纯化C57BL/6小鼠骨髓中的树突状细胞,在rmGM-CSF（20ng/mL）和rmIL-4（1Ong/mL）的共刺激下,分别给予环孢素（0.1μM）和不同浓度的紫草素（0.25μM或0.5μM）,两天后收集细胞采用Western Blotting检测其中IDO的蛋白表达。结果:1.紫草素对小鼠同种异体皮肤移植排斥反应的研究紫草素低剂量（20mg/kg）和高剂量（40mg/kg）组均能显着延长同种异体皮肤移植的存活时间,MST分别是16.00±1.37和22.00±2.98天（P<0.05或P<0.01）,甚至紫草素高剂量的治疗效果接近于CsA（MST为26.00±1.49天）（PP>0.05）;紫草素低剂量和高剂量治疗后小鼠移植皮片中CD3+T细胞浸润明显减少（P<0.05或P<0.01）,同时可上调移植皮片中Foxp3和DC来源的IDO的表达（P<0.01）。在受体小鼠次级淋巴器官中,紫草素低剂量和高剂量组均能显着增加引流淋巴结中CD4+Foxp3+Treg的比例（P<0.05或P<0.01）,同时可显着降低脾脏和淋巴结细胞中CD11c+CD86+成熟树突状细胞和CD8+CD44highCD62Llow效应T细胞的比例（P<0.05 或P<0.01）。在移植皮片中,紫草素低剂量和高剂量组均能显着降低促炎因子TNF-α和IL-17的mRNA表达（P<0.05或P<0.01）,以及显着升高FoxP3和IDO mRNA的表达水平（P<0.05或P<0.01）,紫草素高剂量还能抑制IFN-γ和IL-6的mRNA表达（P<0.05 或P<0.01）,同时上调 IL-10和 TGF-β1 mRNA 的表达（P<0.05）。2.紫草素联合Anti-CD25抗体对小鼠皮肤移植排斥反应的研究实验结果表明,Shikonin+anti-CD25 组的 MST 是 16.00±0.75 天,与 Shikonin 单独给药组（MST=25.00±2.83天）相比,明显减少了小鼠的存活时间（P<0.05）;而CsA+anti-CD25组与CsA单独给药组相比没有显着差异（P>0.05）。3.紫草素体外实验的研究不同浓度的紫草素（0.1、0.25、0.5、1.0、2.0 μM）给药24h、48h和96h后,紫草素的给药浓度至1.OμM时,对T细胞并没有细胞毒性作用。在T细胞增殖实验中,紫草素（0.25μM）组和紫草素（0.5μM）组均能显着抑制T细胞的增殖（P<0.01）,尤其是高剂量组的抑制效果与CsA组接近（P>0.05）;此外,紫草素（0.25μM）组和紫草素（0.5μM）组均能显着降低细胞上清液中IFN-γ的水平（P<0.01）,仅紫草素（0.5μM）组可下调IL-17的浓度（P<0.05）,同时还能上调了抑制型细胞因子IL-10和TGF-β1在细胞上清液中的水平（P<0.05或P<0.01）;而CsA可以提高细胞上清液中TGF-β1的浓度（P<0.01）但对IL-10无影响（P>0.05）;在体外分离纯化的CD4+CD25-T细胞中,紫草素（0.25μM）组和紫草素（0.5μM）组均能显着提高CD4+Foxp3+Treg 的比例（P<0.05 或P<0.01）。对于T细胞上mTOR信号通路,紫草素（0.25μM）组和紫草素（0.5μM）组均能显着抑制P-p70S6K和P-mTOR的活化（P<0.01）,而作为阳性对照雷帕霉素在很大程度上阻断了 P-p70S6K和P-mTOR的激活（P<0.01）。在体外诱导的髓源性树突状细胞中,紫草素（0.25μM）组和紫草素（0.5μM）组均能在体外增强树突状细胞IDO的蛋白表达（P<0.05或P<0.01）,而环孢素却没有显着差异（P>0.05）。结论:我们实验结果揭示了紫草素在诱导Tregs/IDO和抑制同种异体移植排斥反应中的新作用,表明紫草素可显着延长同种异体皮肤移植小鼠的存活时间,其可能的作用机制是诱导CD4+Foxp3+Treg的分化,促进DC来源IDO的表达以及抑制了 mTOR信号通路的激活。因此,紫草素作为一种天然产物,在未来可能作为一种潜在的免疫抑制药物用于临床器官移植手术。
张岩[5]（2019）在《沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的保护作用及机制研究》文中研究表明诱导成功的移植耐受可以使人类跨过免疫系统的天然障碍,真正的完成器官“置换”的终极目标;成功的免疫耐受不仅可以延长移植物存活时间,而且可以缓解器官移植带来的巨大经济负担、患者身心压力和器官短期的医疗局面。现阶段治疗方案虽然能减少急慢性排斥反应发生,却无法达到耐受。肾移植术后随访4至5年,大约30%病人会呈现慢性排斥的病理表现。因此,当前移植学界的首要目标就是探求新的免疫抑制方案。大鼠肾脏移植模型具有通过可适用于人类情况的手段研究耐受性诱导的潜力,研究者可以通过操控大鼠肾移植排斥反应,理解其发病机制。泌尿道的重建技术是大鼠肾移植模型的关键技术之一,因为大鼠输尿管的口径极窄,易导致尿漏、输尿管坏死和输尿管狭窄等并发症,可致移植肾积水或移植肾功能恶化。不同的泌尿道重建术式也会导致肾移植的不同结局。我们在建立大鼠肾移植模型时采用包含输尿管的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合技术重建泌尿道,同时与供体膀胱瓣-受体膀胱吻合的方法进行比较,以期改良泌尿道重建方法,减少并发症的产生。我们前期的研究发现沙利度胺可以显着减轻大鼠血管移植物动脉粥样硬化,减轻移植物血管病。其机制为改善炎症反应,减轻淋巴细胞的浸润,减少VEGF、PDGF、ICAM、TNF-α及PCNA的表达,延缓移植血管的硬化进程以及减轻内膜增生。在本实验中我们通过建立改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合尿路重建建立大鼠肾移植模型,观察沙利度胺对大鼠肾移植急、慢性排斥的作用,并阐明其免疫学机制。通过混合淋巴细胞培养,观察沙利度胺在体外对异体反应性T细胞的增殖及分化等情况的影响,阐明其对反应性淋巴细胞的调控机制。第一部分:改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合建立大鼠肾移植模型目的:应用改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合泌尿道重建建立大鼠肾移植模型,与供体膀胱瓣-受体膀胱吻合的方法进行比较,明确改良的大鼠肾移植泌尿道重建方式的效果。方法:分别以供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合泌尿道重建及供体膀觥瓣-受体膀胱吻合泌尿道重建的方式建立大鼠肾移植模型:A组,供体小膀胱瓣-受体膀胱粘膜层浆肌层双层缝合（n=12）:B组,供体膀胱瓣-受体膀胱单层缝合（n=11）。对比泌尿道重建时间及并发症。结果:A组尿路重建时间为14.12±1.73min、B组尿路重建时间为10.16±1.19min,两组差异有统计学意义（P<0.05）;A组泌尿道并发症发生率为25%,B组泌尿道并发症发生率为9.09%,两组差异有统计学意义（P<0.05）。结论:改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合的泌尿道重建方式能减少大鼠肾移植术后泌尿系统并发症,尽管尿路重建时间时间较传统的单层缝合时间长,但可以显着减少尿漏的可能性,为可靠性高的重建术式。第二部分:沙利度胺对大鼠肾移植急性排斥反应的作用目的:阐明沙利度胺在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用。方法:建立Fischer到Lewis大鼠肾移植模型。使用同系LEW-LEW移植物作为对照。将受体大鼠分为同系移植组（Isograft,Iso）、异系移植组（Allograft,Allo）、环孢素组（CsA）和沙利度胺组（Thalidomide,Tha）。