一、再生障碍性贫血患者骨髓间质干细胞培养及临床意义（论文文献综述）
吕建芳[1]（2021）在《肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究》文中认为目的建立SD雄性大鼠肾精亏虚模型,以骨髓造血干细胞为切入点,观察其凋亡情况,研究肾精亏虚对骨髓造血功能的影响,探讨其作用机制。观察龟鹿二仙胶对肾精亏虚骨髓抑制性贫血大鼠的治疗效果,通过其对大鼠的血象、骨髓象以及骨髓造血干细胞凋亡的影响,分析其“从肾论治”治疗肾精亏虚引起的骨髓抑制性贫血的作用机制。方法1、理论研究:系统回顾古今文献,阐述肾精、髓、血的中医理论研究及现代医学研究,立足肾精、髓以及血之间的关系,为肾精亏虚导致贫血提供中医理论依据。剖析龟鹿二仙胶的组方以及总结补肾填精法的现代医学临床应用。2、动物实验:SD雄性大鼠30只,SPF级,8周龄,体重270±20g,随机分为空白组、模型组、补肾组,每组10只。采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓以及长期小剂量苯皮下注射和短期大剂量环磷酰胺腹腔注射,建立肾精亏虚大鼠模型。整个造模过程用时49天。前4周模型组和补肾组大鼠按体质量皮下隔天注射苯（lm L/kg）,第25d开始用环磷酰胺（25mg/kg）腹腔注射,连续注射3d,同时每天用仿地震平台模拟地震振动（2次/日,共15-20分钟）以及光电刺激箱足底电击刺激（每日不定时1-3次）。空白组正常喂养。在第4周最后一天随机抽取模型组和补肾组各1只大鼠查外周血象及血清睾酮,检测模型是否成功。第29天开始,补肾组用龟鹿二仙胶灌胃,根据大鼠与人体表面积折算剂量比值,灌胃剂量为11g/Kg,分两次灌胃。给药期间每隔一天称重,根据体重调整给药剂量,连续21天。模型组和空白组大鼠给予等量去离子水灌胃,连续21天。造模过程中,每天观察各组大鼠的皮毛、进食量、活动状态等一般情况。造模结束后,每组大鼠通过眼内眦静脉取血法测外周静脉血红细胞（RBC）和血红蛋白（HGB）,观察其贫血程度;采用ELISA检测血清睾酮T以及用精子分析仪检测附睾精子质量,评价其生殖功能;取睾丸组织包埋切片,HE染色,观察其形态学的改变;分离胫骨,取新鲜骨髓,用PBS制备单细胞悬液,采用血红细胞计数板计数单核细胞数;取新鲜骨髓,制成骨髓涂片,瑞氏-吉姆萨染色,观察骨髓细胞的形态学改变;股骨包埋、切片,HE染色,观察骨髓增生情况;取新鲜骨髓包埋超薄切片,观察其超微病理改变。采用ELISA法检测各组EPO的含量;用流式细胞仪以及TUNEL法检测各组大鼠骨髓组织CD34+细胞凋亡情况;采用WB法检测各组大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Faslm RNA的表达水平。3、统计学处理:各组组间进行比较,所得数据均以均数±标准差（sx?）表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,单因素方差分析组间比较,采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果（1）与正常组相比,模型组大鼠出现毛发干枯、耸立不齐、进食量下降,活动度减少等现象。补肾组大鼠毛发恢复光泽、进食量增加、活动度增加,肾虚症状得到改善。（2）与空白组比较,模型组血红细胞（RBC）数量、血红蛋白（HGB）含量从14d开始下降,有显着性差异（p<0.01）;与模型组比较,补肾组血红细胞（RBC）数量、血红蛋白（HGB）含量从42d开始升高,有显着性差异（p<0.05）。（3）与空白组比较,模型组血清EPO含量下降,有显着性差异（P<0.01）;与模型组比较,补肾组血清EPO含量升高,有显着性差异（P<0.01）。（4）睾丸病理切片显示,空白组睾丸曲细精管被膜完整,支持细胞形态正常,曲细精管管腔内可见大量精子;模型组曲细精管生精上皮明显变薄,细胞层次杂乱,支持细胞形态断裂,曲细精管管腔内精子细胞、精子数量明显减少;补肾组曲细精管被膜完整,细胞排布紧密,生精细胞数略有减少,部分区域可见脱落的少量生精细胞,但结构清楚,层次较分明,管腔内有较多精子。（5）与空白组比较,模型组附睾精子浓度及精子活力均下降（P<0.05）;模型组血清T含量明显下降（P<0.01）;与模型组比较,补肾组附睾精子浓度及精子活力均明显升高（P<0.01）,补肾组血清T含量升高,有显着性差异（P<0.01）。（6）骨髓象显示,与空白组比较,模型组骨髓有核细胞数量减少（P<0.05）;与模型组比较补肾组骨髓有核细胞数量增加,有显着性差异（P<0.05）。骨髓涂片可见空白组骨髓造血结构完整,组织丰富;模型组骨髓增生降低,巨核细胞减少;补肾组造血网织红细胞虽增加,但仍没有恢复正常水平。骨髓病理切片显示:空白组造血细胞多且分布均匀,骨髓造血组织支架结构紧密,脂肪细胞数量少;模型组造血组织面积减少,巨核细胞少见,造血细胞数目减少,内皮细胞、脂肪细胞等非造血细胞数目增多;补肾组造血结构组织基本修复,巨核细胞增多,造血细胞增加,仍可见脂肪细胞等非造血细胞。（7）骨髓超微病理形态学检测示:空白组大鼠可见造血干细胞为圆形,单核,核大,细胞质少,可见线粒体,线粒体内膜折叠成较深的嵴。模型组大鼠造血干细胞可见线粒体数量减少,嵴变浅或消失,线粒体肿胀,可见凋亡小体。补肾组大鼠造血干细胞有核细胞增多,凋亡小体少见,线粒体的数量增多,线粒体嵴有所恢复。（8）与空白组比较,骨髓石蜡包埋切片TUNEL法检测发现模型组可见较多凋亡CD34+细胞的绿色荧光点,流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡的数量明显增加（P<0.05）;与模型组比较,补肾组石蜡包埋切片TUNE L法检测骨髓组织绿色荧光点数量减少,流式细胞仪检测CD34+细胞凋亡的数量降低（P<0.05）。