动态监测术后肌酐（Scr）的变化,观察至术后5天,留取血液标本检测白细胞介素（IL）-2、IL-6、IL-17和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度,移植肾行病理检查。结果:急性排斥模型中Allo组及Tha组大鼠肌酐均进行性升高,Tha组肌酐水平与Allo组相比无明显差异,均显着高于同时间点Iso组及CsA组。Tha组移植肾病理学改变与Allo组相似,均可见急性肾小管损伤表现,弥漫性重度炎症浸润伴严重肾小球病,内膜动脉炎和小动脉透明变性。Allo组IL-2、IL-6、IL-17和TNF-α的浓度显着升高,Tha组血清中IL-6、IL-17和TNF-α的浓度显着低于Allo组,但IL-2的浓度显着高于Allo组。结论:这些结果表明,沙利度胺的免疫抑制作用较弱,对急性排斥反应效果较差。第三部分:沙利度胺对大鼠肾移植慢性排斥反应的作用及其免疫调节机制的初步研究目的:观察沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的作用,并明确其确切的机制。方法:建立Fischer到Lewis大鼠肾移植模型。使用同系LEW-LEW移植物作为对照。将受体大鼠分为同系移植组（Isograft,Iso）、异系移植组（Allograft,Allo）和沙利度胺组（Thalidomide,Tha）。术后8周取血液测定受者血清中肌酐,IL-2、IL-6、IL-17和TNF-α的浓度;流式细胞术检测外周血中T细胞亚群分布。取移植肾行病理检查;免疫荧光、蛋白印迹实验检测各组肾组织中转换生长因子β1（TGF-βl）、平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。结果:肾移植后8周,移植肾出现不同程度的单个核细胞浸润、肾小球硬化、肾小管萎缩、间质纤维化和小动脉内膜厚等病理学改变。Tha组大鼠移植肾的病理改变明显轻于Allo组。Tha组大鼠血肌酐水平及血清中炎性细胞因子的浓度显着低于Allo组,Tha组外周血中CD4+CD25+、CD4+CD25+FoxP3+T细胞比例显着升高、CD4+Th17+T细胞比例显着降低,TGF-β1,α-SMA和VEGF蛋白的表达显着降低。结论:沙利度胺可以显着减轻慢性排斥反应,其机制可能为沙利度胺减少炎症因子的分泌,改变T细胞亚群的分布,并降低相关致纤维化蛋白表达有关。第四部分:沙利度胺对异体反应性淋巴细胞的调控作用目的:观察沙利度胺在体外对体反应性淋巴细胞的影响,阐明其对反应性淋巴细胞的免疫调控作用。方法:建立Fischer-Lewis单向混合淋巴细胞培养（Mixed lymphocyte culture MLC）体系,分为对照组（Control,Con）及沙利度胺组（Thalidomide,Tha）,流式细胞术检测T细胞亚群分布情况及凋亡率,ELISA法测定培养液中IL-2,IL-6,IL-17和TNF-α的浓度。结果:Tha组中Th17细胞比例显着低于同时间点的对照组,Treg细胞比例均显着高于同时间点的Con组,差异均有统计学意义（P<0.05）:Tha组培养液中IL-2浓度显着高于同时间点的Con组（P<0.05）;Tha组中T细胞凋亡率显着高于同时间点的Con组,差异均有统计学意义（P<0.05）;而IL-6,IL-17和TNF-α浓度显着低于同时间点的Con组（P<0.05）。结论:沙利度胺在体外可以促进异体反应性T细胞中Treg细胞增殖,抑制Th17细胞增殖,改变T细胞亚群分布,增加异体反应性T细胞凋亡,降低炎症因子IL-6,IL-17和TNF-α的浓度。
魏嘉[6]（2018）在《猪心脏移植供心冷保存的研究及评价体系的建立》文中进行了进一步梳理心脏移植是挽救终末期心脏病患者生命和生活质量唯一有效的治疗手段。然而,心脏移植过程中缺血再灌注损伤（Ischemia reperfusion injury,IRI）和供心冷保存时限较短的问题,一直是困扰心脏移植推广应用的主要瓶颈。心脏移植过程中,供心必然经历缺血缺氧-再灌注重新获氧这一过程,导致组织损伤和炎症反应。IRI是供心术后急、慢性功能不全甚至功能衰竭,致使死亡率上升的主要因素。目前临床通常使用冷保存液灌注和保存离体供心,然而,在此低温条件下的心肌代谢并未停止,有害代谢产物的积聚最终会在再灌注阶段引起供心损伤。目前该法的心肌有效保存时限仅有46 h,进一步加剧了待移植患者与供心不足的矛盾。由此可见,研制可减轻IRI和延长供心冷保存时限的冷保存液,是心脏移植的重要技术关键和研究热点。IRI诱导多条信号通路的激活并调控一系列基因的表达,导致细胞凋亡坏死最终引起器官损伤,业已证明:细胞凋亡、补体激活和炎症皆为参与IRI的经典关键通路。研究发现将针对上述通路中关键基因的化学合成小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）加入器官保存液,可有效抑制IRI所致的器官损伤,然而,这些研究仅局限于小动物模型,很难客观模拟人类疾患过程。猪在解剖结构、生理生化和免疫反应等方面与人类极为相似,是学术界公认的最适合模拟人类心血管系统疾病的模型动物。有鉴于此,我们以小型猪为实验动物,根据RNA干扰理论,研制可减轻IRI和延长有效保存时限的含siRNA心肌保存液。在siRNA体内给药中,转染效率一直是个技术难点。小动物实验证明,大剂量裸siRNA分子加入保存液可有效减少IRI,但大剂量siRNA给药策略不适用于大动物或人医临床。而转染试剂（Transfection reagent,TR）广泛应用于siRNA的体内和体外转染中,可减少siRNA使用剂量,较适合临床给药。为此,我们选取IRI相关的4个基因:Complement component 3（C3）（补体激活）、Nuclear Factor kappa B-p65（p65）（炎症）、Caspase 8和Caspase 3（细胞凋亡）,设计并合成siRNA,用猪肾细胞（PK15）和猪睾丸细胞（ST）筛选出抑制效率最强的4对siRNA。再将不同剂量化学修饰的siRNA-TR混合物或单纯siRNA加入常规心脏保存液Celsior液中,灌注并冷保存离体猪心。研究发现含低剂量siRNA-TR的保存液（4 OD siRNA-TR）在抑制4个目的基因表达和减少细胞凋亡作用上均优于只含有高剂量单纯siRNA的保存液（16 OD siRNA）。为减少和降低供心离体冷保存和再灌注引起的组织损伤和功能障碍,我们研究发现含siRNA-TR的保存液可减少冷保存供心的凋亡细胞,但其对再灌注复跳心的作用尚不清楚。为此,我们设计和构建了大动物供心保存评价体系,在国内率先建立大动物离体心灌流系统,通过灌注温血灌流液可使各类大动物供心在离体情况下跳动,再与心脏原位移植模型结合,构成供心体内外各项主要生物学参数综合评价平台。保存后供心在连接于离体心灌流系统或原位移植到受体时,经监测复跳过程中左心室血流动力学参数、心肌生存率、组织结构改变、心肌坏死、氧化应激、免疫激活和炎症反应等一系列生物学参数,可全面客观评判不同保存方式保存后的供心质量,为大动物心功能监测和人医心血管疾病临床相关研究奠定了坚实的研究基础和技术平台。为检验含siRNA-TR的保存液对再灌注猪心的保护效果,使用500 ml含2、4、6 OD siRNA（siRNA组）或4 OD scramble siRNA（阴性对照组,Ctrl）与TR混合物的Celsior液,以及500 ml单纯Celsior液（常规保存组,CEL）,灌注并冷保存离体猪心12 h后再将供心连接于体外灌流系统,温血灌注供心以左心做功模式跳动3 h。结果发现:siRNA组供心做功血流动力学参数均好于对照组CEL和Ctrl;做功结束后,其组织细胞凋亡水平低;组织结构改变轻微;血浆中的心肌酶学标志物和组织中的氧化应激标志物水平低;心肌组织中促炎因子和4个靶蛋白表达下调;组织中TLR-7及其配体MyD88水平未见升高。3个siRNA组之间相比,4 OD组综合效果最好,与冷保存未复跳猪心试验结果一致。从而提示siRNA保存液具有保护心功能、抑制细胞凋亡、保护心肌正常组织结构、减轻心肌坏死和氧化应激、控制炎症反应的作用且具备良好的生物安全性。基于离体心试验结果,为证实4 OD-TR的siRNA保存液在原位移植中同样具有较好心肌保护效力,我们将6只成年雄性小型猪供心分为2组,常规保存组供心冷保存6 h,而灌注siRNA-TR保存液的供心冷保存时间延长到12 h。冷保存结束后全部原位移植到受体胸腔并开放主动脉使其复跳做功3 h,期间记录血流动力学参数。所有供心冷停跳后、检测与离体心复跳心相同的指标。结果发现,与常规冷保存6 h的供心相比,延长保存时间到12 h的供心在凋亡水平、组织结构变化、心肌坏死、炎症反应和先天免疫激活等方面都有所减轻,心功能参数良好。在延长一倍时间的基础上,仍具有比常规临床保存供心更好的质量参数。本研究证明:通过含抑制炎症和凋亡途径的siRNA心肌保存液冷保存猪供心,能有效提高供心质量和延长保存时限,为深入研发临床新型供心保存液提供了新思路和新途径,具有广阔的应用前景和潜在的开发价值。
刘伟[7]（2012）在《输注FasL基因转染的血管内皮细胞抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究》文中进行了进一步梳理背景：免疫豁免区域表达有高水平的FasL,仔细的研究表明这些免疫豁免区域的细胞通过表达的FasL和渗透的炎症细胞上表达的Fas相互作用并诱导其凋亡来实现其免疫豁免的效果。我们合理的设想这种FasL和Fas的相互作用可以用于保护移植物免受急性排斥。我们进一步设想血管内皮细胞,因为其不受FasL的杀伤作用可以用作FasL基因表达的载体。方法：我们先行建立了慢病毒rFasL/嘌呤霉素表达体系,以进一步使转染的内皮细胞特异性而且持续的表达FasL。具体实验中我们先建立大鼠急性肝移植排斥模型的并将其分为四组：第一组为肝移植后规律使用FK506抗排斥的阳性对照组,第二组为肝移植后不做任何其他处理的阴性对照组,第三组为在肝移植过程中输注转染FasL基因的内皮细胞的实验组,第四组为输注携带FasL基因慢病毒的对比组。每组24对供受体大鼠。我们分别观察术后各组大鼠的AST和BIL数值和各组的术后生存天数。结果：输注转染FasL的内皮细胞组和输注携带FasL基因病毒组的AST和BIL数值介于使用FK506的阳性对照组和不做任何处理的阴性对照组之间。术后输注转染FasL的内皮细胞组和输注携带FasL基因病毒组的大鼠的生存天数明显长于阴性对照组,但短于使用FK506的阳性对照组。结论：这个在体实验清楚地证明转染FasL基因的内皮细胞和携带FasL基因的慢病毒输注能显着保存移植物的功能和延长其生存天数。
杨帆[8]（2011）在《雷公藤甲素急性肾毒性作用机制及抗氧化剂维生素C对肾脏的保护作用的研究》文中指出[背景]雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f. TWHf）属卫矛科,其主要活性成分为二萜类化合物雷公藤甲素（triptolide）。许多研究都已证明,雷公藤甲素有多种功效,如免疫抑制、抗炎、抗肿瘤、抗生育作用等。临床上已经利用多种含有雷公藤甲素的雷公藤提取物进行相关疾病的治疗,并取得了良好效果。然而,雷公藤甲素却有着强烈毒性,会对消化系统、泌尿系统、血液循环系统、生殖系统以及骨髓产生毒性作用,造成不同程度的损害,这严重影响了其使用。此外根据相关研究,在所有雷公藤甲素中毒致死的案例中,肾功能不全/衰竭是最重要的死亡原因,而且肾脏是雷公藤甲素慢性毒性作用最重要的靶器官。然而到目前为止尚不清楚雷公藤甲素所致的肾损伤的机制。因此,从安全角度考虑,必须努力搞清雷公藤甲素肾毒性作用的机制。[目的]建立雷公藤甲素致大鼠急性肾损伤模型,研究雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤机制,并对抗氧化剂维生素C对雷公藤甲素急性肾毒性作用的预防效果及可能的机制进行研究。具体内容包括：1.建立雷公藤甲素致大鼠急性肾损伤模型；2.研究氧化应激在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用；3.研究细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及相关机制；4.研究抗氧化剂维生素C对雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤的预防作用及可能机制。[方法]1.将30只雄性SD大鼠完全随机分为1个对照组和2个实验组,对两个实验组大鼠给予腹腔注射剂量分别为lmg/kg和2mg/kg的雷公藤甲素,对照组大鼠则给予相当量的空白对照液。注射后48小时将所有大鼠处死,采集心脏血液并取双侧肾脏固定,检测血浆尿素氮（PUN）与肌酐（Pcr）含量,HE与Masson病理切片染色观察肾组织形态学改变情况；测定肾组织内SOD、GSH-Px活性以及ROS、MDA含量。2.实验分组、动物处理方法及肾功能检查同1；应用原位末端标记法（TUNEL）检测肾组织细胞凋亡情况；利用免疫组织化学染色法与Western Blot法检测肾组织内凋亡相关蛋白的表达情况,并利用real-time PCR技术测定肾组织内凋亡相关蛋白调控基因的表达量。3.将40只雄性SD大鼠完全随机分为4组——（1）对照组：在实验第8天,给予对照组大鼠腹腔注射（ip）0.9%的生理盐水；（2）维生素C组：从实验第1天开始,给予本组大鼠灌服剂量为250mg/kg体重的维生素C溶液（蒸馏水溶解）每天一次,连续灌服7天,在实验第8天,给予本组大鼠腹腔注射（ip）0.9%的生理盐水（操作同对照组）；（3）雷公藤甲素组：在实验第8天,给予本组大鼠腹腔注射（ip）剂量为lmg/kg体重的雷公藤甲素溶液；（4）维生素C与雷公藤甲素合用组：从实验第1天开始,给予本组大鼠灌服剂量为250mg/kg体重的维生素C溶液（蒸馏水溶解）,每天一次,连续灌服7天,在实验第8天,给予本组大鼠腹腔注射（ip）剂量为1mg/kg体重的雷公藤甲素溶液（操作同雷公藤甲素组）在实验第10天,将所有大鼠处死,抽取心脏血液并取双侧肾脏。测定肾组织内SOD、GSH-Px活性以及ROS、MDA含量；检测血浆尿素氮（PUN）与肌酐（Pcr）含量；观察HE与TUNEL染色切片上肾组织形态学与细胞凋亡情况；Western Blot法检测肾组织内凋亡相关蛋白的表达情况,并利用real-time PCR技术测定肾组织内凋亡相关蛋白调控基因的表达量。[结果]1.一次性大剂量注射雷公藤甲素可在短时间内对大鼠肾脏造成严重损伤,剂量越大越显着；经雷公藤甲素处理后,肾组织中SOD与GSH-Px（?）性明显降低,而ROS与MDA含量则明显升高,且均与肾脏的损伤程度密切相关2.两个雷公藤甲素处理组均可见大量肾小管上皮细胞凋亡,剂量越大越显着,且与肾功能改变相关；经雷公藤甲素处理后,肾组织中Bax、Bid、Bad、Fas以及FasL表达明显增多,且呈剂量依赖性改变；尽管Bcl-2的表达未见明显改变,但Bax/Bcl-2表达量比值却呈剂量依赖性升高。3.维生素C预处理大鼠1肾组织中抗氧化酶活性比单纯使用雷公藤甲素注射大鼠显着提高,而ROS与MDA含量则明显下降；与单纯注射雷公藤甲素大鼠相比,维生素C预处理大鼠肾功能显着改善；维生素C预处理大鼠肾脏结构损伤程度比单纯注射雷公藤甲素大鼠显着减轻,肾小管上皮细胞凋亡数量明显减少；与雷公藤甲素组相比,维生素C与雷公藤甲素合用组大鼠肾脏中Bax、Bid、Bad表达量以及Bax/Bcl-2表达量比值显着下降,而Fas/FasL表达情况则没有显着差异。[结论]1.肾脏是雷公藤甲素急性毒性作用重要的靶器官,氧化应激损伤在雷公藤甲素对肾脏造成的毒性损害中发挥了重要作用。2.肾小管上皮细胞凋亡是雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤时重要的组织学基础之一,且Bcl-2家族以及Fas/FasL在雷公藤甲素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的过程中起到了重要作用。3.维生素C能够显着抑制雷公藤甲素对大鼠肾脏造成的结构与功能损害,这与其抗氧化活性密切相关；维生素C能通过对Bcl-2家族成员表达的调控抑制雷公藤甲素诱导的肾小管上皮细胞凋亡4.抗氧化剂有可能成为我们预防和治疗雷公藤甲素所造成的肾脏损害的有效药物。