（9）WB检测大鼠胫骨骨髓新鲜组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白表达结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白含量表达降低（P<0.05）,Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量表达均升高（P<0.05）。与模型组比较,补肾组Bcl-2蛋白含量表达升高（P<0.05）,Bax、caspase-3、Fa s和Fasl蛋白含量表达均减少（P<0.05）。（10）RT-PCR检测大鼠胫骨骨髓新鲜组织Bcl-2、Bax、caspase-3、Fa s和Faslm RNA含量与空白组比较,模型组Bcl-2m RNA含量降低（P<0.05）,Baxm RNA、caspase-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均升高（P<0.05）。与模型组比较,补肾组Bcl-2m RNA蛋白含量升高（P<0.05）,Baxm RNA、caspa se-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均减少（P<0.05）。结论“肾藏精,生髓,化血”,肾藏先天之精,肾气促脾胃化生水谷精微而藏之,而“精血同源”,肾精是化生血液的重要物质基础。肾精亏虚则血液化生无源而导致血虚。肾主人体发育,也主骨髓生长发育,肾精充足,则骨髓充盈,反之肾精不足,骨髓空虚。骨髓具有化生血液的作用,髓化生血液主要取决于肾的功能,肾精亏虚则会导致骨髓功能低下,化生血液出现障碍而致血虚。本课题基于中医“肾藏精、精生髓,髓生血,精化血”理论,以肾精亏虚则会导致血虚为实验的病理依据,以造血干细胞作为切入点。研究肾精亏虚对造血功能的影响及其作用机制。以“恐伤肾”传统病因造模结合药物干预病理造模,采用模拟地震平台复合光电刺激法结合长期小剂量的苯和短期大剂量的环磷酰胺药物干预,建立肾精亏虚大鼠模型。大鼠出现肾虚症状,血液检查可以看到血红细胞数量和血红蛋白含量降低,血清EPO含量下降,血清睾酮含量降低。骨髓象可以见到骨髓有核细胞数量减少,骨髓造血组织结构疏松、造血面积减少、造血细胞减少。超微病理形态学可以观察到骨髓造血干细胞线粒体肿胀,线粒体嵴变浅,出现凋亡小体的超微病理改变。龟鹿二仙胶灌胃治疗后,能够改善肾精亏虚的症状,促进血红细胞数量和血红蛋白含量增高,血清EPO含量升高,血清睾酮含量增加,骨髓有核细胞数量增加,骨髓造血组织得到修复。骨髓造血干细胞线粒体数量增加,凋亡小体减少,减少骨髓CD34+细胞的凋亡。本实验结论归纳如下:（1）利用“仿地震平台及光电刺激+苯+环磷酰胺”成功建立肾精亏虚雄性大鼠模型。（2）肾精亏虚大鼠血清EPO含量下降,骨髓组织抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白、Bcl-2m RNA含量下降,促凋亡蛋白Bax蛋白及Baxm RNA表达增加,激活了线粒体/细胞色素c通路,发生级联效应,激活Caspase-3蛋白,诱导骨髓CD34+细胞的凋亡。骨髓Fas和Fasl蛋白及Fas和Faslm RNA含量升高,激活了死亡受体途径,激活Caspase-3蛋白,诱导CD34+细胞细胞的凋亡。CD34+细胞过度凋亡,骨髓造血干细胞活性降低,可能是肾精亏虚导致骨髓抑制影响骨髓造血功能的机制之一。（3）首次采用龟鹿二仙胶治疗肾精亏虚,改善骨髓造血功能。龟鹿二仙胶能有效缓解肾精亏虚大鼠的症状,治疗骨髓抑制性贫血有效。提高血清EPO含量,促进抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达,抑制促凋亡蛋白Bax蛋白、Fas和Fasl蛋白的表达,减少Caspase-3蛋白的表达,抑制CD34+细胞的凋亡,从而保护造血干细胞。刺激骨髓造血干细胞的增殖,避免其发生过度凋亡,可能是龟鹿二仙胶发挥其疗效机制之一。（4）从生成来源和生物学功能来看,EPO可能是肾精的物质基础之一。（5）造血干细胞是肾精在细胞层次的表现形式,是“肾精化血”功能的执行者。
莫文苑[2]（2020）在《Shh蛋白在再生障碍性贫血骨髓中表达及相关性研究》文中认为背景与目的再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）是一种由不同病因和机制引起的骨髓造血功能衰竭症,中国的年发病率为0.74/10万人,青年人和老年人发病率较高。AA按照病因可分为遗传性及获得性,目前认为原发性获得性AA的发生发展与造血干祖细胞缺陷、造血微环境异常、免疫异常等因素相关。音猬因子信号通路（Sonic Hedgehog,SHH）参与人体的胚胎发育,具有调控造血干细胞增殖分化作用,并通过调节血管新生因子、细胞周期、促进成骨细胞分化并抑制脂肪细胞分化等机制参与机体造血过程。Shh信号通路是否参与再生障碍性贫血患者的发病过程?目前相关研究较少。本研究通过检测再生障碍性贫血患者骨髓组织中Shh蛋白表达情况,并分析其与AA患者骨髓增生程度、外周血细胞计数、淋巴细胞亚群、生存期等的相关性,旨在探究Shh在再生障碍性贫血发病过程中的作用。方法1.回顾性分析自2010年1月至2019年12月在广东药科大学附属第一医院血液内科住院并确诊的33例获得性AA患者的临床资料,采用电子病历收集患者的基本信息、临床资料、辅助检查和实验室检查结果,随访患者生存情况。2.于病理科调取33例AA患者住院时的骨髓活检组织,应用免疫组化方法检测骨髓组织中Shh蛋白表达情况,同时选取20例缺铁性贫血患者骨髓活检组织作为正常对照,应用ImagePro Plus 6软件进行测量、取值,分析Shh蛋白表达在AA组与正常对照组的差异,Shh蛋白在不同AA分型、性别、年龄、不同骨髓增生程度中的表达差异,AA患者Shh蛋白表达水平与外周血细胞计数、淋巴细胞亚群的相关性,分析Shh表达水平对AA患者生存期的影响。3.采用SPSS Stastistics-24软件统计分析,应用t检验或非参数检验分析不同组别Shh蛋白表达水平的差异性;应用线性相关及线性回归分析Shh蛋白与外周血细胞计数相关性;Kaplan-Meier法进行生存分析。结果1.AA患者骨髓中Shh蛋白表达水平明显低于正常对照组（P=0.009）。2.Shh蛋白在AA患者不同分型（重型/非重型）、增生程度（活跃/低下）、性别（男/女）、年龄（>48岁/≤48岁）组中表达水平均无明显差异（P>0.05）。3.AA患者Shh蛋白表达水平与白细胞计数（P=0.022）、淋巴细胞计数（P=0.047）、CD4+/CD8+细胞比值（P=0.027）呈正相关;与血小板计数、红细胞计数、中性粒细胞计数、网织红细胞计数无明显相关性（P>0.05）。4.Shh蛋白高表达组与低表达组之间CD3-CD16+CD56+细胞百分比、CD3-CD19+细胞百分比、CD3+细胞百分比、CD4+/CD8+比值无明显差异（P>0.05）。5.非重型AA与重型患者之间生存曲线有差异,非重型AA生存率优于重型AA（P=0.007）;AA患者Shh高表达组与Shh低表达组、骨髓增生活跃组与骨髓增生低下组、CD4+/CD8+细胞比值正常组与异常组之间生存率均无明显差异（P>0.05）。结论1.AA患者骨髓Shh蛋白表达明显低于正常对照组,Shh蛋白表达低下可能是参与AA患者发病因素之一。2.AA患者骨髓Shh蛋白表达水平与白细胞计数、淋巴细胞计数、CD4+/CD8+比值正相关。3.不同分型是影响AA患者生存率的重要因素。
尹相丛[3]（2019）在《瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血的影响及机制研究》文中研究说明再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）患者存在骨髓过度脂肪化、间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）成脂能力增强以及骨髓微环境中瘦素（leptin,LEP）积聚的特点。LEP是由肥胖基因编码、脂肪细胞合成并分泌的细胞因子样激素,通过与瘦素受体（leptin receptor,LEP-R）相结合而发挥多种生物学作用,如调节机体的食物摄入、能量消耗和脂肪存贮等。在骨髓微环境中脂肪细胞也能分泌LEP,并可作用于MSC,使其向成骨分化,同时抑制其向脂肪细胞分化。然而此作用在AA造血微环境中并未见发挥。由此推断在AA骨髓微环境中MSC存在对LEP失利用的现象,可能由于MSC表面瘦素受体（leptin receptor,LEP-R）被破坏,LEP不能被正常利用,导致MSC成脂分化能力增强、成骨分化能力减弱,从而产生骨髓过度脂肪化的结果。另外,LEP还具有活化淋巴细胞的免疫调节功能。AA患者骨髓微环境中不断积聚的LEP可活化T淋巴细胞,诱导其向Th1方向分化,此通路与免疫介导的AA发病机理一致。LEP对T淋巴细胞的活化,将AA的免疫异常扩大,继而加重MSC的免疫损伤,导致恶性循环,由此推断LEP在AA免疫异常及成脂、成骨紊乱过程中都起重要的作用,这可能是造成AA的免疫发病机制原因之一,也可能是免疫抑制剂治疗效果不良的原因之一。LEP的生成及活化T细胞是在AA发病过程中的重要环节,若能阻断LEP的合成或者拮抗其免疫调节作用则有望打断免疫紊乱的恶性循环,从而减轻AA的发生和发展程度。本研究通过对免疫介导LEP基因缺陷小鼠和正常小鼠AA模型进行体内、体外实验研究,在细胞、分子以及基因水平进行检测并比较两种小鼠模型之间及其与各自对照组之间的差异,以验证上述的LEP失利用和LEP扩大免疫信号的假说,通过LEP干预治疗阻断AA的免疫损伤进程,以期从造血微环境代谢层面为寻求AA治疗的新方法奠定基础。第一部分瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血的影响研究目的:将LEP缺陷的小鼠AA模型与正常小鼠AA模型分别与各自对照组小鼠进行比较,检测在发病过程中不同时间段小鼠的一般状态、骨髓衰竭情况和骨髓脂肪化程度。研究方法:1.采用免疫介导的方法分别建立LEP基因缺陷ob/ob小鼠（C57BL/6小鼠为建模基础,以下简称LEP缺陷小鼠）和正常C57BL/6小鼠（以下简称正常小鼠）的AA模型,分别用LEP缺陷C57BL/6小鼠和正常C57BL/6小鼠做对照;2.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天观察小鼠的一般状态变化;3.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天检测小鼠的血常规变化;4.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天观察小鼠的骨髓病理形态学改变。对LEP缺陷小鼠模型和正常小鼠模型各时间段的上述各项指标进行统计学比较。结果:1.造模后正常小鼠逐渐出现进食量少、活动减少;皱毛、脱毛、弓背以及体质量下降等表现。