朱淑惠[9]（2010）在《寿胎丸抗大鼠卵巢移植急性排斥期细胞凋亡的实验研究》文中提出目的建立SD大鼠和Wi star大鼠同种异体卵巢皮下游离移植模型,并以Wi star大鼠自体卵巢皮下游离移植模型作为对照组,以补肾安胎中药复方“寿胎丸”进行干预,观察卵巢移植模型组织形态学与超微结构的变化、凋亡指数及凋亡相关基因Bcl-2、Bax. Fas. FasL的表达、卵巢激素E2的水平,探讨“寿胎丸”抗卵巢移植急性排斥反应的机理。方法210只Wistar雌性大鼠随机分为7组,每组30只。①自体移植模型组；②自体移植+寿胎丸组；③异体移植模型组；④异体移植+寿胎丸组；⑤异体移植+CsA组；⑥异体移植+CsA及寿胎丸组；⑦正常对照组。①、②建立自体卵巢皮下游离移植模型,③、④、⑤、⑥建立同种异体卵巢移植模型,受体Wistar大鼠,供体SD大鼠,⑦行开腹缝合假手术处理,为正常对照组。术后给药,②自体移植+寿胎丸组和④异体移植+寿胎丸组予寿胎丸水煎剂,按26.8g/kg/d剂量灌胃,连用28天；⑤异体移植+CsA组予CsA,按10mg/kg/d剂量灌胃,连用14天,然后减量,按6mg/kg/d剂量连用14天；⑥异体移植+CsA及寿胎丸组同时予CsA和寿胎丸水煎剂,剂量同前；①自体移植模型组、③异体移植模型组、⑦正常对照组予生理盐水,按5ml/kg/d剂量灌胃,连用28天。各组于移植术后d7、d14、d21、d28、d35分批处死Wi star大鼠各6只,取双侧移植卵巢：在电镜下观察移植卵巢超微结构变化,新生血管的形态学特征；光镜下计算各个发育阶段卵泡、黄体的数量,观察间质的变化；TUNEL试剂盒检测移植卵巢凋亡指数；免疫组化检测凋亡相关基因Bcl一2／Bax.凋亡因子Fas及其天然配体FasL的表达；移植术前1天眼眶后静脉丛取血测血清E2,移植术后取三次血,第6-15天、第16-25天以及第26-35天,根据阴道涂片,选雌激素分泌最高峰当日,取血测血清E2。观察记录各组动物的体重及进食等一般情况。结果1、血清内分泌激素E2的变化各组卵巢移植大鼠移植术前的血清E2水平稍低于正常对照组静止期的E2水平,差异无统计学意义（P＞0.05）。移植术后6-15天,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组大鼠的E2水平有大幅度升高,①自体移植模型组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组大鼠的血清E2与正常对照组血清E2比较,差异无统计学意义（P＞0.05）；③异体移植模型组、④异体移植+寿胎丸组大鼠的E2水平不升反降,分别与⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组大鼠的血清E2比较,均有统计学意义（P＜0.05）；血清E2水平,⑥异体移植+CsA及寿胎丸组>⑤异体移植+CsA组>④异体移植+寿胎丸组、③异体移植模型组；③异体移植模型组与①自体移植模型组E2水平相比较,差异有统计学意义（P<0.05）。移植术后16-25天,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组E2水平分别与③异体移植模型组、④异体移植+寿胎丸组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）；①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组E2水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。移植术后26-35天,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组E2水平仍高于③异体移植模型组和④异体移植+寿胎丸组,有统计学意义（P<0.05）；④异体移植+寿胎丸组E2水平稍高于③异体移植模型组,但差异无统计学意义（P>0.05）；①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组E2水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。2、移植卵巢组织形态学的变化石蜡切片HE染色观察移植卵巢内各级卵泡和黄体数目,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组卵巢内各级卵泡和黄体的数目,均多于③异体移植模型组,少于⑦正常对照组；②自体移植+寿胎丸组的原始卵泡明显多于①自体移植模型组；⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的卵泡和黄体多于⑤异体移植+CsA组、④异体移植+寿胎丸组；③异体移植模型组大鼠卵巢仅在移植后7天出现黄体,其余各时间点,均未发现各级卵泡和黄体。电镜观察发现,存活的自体移植卵巢细胞,超微结构基本正常,仅见线粒体和内质网轻度扩张,新生血管有扩张瘀血现象。异体移植卵巢的细胞坏死和凋亡严重,坏死细胞细胞核变形,染色质边集,细胞膜不完整,细胞器极少,线粒体空泡化,脂滴丰富。凋亡细胞的细胞核固缩,核周间隙增宽,染色质凝集,形成不同性状和大小的块状,并逐步分裂为碎片；胞质致密,细胞器浓缩,失去水分；细胞膜下陷,包裹核碎片和细胞器,形成凋亡小体。移植卵巢内聚集大量巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞,新生血管有扩张瘀血现象,移植后期卵巢组织纤维化。经积极抗排斥治疗的大鼠,卵巢细胞超微结构基本正常,胞浆内细胞器较多,线粒体与内质网有不同程度肿胀。3、凋亡细胞数、Bcl-2、Bax、Fas、FasL的变化TUNEL法检测移植卵巢内的细胞凋亡数,③异体移植模型组凋亡细胞最多,⑦正常对照组凋亡细胞最少；③异体移植模型组多于①自体移植模型组（P<0.05）；④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的凋亡细胞均少于③异体移植模型组（P<0.05）；②自体移植+寿胎丸组的凋亡细胞少于①自体移植模型组（P<0.05）。检测移植卵巢内的Bcl-2表达,发现移植术后①自体移植模型组与③异体移植模型组大鼠卵巢内的Bcl-2水平与正常组比较明显降低（P<0.05）；②自体移植+寿胎丸组的Bcl-2水平高于①自体移植模型组（P<0.05）；移植后7天,⑤异体移植+CsA组的Bcl-2高于③异体移植模型组和④异体移植+寿胎丸组（P<0.05）；移植后35天,④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的Bcl-2水平均高于③异体移植模型组（P<0.05）,寿胎丸与CsA的的交互作用是负向的。检测移植卵巢内的Bax表达,移植14天,①自体移植模型组的Bax水平低于③异体移植模型组和⑦正常对照组（P＜0.05）,其余各时点,三组比较,均无明显差异（P>0.05）；②自体移植+寿胎丸组的Bax水平低于①自体移植模型组（P<0.05）；移植后14天,④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的Bax水平低于异体移植模型组（P＜0.05）,CsA和寿胎丸的交互作用是负向的。