而LEP缺陷小鼠造模后也出现上述表现,但其程度较正常小数模型组均明显减轻。2.LEP缺陷小鼠和正常小鼠造模后外周血白细胞（white blood cell,WBC）、红细胞（red white blood cell,RBC）、血红蛋白（hemoglobin,HB）、血小板（platelet,PLT）计数均迅速下降,差异有统计学意义（P<0.05）;但LEP缺陷小鼠模型组的WBC、RBC、PLT下降幅度均比正常小鼠模型组小,血象最低值也较正常小鼠模型组高,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;3.造模后正常小鼠模型组骨髓中正常的造血组织结构逐渐被破坏、造血细胞逐渐减少,脂肪组织取而代之;到+18d骨髓被大量的脂肪细胞填充。LEP缺陷的模型组小鼠也可见造血结构逐渐被破坏,+6天起骨髓表现增生减低,有少量脂肪细胞,造血面积减少,随后骨髓造血细胞逐渐减少,脂肪化程度逐渐加重,到+18d造血细胞被脂肪细胞部分取代,但较正常小鼠模型组造血组织结构破坏和脂肪化程度均减轻。结论:阻断LEP基因表达的小鼠AA模型骨髓脂肪化和骨髓衰竭程度均减轻,提示阻断LEP可能通过减轻骨髓脂肪化而改善骨髓造血功能;第二部分瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血影响的机制研究研究目的:将LEP缺陷的小鼠AA模型与正常小鼠AA模型分别与其各自对照组小鼠比较,检测在发病过程中不同时间段骨髓组织中成脂基因（C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ）和成骨基因（RUNx2）的表达情况;血清、骨髓以及MSC表面LEP-R表达水平的变化与差异;CD4+T/CD8+T比例倒置和Th1/Th2升高等免疫信号扩大化的情况。研究方法:1.采用免疫介导的方法分别建立LEP基因缺陷ob/ob小鼠（C57BL/6小鼠为建模基础,以下简称LEP缺陷小鼠）和正常C57BL/6小鼠（以下简称正常小鼠）的AA模型,分别用LEP缺陷C57BL/6小鼠和正常C57BL/6小鼠做对照;2.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天用流式细胞术检测小鼠的外周血中CD4+、CD8+T细胞亚群的比例;3.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosobent assay,ELISA）检测小鼠血清中可溶性瘦素受体（soluble leptin receptor,sLEP-R）、Th1类细胞因子（IFN-γ、IL-2）、Th2类因子（IL-4、IL-5）的变化;4.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天用免疫组化法检测小鼠骨髓组织中LEP-R的表达;5.分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天用实时荧光定量PCR方法检测小鼠骨髓组织中成脂基因（C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ）和成骨基因（RUNx2）的表达水平6.分离并培养小鼠MSC,分别于造模后第0,3,6,9,12,15,18天用实时荧光定量PCR方法检测小鼠骨髓MSC表面的LEP-R表达水平。对LEP缺陷小鼠模型和正常小鼠模型各时间段的上述各项指标进行统计学比较。结果:1.LEP缺陷小鼠模型组和正常小鼠模型组骨髓组织中成脂基因C/EBPα、C/EBPβ和PPARγ的表达均逐渐上升,差异有统计学意义（P<0.05）;但LEP缺陷小鼠模型组成脂基因表达水平均比正常小鼠模型组低,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;LEP缺陷小鼠模型组和正常小鼠模型组骨髓组织中骨基因RUNx2的表达逐渐下降,差异有统计学意义（P<0.05）;但LEP缺陷小鼠模型组的成骨基因表达水平表达较正常小鼠模型组高,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;2.LEP缺陷模型小鼠和正常模型小鼠造模后血清中sLEP-R水平均呈逐渐下降趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;但与正常小鼠模型组相比LEP缺陷小鼠模型组造模后的sLEP-R水平下降幅度小,表达水平也始终比正常小鼠模型组高,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;LEP缺陷小鼠模型和正常小鼠模型骨髓组织中LEP-R的表达在造模后均呈逐渐下降趋势;但LEP缺陷小鼠模型下降程度较正常小鼠模型组明显减轻;LEP缺陷小鼠及正常小鼠在造模后MSC表面的LEP-R基因表达呈逐渐下降趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;但LEP缺陷小鼠模型组的下降幅度也较正常小鼠模型组小,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;3.LEP缺陷模型组小鼠和正常小鼠造模后CD4+T细胞值均低于其对照组,且呈逐渐下降趋势;差异有统计学意义（P<0.05）;CD8+T细胞值均高于其对照组,且呈逐渐上升趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;CD4+T/CD8+T比值也随之倒置,且呈现逐渐下降趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;但正常小鼠模型较LEP缺陷小鼠模型CD4+T/CD8+T比例倒置程度减轻,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;4.LEP缺陷小鼠模型组和正常小鼠模型组造模后均出现Th1类细胞因子（IFN-γ、IL-2）逐渐升高,Th2类细胞因子（IL-4、IL-5）逐渐降低,差异有统计学意义（P<0.05）;但LEP缺陷小鼠的模型组IFN-γ、IL-2升高和IL-4、IL-5降低的程度均较正常小鼠模型组轻,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.阻断LEP基因表达的小鼠AA模型成骨基因水平增高、成脂基因水平减低,MSC上的LEP-R减少,提示骨髓微环境中LEP的失利用导致骨髓过度脂肪化;2.在阻断LEP基因表达的AA小鼠模型中,Th1/Th2比例增高情况较正常小鼠AA模型减弱,提示LEP通过免疫瀑布效应加重AA的免疫异常,阻断LEP基因可能通过阻断免疫瀑布效应,减轻AA的发生和发展程度。3.本课题首次提出了LEP代谢紊乱引起AA骨髓成脂及免疫信号扩大化,因此,推测减少LEP基因表达、增加LEP-R水平或提高LEP-R与LEP结合的敏感性可能成为AA治疗的新思路和方法。
钱娟[4]（2019）在《重组人血小板生成素对造血细胞、间充质干细胞作用的基础及临床研究》文中指出第一部分 重组人血小板生成素对32D细胞、间充质干细胞体外作用及机制研究目的探讨重组人血小板生成素（rhTPO）对经再生障碍性贫血（AA）患者血清处理后的小鼠32D细胞及大鼠骨髓间充质干细胞的体外作用及可能作用机制,以阐明其治疗再障的机制。方法（1）用CCK8法及台盼蓝活细胞计数实验验证不同浓度rhTPO（50u/ml、100u/ml、150u/ml和200u/ml）对稳定转染rhTPO受体（32D-MPL）的32D细胞增殖能力的影响,得到rhTPO促进32D细胞增殖能力的最佳浓度;（2）将32D细胞分成4组:①空白对照组（32D细胞+正常FBS血清）;②AA组（32D细胞+正常FBS血清+再障血清）;③rhTPO对照组（32D细胞+正常FBS血清+rhTPO）;④rhTPO组（32D细胞+正常FBS血清+再障血清+rhTPO）;大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）分成3组:①正常BMSC;②AA组（正常BMSC+AA血清）;③rhTPO组（正常BMSC+AA血清+rhTPO）,用CCK8法及台盼蓝染色法检测不同培养条件下的细胞的增殖能力及生长曲线;（3）用Annexin V-FITC标记各组32D细胞和大鼠BMSC细胞,并用流式细胞仪分析,检测AnnexinV+/PI-比例,了解细胞凋亡情况;（4）用流式细胞仪检测不同培养条件下的对数生长期大鼠BMSC的细胞周期;（5）用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测抗凋亡基因Survivin和BCL-2及促凋亡相关基因BAX以及基因Bcl-xl、c-myc的mRNA的表达;（6）用免疫印迹法（Western-blot）检测STAT3、STAT5、抗凋亡基因Survivin和BCL-2、促凋亡相关基因BAX及Bcl-xl、c-myc的蛋白表达;同样的方法检测不同组别的大鼠BMSC的c-MPL的蛋白表达。结果（1）经再障血清处理后的32D细胞凋亡率明显升高,显着抑制32D细胞增殖,加入rhTPO能降低细胞的凋亡率,促进32D细胞增殖,但rhTPO无法使其恢复到正常血清组细胞的增殖水平;（2）再障血清组32D细胞内的STAT3蛋白磷酸化水平高于正常血清组,STAT5蛋白磷酸化表达水平明显低于正常血清组;经rhTPO处理后再障血清组STAT3蛋白磷酸化水平下调,STAT5蛋白磷酸化水平上调,差异均具有统计学意义。（3）再障血清组32D细胞抗凋亡基因Survivin和BCL-2的mRNA及蛋白水平明显下降,经rh,IPO处理后mRNA及蛋白表达水平均显着上调（P<0.05）;再障血清组32D细胞促凋亡基因BAX的mRNA及蛋白水平明显上升,经rhTPO处理后mRNA及蛋白表达水平均显着下调（P<0.01）;相对于正常血清组,rhTPO处理后正常血清组32D细胞BAX蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,而mRNA水平无明显变化;（4）再障血清培养大鼠BMSC细胞,加rhTPO刺激后促进BMSC增殖及表面c-MPL的表达,并能抑制细胞凋亡,且具有统计学意义。结论（1）32D细胞经再障血清处理后,凋亡率明显增加,加入rhTPO能逆转32D细胞的凋亡率,促进32D细胞增殖,但无法使再障血清组细胞恢复至正常血清组细胞增殖水平。（2）rhTPO作用于再障血清组32D细胞,可上调抗凋亡基因（Survivin、BCL-2）mRNA及蛋白表达水平;并下调促凋亡基因（BAX）mRNA及蛋白表达水平,两者差异均有统计学意义;（3）rhTPO可促进AA血清培养后大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及c-MPL的表达,抑制细胞凋亡。第二部分 rhTPO联合激素及环孢素A治疗免疫相关性血细胞减少症20例近期疗效及安全性目的评价重组人血小板生成素（rhTPO）联合激素及环孢素对免疫相关性血细胞减少症（IRH）近期疗效及安全性的影响。方法回顾性分析激素及环孢素联合rhTPO治疗20例成人IRH患者,以同期单用标准激素及环孢素方案的14例患者为对照组,比较两组患者血液学反应及血小板恢复情况,以及安全性评价。结果治疗后2周,rhTPO组患者血小板升高较对照组明显（P<0.05）;治疗后6周,rhTPO组患者血红蛋白较对照组升高明显（P<0.05）;rhTPO组患者脱离血小板输注时间较对照组短。治疗4周后,rhTPO组与对照组脱离血小板输注时间无统计学差异,rhTPO联合治疗组在治疗后2周、4周、6周红细胞输注量的差异无统计学意义,而治疗后8周的红细胞输注量有统计学差异,治疗后3个月及6个月,rhTPO组患者与对照组患者血液学反应无明显统计学差异。结论rhTPO提高IRH的早期血液学反应率,加快血小板恢复,且安全性高。