检测移植卵巢内的Fas表达,经统计分析,移植后14天,①自体移植模型组的Fas水平低于⑦正常对照组（P<0.05）,其余各时间点,①自体移植模型组、③异体移植模型组与⑦正常对照组比较,均无明显差异（P>0.05）;①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组的Fas水平,在移植后各个时间点比较,差异均无统计学意义（P>O.05）：移植术后28天,⑤异体移植+CsA组的Fas水平低于③异体移植模型组和④异体移植+寿胎丸组,⑥异体移植+CsA及寿胎丸组Fas水平低于④异体移植+寿胎丸组（P<0.05）。寿胎丸、CsA的交互作用为正向效应。检测移植卵巢内的FasL表达,①自体移植模型组、③异体移植模型组大鼠卵巢内的FasL水平,与正常对照组在各时间点比较,均无明显差异（P＞0.05）；①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组大鼠的FasL水平,在移植后各个时间点比较,差异均无统计学意义（P>0.05）；异体卵巢移植各组大鼠卵巢内的FasL水平比较,在移植术后各时间点,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论1白体卵巢冻融后移植是可行的,移植后的卵巢具有内分泌功能,并能保存较多的卵泡；异体卵巢移植经积极抗排斥治疗后也有内分泌功能,但卵泡丢失较多。2寿胎丸有抗异体卵巢移植排斥反应的作用。在提高内分泌激素E2水平和保存卵泡方面,寿胎丸与CsA有协同作用。3细胞凋亡与排斥反应相关,寿胎丸与CsA均能抑制急性排斥反应中卵巢细胞的凋亡,但CsA作用更明显,在抑制卵巢细胞凋亡方面,未发现寿胎丸和CsA有协同作用。4寿胎丸抗大鼠同种异体卵巢移植急性排斥反应的机理,可能与其调控细胞凋亡有关,CsA和寿胎丸均能升调Bcl-2表达,降调Bax表达,升调Bcl一2／Bax的比值,从而发挥抑制卵巢细胞凋亡的作用；寿胎丸调控卵巢细胞内Fas.FasL因子的作用不明显。5寿胎丸可减少自体移植卵巢内原始卵泡的丢失,可能与其抑制卵巢细胞凋亡的作用相关,而但其在短期内提高自体移植卵巢成活率、提高内分泌激素E2水平的作用尚不明显。
邹本警,王赞涛,张永利[10]（2009）在《肾移植排斥反应的相关因子表达》文中提出CD40通路在同种异体急性、慢性排斥反应的发生,发展过程发挥重要作用。进一步研究CD40通路的免疫学特性,将为探索早期监测预防和控制移植排斥反应开辟新的领域。sCD30作为CD30活化释放入血的活性成分,与CD30具有很好的相关性,在肾移植中sCD30的表达为移植肾急性排斥反应的早期诊断及其与急性肾小管坏死的鉴别提供了一个敏感性、特异性很高的非创伤性检查方法,并为指导术后免疫抑制治疗提供了依据。通过对以上肾移植排斥反应相关因子的研究,能有效预测和预防排斥反应,顺利解决移植免疫反应,提高肾脏移植的成功率和改善移植物远期存活。
二、人类同种异体肾移植急性排斥反应中肾组织内Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人类同种异体肾移植急性排斥反应中肾组织内Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的变化（论文提纲范文）
（1）Necrostatin-1对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 (HK-2)细胞培养 |
| 2.3.2 (HK-2)细胞实验分组 |
| 2.3.3 细胞增殖-毒性检测法(CCK-8) |
| 2.3.4 二氯二氢荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法 |
| 2.3.5 流式细胞法 |
| 2.3.6 免疫印迹法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 各组HK-2 细胞活力测定 |
| 3.2 各组HK-2 细胞ROS测定 |
| 3.3 各组HK-2 细胞中SOD2、NOX4 的测定 |
| 3.4 各组HK-2 细胞中MCP-1 的测定 |
| 3.5 各组HK-2 细胞凋亡率的测定 |
| 3.6 各组HK-2 细胞中Bcl-2、Bax的测定 |
| 3.7 各组HK-2 细胞中RIP1、RIP3 的测定 |
| 第四章 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 Necrostatin-1在肾脏病方面中的作用及研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文目录 |
（2）缺血损伤相关的新生表位在器官移植术后体液性排斥中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 缺血损伤导致新生表位的产生 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二部分 缺血损伤相关的新生表位在器官移植中的作用及机制 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第三部分 新生表位诱导的移植术后体液性排斥反应的防治探讨 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第四部分 褪黑素对肾缺血再灌注损伤的作用及机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 抗体介导的排斥反应在器官移植中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（3）三氧化二砷通过线粒体凋亡通路诱导淋巴细胞凋亡机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 临床器官移植主要难题 |
| 1.1.1 供体短缺 |
| 1.1.2 移植后恶性肿瘤 |
| 1.2 临床常见器官移植排斥反应概述 |
| 1.2.1 宿主抗移植物反应 |
| 1.2.2 移植物抗宿主反应 |
| 1.3 淋巴细胞与移植排斥 |
| 1.3.1 T淋巴细胞亚群及其在排斥反应中的作用 |
| 1.3.2 B淋巴细胞与排斥反应 |
| 1.4 免疫抑制剂发展与运用 |
| 1.4.1 糖皮质激素类抑制剂 |
| 1.4.2 烷化剂类抑制剂 |
| 1.4.3 嘌呤合成抑制剂类 |
| 1.4.4 钙调磷酸酶抑制剂类 |
| 1.4.5 mTOR类抑制剂 |
| 1.4.6 中药类免疫抑制剂 |
| 1.5 三氧化二砷 |
| 1.5.1 细胞凋亡 |
| 1.5.2 活性氧与细胞凋亡 |
| 1.5.3 p53与细胞凋亡 |
| 1.5.4 Bcl-2家族与细胞凋亡 |
| 1.6 蛋白质组学 |
| 1.7 本研究目的、意义和内容 |
| 1.7.1 研究目的 |
| 1.7.2 研究意义 |
| 1.7.3 研究内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 实验耗材 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 细胞免疫学实验与方法 |
| 2.2.2 分子生物学实验与方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 第三章 结果与讨论 |
| 3.1 三氧化二砷对小鼠脾脏淋巴细胞的作用 |
| 3.1.1 三氧化二砷抑制淋巴细胞增殖 |
| 3.1.2 三氧化二砷抑制混合淋巴细胞反应 |
| 3.1.3 三氧化二砷不能诱导Treg细胞生成 |
| 3.1.4 三氧化二砷激活淋巴细胞内Caspase-3酶 |
| 3.1.5 三氧化二砷促进淋巴细胞凋亡 |
| 3.2 蛋白质组学探究三氧化二砷促淋巴细胞凋亡机制 |
| 3.2.1 差异表达蛋白分析 |