于虹[5]（2017）在《白细胞免疫球蛋白样受体A3在重型再生障碍性贫血中作用的研究》文中研究表明目的:前期采用蛋白质组学技术,研究重型再生障碍性贫血（Severe aplastic anemia,SAA）患者与正常人髓样树突状细胞（m DC）和骨髓CD34+细胞的差异蛋白质成份,初步筛选有同源性的差异蛋白质,即激活SAA免疫反应可能的抗原物质,研究SAA患者m DC及CD34+细胞内差异蛋白质表达水平,与患者临床资料的相关性,及其对m DC、效应T细胞及靶细胞的影响,探讨此差异蛋白质调控SAA自身免疫状态的机制及其在SAA发病中的作用,为进一步阐明SAA免疫发病机制提供理论依据。构建免疫介导骨髓衰竭小鼠模型,评价模型的免疫状态,通过SAA小鼠模型分析差异蛋白质在小鼠体内表达水平,为后续探索SAA免疫发病的始动因素、指导免疫抑制剂的临床应用、减少病情复发,提供实验依据。方法:选取天津医科大学总医院血液科,自2014年4月至2017年4月收治的未经治疗的初治SAA患者（初诊组）、经免疫抑制治疗后缓解的SAA患者（恢复组）及正常对照者作为研究对象。C57BL/6小鼠,BALB/c小鼠,CBy B6F1小鼠,饲养于中国医学科学院放射医学研究所的动物实验中心,SPF级动物房。第一部分:初步探索致SAA免疫激活成因的靶抗原物质。课题组前期,采用体外诱导培养将SAA患者及正常人的单核细胞,分化为成熟的m DC,流式细胞仪分选得到高纯度m DC,提取总蛋白,进行双向电泳分离蛋白质,取差异蛋白质点进行比对,明确SAA患者m DC内与正常人不同的蛋白质成分。应用免疫磁珠法分选SAA患者及正常人骨髓CD34+细胞,提取总蛋白,将蛋白质酶解,应用i TRAQ标记样品,应用多维液相色谱分离样品并串联质谱Q Exactive进行蛋白质分析,应用数据库检索鉴定蛋白质,并比较这些蛋白质的表达差异。本部分对SAA患者与健康人m DC与CD34+细胞蛋白质组学中筛选出的差异蛋白质进行同源性比对,明确SAA患者m DC与CD34+细胞内差异蛋白质成分有无同源性或交叉性,即导致SAA发病可能的抗原物质。第二部分:检测筛选出的差异蛋白质成分在SAA及正常人体内的表达。选取26例SAA初治患者、22例SAA恢复期患者及18名健康正常人,采用流式细胞术（FCM）检测SAA患者m DC与CD34+细胞内同源性差异蛋白质成分白细胞免疫球蛋白样受体（leukocyte immunoglobulin like receptors,LILRs）A亚型在m DC细胞、CD34+细胞、CD3+CD8+等多种细胞内表达;实时定量RT-PCR技术检测骨髓单个核细胞（BMMNC）、m DC细胞、CD34+细胞内其mRNA相对表达水平;使用免疫印迹法（Western Blot）检测SAA患者LILRA表达。同期检测上述SAA患者m DC细胞数量,增殖、活化因子表达;CD34+细胞数量,凋亡、细胞因子表达;CD3+CD4+/CD3+CD8+比值、Th1/Th2比例、CTL细胞数量,功能、细胞因子表达;分析其与上述检测结果及SAA患者病情进行相关性分析。第三部分:体外细胞模型验证筛选出的差异蛋白质成分LILRA对m DC的激活作用,并验证骨髓靶细胞内表达筛选出的差异蛋白质成分而受到CTL攻击。应用RNAi敲除差异蛋白质成分,分选SAA患者及正常健康人的CD11C+HLA-DR+细胞作为m DC细胞,分选CD8+MHC-I+T细胞作为效应CTL细胞,分选CD34+细胞或阴性分选去除CD3+T细胞后作为靶细胞;体外将m DC细胞与CTL细胞混合培养,检测基因表达减低前后m DC细胞抗原递呈功能变化,m DC细胞对CTL激活的作用;体外将CTL细胞与靶细胞混合培养,检测基因表达减低前后CTL对造血靶细胞的凋亡作用。第四部分:初步建立免疫介导的骨髓衰竭小鼠模型。模型小鼠经非致死剂量照射后,其造血干细胞和骨髓微环境损伤严重,当输入次要组织相容性抗原不合的小鼠淋巴结细胞后,可进一步诱导免疫性骨髓造血功能损伤的模型。检测血细胞计数、骨髓细胞计数及形态;骨髓细胞培养克隆形成实验,脾脏、肝脏和骨髓组织病理;流式细胞术检测骨髓LSK及人LILRs在鼠类的同源物成对的免疫球蛋白样受体（paired immunoglobulin-like receptors,PIRs）的表达。结果:第一部分:课题组前期鉴定SAA患者与健康正常人m DC细胞蛋白成分的差异表达,其中20个在初诊组上调,21个在初诊组下调。课题组前期明确SAA患者与健康正常人CD34+细胞蛋白成分的差异表达,其中54个在初诊组上调,103个在初诊组下调。我们对在初诊组表达上调的差异蛋白分别进行同源性或交叉性对比。我们发现与正常人的m DC细胞相比,SAA患者m DC细胞内白细胞免疫球蛋白样受体A3（leukocyte immunoglobulin like receptor A3,LILRA3）表达增高;与正常人的CD34+细胞相比,SAA患者CD34+细胞内白细胞免疫球蛋白样受体A5（LILRA5）表达增高;经BLAST序列比对及文献结构分析显示LILRA3与LILRA5胞外结构域的氨基酸序列高度同源,具有高结构同源性,并与相同的MHC-I配体结合。实时定量PCR技术检测其BMMNC LILRA（1-6）mRNA相对表达水平,SAA初诊组LILRA3 mRNA相对表达水平（3.51±3.29）明显高于正常对照组（1.37±0.96）（P<0.05）,恢复组（2.45±1.77）明显高于正常对照组（P<0.05）,初诊组和恢复组比较差异无统计学意义,SAA组LILRA5mRNA相对表达水平较正常对照组有升高趋势,但差异无统计学意义。第二部分:检测LILRA在SAA及正常人体内的表达。流式细胞术检测SAA初诊组骨髓LILRA3+/CD34+比例[（47.05±32.07）%]明显高于正常对照组[（14.26±14.00）%]（P<0.05）,恢复组[（39.86±19.46）%]高于正常对照组（P<0.05）。SAA初诊组骨髓LILRA3+/CD11C+HLA-DR+比例[（73.11±22.54）%]明显高于正常对照组[（48.64±38.03）%]（P<0.05）,恢复组[（60.22±23.69）%]和正常对照组比较差异无统计学意义。q RT-PCR技术检测m DC细胞内LILRA3 mRNA相对表达水平,初诊SAA患者m DC细胞内LILRA3 mRNA相对表达水平（1.79±1.30）明显高于正常对照组（0.77±0.72）（P<0.05）,初诊组和恢复组（1.47±0.99）、恢复组和正常对照组比较差异无统计学意义。Western Blot显示初诊组患者m DC细胞内LILRA3蛋白水平明显升高。SAA组骨髓LILRA3+/CD34+比例与血小板数量呈负相关（r=-0.497,P<0.05）,与血红蛋白数量呈负相关（r=-0.427,P<0.05）,SAA组骨髓LILRA3+/CD34+比例与LILRA3+/CD11c+HLA-DR+比例呈正相关（r=0.330,P<0.05）,LILRA3+/CD11c+HLA-DR+比例与LILRA3 mRNA表达水平呈正相关（r=0.344,P<0.05）。第三部分:体外细胞模型分选m DC细胞,CD8+T细胞,CD34+细胞及阴性分选CD3-T细胞;检测LILRA3的配体HLA-A/B/C在CD8+T细胞上的表达,结果显示HLA-A/B/C+/CD3+CD8+比例在SAA初诊组、恢复组和正常对照组比较均无显着性差异;敲低m DC和靶细胞LILRA3表达后,我们分别检测了混合培养后CTL的功能效应分子CD178（Fas L）的表达,以及CD34+细胞凋亡分子CD95（Fas）的表达,结果示初诊SAA患者（组1）CD178+/CD3+CD8+的比例[（14.22±6.74）%]明显高于（组2）初诊SAA患者m DC细胞与正常对照者CTL混合培养组[（4.53±1.73）%]和（组3）初诊SAA患者LILRA3表达减低的m DC细胞与正常对照者CTL混合培养组[（4.67±1.60）%]（P<0.05）,组2和组3比较差异无统计学意义（P>0.05）。初诊SAA患者（组1）CD95+/CD34+的比例[（78.24±27.60）%],初诊SAA患者CD34+/靶细胞与正常对照者CTL混合培养组（组2）[（62.24±16.18）%],初诊SAA患者LILRA3表达减低的CD34+/靶细胞与正常对照者CTL混合培养组（组3）[（46.59±26.00）%],三组比较均无显着性差异（P>0.05）。初诊SAA患者（组1）靶细胞凋亡率为[（39.86±15.91）%],初诊SAA患者CD34+/靶细胞与正常对照者CTL混合培养组（组2）[（35.03±21.09）%],初诊SAA患者LILRA3表达减低的CD34+/靶细胞与正常对照者CTL混合培养组（组3）[（36.03±22.09）%],三组比较均无显着性差异（P>0.05）。初诊SAA患者（组1）CTL细胞活性为[（2.27±1.76）%]明显高于初诊SAA患者LILRA3表达减低的m DC细胞与正常对照者CTL混合培养组（组3）[（1.39±0.25）%]（P<0.05）,初诊SAA患者m DC细胞与正常对照者CTL混合培养组（组2）[（2.87±1.06）%]和其它两组比较均无显着性差异（P>0.05）。第四部分:初步建立免疫介导的骨髓衰竭小鼠模型。实验组小鼠先接受5.0-6.0 Gy的Cesium-137γ射线（剂量率1.0 Gy/min）全身照射后,4-6小时内将C57BL/6（H2b/b）小鼠淋巴细胞悬液（5-10×106个细胞）通过眼眶静脉注射到CBy B6F1（H2b/d）小鼠体内,于注射C57BL/6小鼠淋巴细胞后第14天采集外周血,结果显示实验组小鼠外周全血细胞减少率为100%,死亡率15%,小鼠重度全血细胞减少,网织红细胞和中性粒细胞绝对值减少,均明显低于正常对照组和TBI照射组,组织活检示骨髓增生显着减低,有效造血容积15-20%,粒红系显着减低,全片未见巨核细胞。实验组小鼠骨髓细胞计数明显低于TBI照射组和正常对照组,CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM各集落形成单位计数明显低于TBI照射组和正常对照组,HPC和HSC计数明显低于TBI照射组和正常对照组,实验组小鼠符合AA动物模型的判断标准。FCM检测实验组PIR-A/B+/CD34+比例[（42.41±9.97）%],TBI照射组[（42.00±12.50）%]和正常对照组[（48.08±7.58）%]三组比较差异无统计学意义（P>0.05）,实验组PIR-A/B+CD8+/CD3+比例[（2.89±1.57）%]明显低于TBI照射组[（19.63±12.50）%]和正常对照组[（23.77±10.58）%]（P<0.05）。