| 3.2.2 差异表达蛋白趋势分析 |
| 3.3 细胞学实验验证三氧化二砷对线粒体的影响 |
| 3.3.1 三氧化二砷降低淋巴细胞线粒体膜电位 |
| 3.3.2 三氧化二砷增多淋巴细胞内ROS含量 |
| 3.3.3 三氧化二砷破坏线粒体形态结构 |
| 3.4 分子实验验证三氧化二砷促淋巴细胞凋亡机制 |
| 3.4.1 三氧化二砷对线粒体凋亡通路相关蛋白的影响 |
| 3.4.2 三氧化二砷对线粒体凋亡通路相关基因表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 图表索引 |
| 图索引 |
| 表索引 |
| 附录二: 攻读硕士期间参与发表的论文 |
| 致谢 |
（4）紫草素抑制小鼠皮肤移植排斥反应及其免疫调节机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 移植排斥反应 |
| 一、T细胞在移植排斥反应中的作用 |
| 二、树突状细胞在移植排斥反应中的作用 |
| 三、吲哚胺2,3-双加氧酶在移植排斥反应中的作用 |
| 第二节 中药在抗移植排斥反应中的研究进展 |
| 一、祛风湿类中药 |
| 二、补益类中药 |
| 三、活血化瘀类中药 |
| 四、清热类中药 |
| 第三节 紫草素的研究进展 |
| 一、紫草素药代动力学及生物利用度的研究概况 |
| 二、紫草素药理作用的研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 紫草素对小鼠皮肤移植排斥反应的实验研究 |
| 一、实验材料及试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 紫草素联合Anti-CD25抗体对小鼠皮肤移植排斥反应的影响 |
| 一、实验材料及试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 紫草素对小鼠皮肤移植排斥反应的机制研究 |
| 一、实验材料及试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（5）沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分: 改良的供体小膀耽瓣-受体膀胱双层缝合建立大鼠肾移植模型 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分: 沙利度胺对大鼠肾移植急性排斥反应的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分: 沙利度胺对大鼠肾移植慢性排斥反应的作用及其免疫调节机制的初步研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分: 沙利度胺对异体反应性淋巴细胞的调控作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）猪心脏移植供心冷保存的研究及评价体系的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 缺血再灌注损伤 |
| 1.2 供心保存方法 |
| 1.2.1 单纯低温保存 |
| 1.2.2 连续灌注保存 |
| 1.2.3 间断灌注保存 |
| 1.2.4 高压混合气体干燥保存 |
| 1.3 RNA干扰与器官IRI |
| 1.3.1 RNAi的机理 |
| 1.3.2 介导基因沉默效应的其他手段 |
| 1.3.3 介导RNAi的方法 |
| 1.3.4 RNAi疗法面临的挑战 |
| 1.3.5 RNAi在不同器官抗IRI的应用 |
| 1.3.6 siRNA疗法在IRI的发展前景及应用中的难点 |
| 1.4 哺乳动物心脏模型 |
| 1.4.1 离体心脏模型 |
| 1.4.2 心脏移植模型 |
| 1.5 研究的目的与意义 |
| 第二章 靶基因SIRNA序列的设计及效果验证 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂与耗材 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.2.3 主要软件 |
| 2.2.4 siRNA的设计与合成 |
| 2.2.5 溶液配制 |
| 2.2.6 细胞培养 |
| 2.2.7 细胞转染 |
| 2.2.8 总RNA提取及反转录 |
| 2.2.9 Real Time qPCR |
| 2.2.10 统计学方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 Real Time qPCR结果 |
| 2.3.2 siRNA序列筛选 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 SIRNA心肌保存液的研制及其对冷保存猪心的作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂与耗材 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.2.3 主要软件 |
| 3.2.4 试验动物及分组 |
| 3.2.5 溶液配制 |
| 3.2.6 动物麻醉及手术 |
| 3.2.7 蛋白提取及浓度测定 |
| 3.2.8 Western Blot |
| 3.2.9 石蜡切片制作 |
| 3.2.10 TUNEL |
| 3.2.11 统计学方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 含TR的 siRNA保存液对冷保存供心靶基因的抑制效率 |
| 3.3.2 含TR的 siRNA保存液对冷保存供心细胞凋亡的作用 |
| 3.3.3 含TR保存液中siRNA最佳剂量的探索 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 大动物供心保存评价体系的建立 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试剂与耗材 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 主要软件 |
| 4.2.4 评价平台—大动物离体心灌流系统 |
| 4.2.5 评价平台—心脏原位移植模型 |
| 4.2.6 评价指标—左心室血流动力学 |
| 4.2.7 评价指标—心肌生存率 |
| 4.2.8 评价指标—心肌组织结构改变 |
| 4.2.9 评价指标—心肌坏死和氧化应激 |
| 4.2.10 评价指标—先天免疫激活和炎症水平 |
| 4.3 结果和讨论 |
| 4.3.1 评价平台—大动物离体心灌流系统 |
| 4.3.2 评价平台—心脏原位移植模型 |
| 4.3.3 评价指标 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 SIRNA心肌保存液对离体复跳猪心的作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试剂与耗材 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.2.3 主要软件 |
| 5.2.4 试验动物及分组 |
| 5.2.5 溶液配制 |
| 5.2.6 动物麻醉及供心获取 |
| 5.2.7 离体供心的再灌注复跳 |
| 5.2.8 心肌坏死和氧化应激指标检测 |
| 5.2.9 蛋白提取 |
| 5.2.10 Western Blot |
| 5.2.11 石蜡切片制作 |
| 5.2.12 TUNEL |
| 5.2.13 HE染色 |
| 5.2.14 血流动力学监测 |
| 5.2.15 统计学方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 siRNA保存液对离体复跳心左心室血流动力学指标的影响 |
| 5.3.2 siRNA保存液对离体复跳心组织生存率的作用 |
| 5.3.3 siRNA保存液对离体复跳心心肌组织结构改变的影响 |
| 5.3.4 siRNA保存液对离体复跳心生化指标的影响 |
| 5.3.5 siRNA保存液对离体复跳心先天免疫及炎症反应的影响 |
| 5.3.6 siRNA保存液对离体复跳心靶基因的抑制效果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 siRNA保存液促进心功能的恢复 |
| 5.4.2 siRNA保存液抗凋亡效果显着 |
| 5.4.3 siRNA保存液减轻了心肌结构改变 |
| 5.4.4 siRNA保存液减少了心肌坏死和氧化应激 |
| 5.4.5 siRNA保存液的安全性和抗炎作用 |
| 5.4.6 离体灌流猪工作心 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 SIRNA心肌保存液对原位移植猪心的作用 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 试剂与耗材 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.2.3 主要软件 |
| 6.2.4 试验动物及分组 |
| 6.2.5 溶液配制 |
| 6.2.6 动物麻醉及供心获取 |
| 6.2.7 原位心脏移植 |
| 6.2.8 血流动力学监测及样品采集 |
| 6.2.9 心肌坏死和氧化应激生化指标检测 |
| 6.2.10 蛋白提取 |
| 6.2.11 Western Blot |
| 6.2.12 石蜡切片制作及HE染色 |
| 6.2.13 TUNEL |
| 6.2.14 统计学方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 siRNA保存液对移植心血流动力学的影响 |
| 6.3.2 siRNA保存液对移植心组织生存率的作用 |
| 6.3.3 siRNA保存液对移植心心肌组织结构改变的作用 |
| 6.3.4 siRNA保存液对移植心心肌坏死和氧化应激生化指标的影响 |
| 6.3.5 siRNA保存液对移植心先天免疫及炎症反应的影响 |
| 6.3.6 siRNA保存液对移植心靶基因的抑制效果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 本章小结 |
| 第七章 全文总结 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 |
（7）输注FasL基因转染的血管内皮细胞抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 序言 |
| 第一章 Fas/FasL系统及其在维持T细胞稳态、细胞毒性效应尤其是肿瘤免疫和移植免疫中的作用 |
| 1.1 Fas和FasL的结构和功能介绍 |
| 1.2 FasL-Fas信号途径诱导凋亡的机制 |
| 1.3 FasL在维持免疫稳态中的作用 |
| 1.4 FasL与细胞介导的细胞毒性 |
| 1.5 FasL的转录水平和转录后调控 |
| 1.5.1 FasL转录水平的调控 |
| 1.5.2 FasL的转录后调控 |
| 1.6 Fas反击和肿瘤的免疫豁免 |
| 1.6.1 直接的肿瘤Fas反击：体外和体内的证据 |
| 1.6.2 肿瘤抵抗Fas介导的凋亡 |
| 1.7 Fas/FasL通路与移植免疫耐受 |
| 1.7.1 异体来源的胰岛细胞与FasL阳性细胞共同移植 |
| 1.7.2 FasL基因转染树突状细胞 |
| 1.7.3 FasL基因转染肝细胞 |
| 1.7.4 FasL基因转染造血细胞 |
| 1.7.5 FasL基因转染CD34+细胞 |
| 1.7.6 FasL基因转染内皮细胞 |
| 1.8 结语 |
| 第二章 FasL慢病毒载体的构建 |
| 2.1 FasL ORF克隆构建的实验报告 |
| 2.1.1 实验目的 |
| 2.1.2 实验材料与设备 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 实验结果 |
| 2.2 Lenti-rFasl/puro的包装 |
| 2.2.1 实验目的 |
| 2.2.2 材料报表 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.4 转染效果 |
| 2.2.5 实验结果 |
| 2.3 MBS101017H01病毒滴度检测报告 |
| 2.3.1 实验目的 |
| 2.3.2 实验材料 |
| 2.3.3 实验方法 |
| 2.3.4 实验结果 |
| 2.3.5 实验结果判定 |
| 2.3.6 实验结论 |
| 第三章 Wistar大鼠血管内皮细胞的培养及FasL基因的转染 |
| 3.1 大鼠主动脉内皮细胞的分离培养鉴定 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 培养方法 |
| 3.1.3 实验结果 |
| 3.1.4 结果讨论 |
| 3.2 管内皮细胞的转染 |
| 3.2.1 实验目的 |
| 3.2.2 实验材料 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.4 实验结果 |
| 第四章 大鼠急性肝移植排斥反应模型的建立 |
| 4.1 实验目的 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 大鼠肝移植手术方法 |
| 4.3.1 供体手术 |
| 4.3.2 供肝准备 |
| 4.3.3 受体手术 |
| 4.3.4 大鼠肝移植的手术操作技巧 |
| 4.4 数据收集与分析 |
| 4.5 术后各组大鼠生存状态和病理检查 |
| 4.6 结论 |
| 第五章 输注转染FasL基因的内皮细胞对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 我们的实验和结果讨论 |
| 5.2.1 研究背景及引论 |
| 5.2.2 材料与方法 |
| 5.2.3 实验结果 |
| 5.2.4 结果讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的论文 |
| SCI接收函 |
（8）雷公藤甲素急性肾毒性作用机制及抗氧化剂维生素C对肾脏的保护作用的研究（论文提纲范文）
| 主要缩略语英汉对照 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 氧化应激在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及发生机制的 研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 抗氧化剂维生素C对雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤的预防作 用及可能机制的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 综述 雷公藤属药物的研究现状 |
| 参考文献 |
| 附录:发表论文及参与课题情况 |
| 致谢 |
（9）寿胎丸抗大鼠卵巢移植急性排斥期细胞凋亡的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 移植免疫 |
| 一、同种异型抗原排斥反应发生的机制 |
| (一) 同种异型抗原是激发宿主产生移植排斥反应的主要因素 |
| (二) T细胞是识别同种异型抗原、介导移植排斥反应的关键细胞 |
| (三) 同种异型抗原识别的抗原提呈细胞 |
| (四) T细胞对同种异型抗原的识别模式 |
| 二、同种异体移植排斥反应的类型及效应机制 |
| (一) 宿主抗移植物反应 |
| (二) 移植物抗宿主反应 |
| 三、同种异体移植排斥反应的防治 |
| (一) 选择理想的供者 |
| (二) 移植物或受者的预处理 |
| (三) 抑制受者的免疫应答 |
| (四) 诱导受者产生针对移植物的免疫耐受 |
| 四、移植后的免疫监测 |
| 第二节 卵巢移植的研究现状 |
| 一、卵巢移植的意义 |
| 二、卵巢移植的理论依据 |
| 三、卵巢移植的部位 |
| 四、卵巢移植的方法 |
| 五、卵巢移植的方式 |
| 六、卵巢组织的冻融 |
| 七、移植卵巢的监测 |
| 第三节 细胞凋亡 |
| 一、细胞凋亡的表现 |
| (一) 凋亡的形态改变 |
| (二) 细胞凋亡的生化改变 |
| 二、细胞凋亡的机制 |
| (一) 胞外信号对凋亡的调节 |
| (二) 两条细胞凋亡信号转导途径 |
| (三) 凋亡相关的基因 |
| 三、诱导和抑制细胞凋亡的因素 |
| (一) 诱发细胞凋亡的因素 |
| (二) 抑制细胞凋亡的因素 |
| 四、细胞凋亡生理意义与疾病的发生和治疗 |
| (一) 细胞凋亡的生理学意义 |
| (二) 细胞凋亡与诸多疾病的发生有关 |
| (三) 细胞凋亡与疾病的有效治疗关系密切 |
| 五、女性生殖细胞的凋亡 |
| (一) 颗粒细胞凋亡与卵泡闭锁 |
| (二) 黄体细胞凋亡与黄体萎缩 |
| (三) 促排卵治疗中的凋亡机制 |
| 六、细胞凋亡与器官移植 |
| 第四节 中药抗排斥与调控细胞凋亡 |
| 一、中药抗移植排斥 |
| 二、中药调控细胞凋亡 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 寿胎丸对大鼠卵巢移植术后E2分泌的影响 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验动物 |
| (二) 主要仪器和试剂 |
| (三) 实验药物 |
| (四) 建立模型 |
| (五) 实验分组与药物观察 |
| 二、观察指标与检测方法 |
| (一) 一般情况 |
| (二) 阴道细胞涂片 |
| (三) 取血方法 |
| (四) 血清E2水平的检测 |
| (五) 数据处理与分析 |
| 三、结果 |
| (一) 各组大鼠一般情况 |
| (二) 阴道涂片观察各组大鼠动情情况 |
| (三) 卵巢移植后各组大鼠血清E2分泌的变化 |
| 四、讨论 |
| (一) 大鼠自体卵巢移植模型建立的关键点 |
| (二) 寿胎丸对自体卵巢移植大鼠E2分泌的影响 |
| (三) 寿胎丸对异体卵巢移植大鼠E2分泌的影响 |
| 第二节 寿胎丸对大鼠卵巢移植术后形态学的影响 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验动物分组及造模方法 |
| (二) 器械与设备 |
| 二、观察指标与检测方法 |
| (一) 解剖后大体标本观察 |
| (二) 移植卵巢光镜下形态学的观察 |
| (三) 移植卵巢超微结构观察 |
| (四) 数据处理与分析 |
| 三、结果 |
| (一) 移植卵巢大体标本观察 |
| (二) 光学显微镜下移植卵巢组织学观察 |
| (三) 移植卵巢超微结构观察 |
| 四、讨论 |
| (一) 自体卵巢经冻融移植后的生长情况 |
| (二) 移植排斥反应对移植卵巢内卵泡和黄体影响 |
| (三) 寿胎丸对自体移植卵巢内卵泡和黄体影响 |
| (四) 寿胎丸对异体移植卵巢内卵泡和黄体的影响 |
| 第三节 寿胎丸调控大鼠卵巢移植急性排斥期细胞凋亡的研究 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验动物分组及造模方法 |
| (二) 器械设备与试剂 |
| 二、观察指标与检测方法 |
| (一) 取材方法 |
| (二) TUNEL法操作规程 |
| (三) 凋亡指标Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的检测 |
| 三、结果 |
| (一) 自体移植与异体移植模型大鼠卵巢凋亡细胞数的比较 |
| (二) 自体卵巢移植大鼠不同时点凋亡细胞数的比较 |
| (三) 异体移植各组大鼠卵巢不同时点凋亡细胞数的比较 |
| (四) 自体移植与异体移植模型大鼠四种凋亡相关指标的变化 |
| (五) 自体卵巢移植大鼠四种凋亡相关指标的变化 |
| (六) 异体移植各组大鼠四种凋亡相关指标的变化 |
| 四、讨论 |
| (一) 细胞凋亡研究方法的选择 |
| (二) 移植排斥反应与细胞凋亡的相关性 |
| (三) 寿胎丸对移植卵巢细胞凋亡的影响 |
| (四) 寿胎丸对Bcl-2/Bax的调控作用 |
| (五) 寿胎丸对Fas/FasL的调控作用 |
| 第四节 寿胎丸抗卵巢移植急性排斥的作用与机制 |
| 一、寿胎丸的功效与中药药理 |
| 二、妊娠免疫调节 |
| 三、器官移植的免疫机制 |
| 四、寿胎丸抗卵巢移植急性排斥的作用机理 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 一、缩写词 |
| 二、在读期间发表的论文 |
| 致谢 |
（10）肾移植排斥反应的相关因子表达（论文提纲范文）
| 0学术背景 |
| 1 问题的提出 |
| 问题1:肾移植排斥反应后CD40的表达? |
| 问题2:肾移植排斥反应后CD30的表达? |
| 问题3:其他细胞因子的表达? |
| 2 问题的讨论 |
| 2.1 肾移植排斥反应后CD40的表达 |
| 2.2 肾移植排斥反应后CD30的表达 |
| 2.3 其他因子 |
| 3 结论 |
四、人类同种异体肾移植急性排斥反应中肾组织内Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的变化（论文参考文献）
- [1]Necrostatin-1对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用[D]. 马玉杰. 延边大学, 2021(02)
- [2]缺血损伤相关的新生表位在器官移植术后体液性排斥中的作用及机制研究[D]. 刘浩. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [3]三氧化二砷通过线粒体凋亡通路诱导淋巴细胞凋亡机制研究[D]. 薛梦姣. 厦门大学, 2019(09)
- [4]紫草素抑制小鼠皮肤移植排斥反应及其免疫调节机制研究[D]. 曾巧煌. 广州中医药大学, 2019(03)
- [5]沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的保护作用及机制研究[D]. 张岩. 山东大学, 2019(02)
- [6]猪心脏移植供心冷保存的研究及评价体系的建立[D]. 魏嘉. 上海交通大学, 2018(01)
- [7]输注FasL基因转染的血管内皮细胞抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究[D]. 刘伟. 中南大学, 2012(12)
- [8]雷公藤甲素急性肾毒性作用机制及抗氧化剂维生素C对肾脏的保护作用的研究[D]. 杨帆. 华中科技大学, 2011(12)
- [9]寿胎丸抗大鼠卵巢移植急性排斥期细胞凋亡的实验研究[D]. 朱淑惠. 广州中医药大学, 2010(09)
- [10]肾移植排斥反应的相关因子表达[J]. 邹本警,王赞涛,张永利. 中国组织工程研究与临床康复, 2009(18)