实验组PIR-A/B+/CD11c+比例[（50.08±20.65）%]明显低于正常对照组[（72.03±17.55）%]（P<0.05）,TBI照射组[（58.62±7.42）%]明显低于正常对照组（P<0.05）。结论:（1）经BLAST序列比对及文献结构分析显示SAA患者mDC细胞内表达增高的LILRA3与SAA患者CD34+细胞内表达增高的LILRA5胞外结构域的氨基酸序列高度同源,具有高结构同源性。（2）进一步验证显示LILRA3在SAA患者m DC细胞和CD34+细胞内基因水平或是蛋白水平均表达明显增高。LILRA3+/CD34+比例与LILRA3+/CD11c+HLA-DR+比例呈正相关,LILRA3+/CD11c+HLA-DR+比例与LILRA3mRNA表达水平呈正相关,LILRA3+/CD34+比例与血小板数量呈负相关,与血红蛋白数量呈负相关,并且与疾病进程呈现相关性。（3）SAA患者m DC细胞内升高的LILRA3参与了m DC细胞活化过程,刺激CTL功能分子表达水平升高,功能亢进;而骨髓靶细胞内表达升高的LILRA3可使CTL增强对靶细胞的杀伤作用。（4）成功建立SAA小鼠模型,并通过SAA小鼠模型分析PIR-A/B表达水平。SAA患者LILRA3表达异常,数量增加,功能亢进,且表达水平与免疫功能状态的变化具有一致性,随着治疗有效,逐渐趋于正常。LILRA3在SAA免疫发病机制中发挥重要作用,LILRA3有可能成为该疾病潜在的治疗靶点。
南如连[6]（2016）在《清热解毒法联合allo-HSCT治疗重型再生障碍性贫血的研究》文中指出目的：初步总结应用清热解毒法联合异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗重型再生障碍性贫血（SAA）的临床疗效；观察安脑片联合异体骨髓细胞输注对SAA大鼠模型的干预效果,及其对CD90.1+细胞凋亡率和PML凋亡蛋白表达的影响,探讨安脑片干预SAA大鼠的分子机制,为临床应用清热解毒法联合allo-HSCT治疗SAA提供理论依据。方法：1.回顾性分析2013年10月至2015年12月广东省中医院血液科应用清热解毒法联合异基因造血干细胞移植治疗的8例重型再生障碍性贫血患者临床资料,观察移植后患者造血重建、植入情况及移植相关并发症。随访时间截至2015年12月,统计患者总生存率,评价临床疗效。2.选用SPF级Wistar雌性大鼠作为受鼠,接受直线加速器全身照射,建立重型再生障碍性贫血大鼠模型；SPF级SD雄性大鼠作为供鼠,用于制备异体骨髓细胞；照射后4小时内,从Wistar大鼠尾静脉输注SD大鼠骨髓细胞,并于输注后第1天开始给予安脑片药液灌胃,用至第30天。3.每日记录各组大鼠一般情况：包括毛发、体重、活动度、饮食量、饮水量、大小便、出血情况、贫血情况等；实验第7、14、30天,采用眼眶静脉取血法留取各组大鼠标本约lml,用于血常规、网织红细胞百分比及绝对值检验；实验第7天取重再组大鼠双侧股骨,第31天取安脑组和对照组大鼠双侧股骨,分别用于骨髓细胞形态学及组织病理学观察。4.留取各组Wistar大鼠血清标本保存备用；免疫磁珠法分离正常SD大鼠骨髓CD90.1+细胞作为实验研究靶细胞,于液体培养体系中扩增14天,然后与上述各组Wistar大鼠血清共培养24h后,用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组CD90.1+细胞凋亡率,用间接免疫荧光标记法测定其PML蛋白表达情况。结果：1.8例重型再生障碍性贫血患者均获得造血重建,中性粒细胞植活中位时间为+13.5天,血小板植活中位时间为+14天；移植后+30天时复查所有患者骨髓提示骨髓增生明显活跃或活跃,STR-PCR显示均为完全供者嵌合体,植入率100%；供受体性别不同者经性染色体检查均为100%供者型,移植前供受体血型不合者分别在移植后+37天、+49天、+31天和+60天转变为供者血型。2.4例患者发生aGVHD,发生率50%,4例患者发生cGVHD,发生率50%；7例患者发生感染,发生率87.5%；3例患者出现出血性膀胱炎,发生率37.5%；所有患者均未发生肝静脉闭塞病。截至2015年12月31日,8例移植患者中死亡2例,1例患者放弃治疗,5例患者获得生存,且均达到基本治愈水平,存活率62.5%,治愈率62.5%。3.各组大鼠生存曲线整体比较差异具有统计学意义（X2=65.555,P=-0.000）：组间比较,安脑组较盐水组与重再组生存时间明显延长,差异显着（X2=42.805,P=-0.000）；安脑组与对照组比较,差异无统计学意义（X2=3.353,P=-0.067）4.实验第7天各组大鼠血常规、网织红细胞百分比及绝对值结果显示,重再组与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。输注骨髓组（安脑组和盐水组）也较对照组低下,差异显着（P<0.05）,但与重再组比较,差异无统计学意义（P>0.05）；第14天时上述检测结果提示：输注骨髓组（安脑组和盐水组）较第7天时有所上升,其中尤以安脑组恢复更为明显,与盐水组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）,但较对照组仍然低下（P<0.05）；第30天安脑组与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。5.与对照组相比,重再组大鼠骨髓组织明显脂肪化,增生极度低下,造血细胞极度减低,非造血细胞增多,骨髓造血组织支架结构稀疏,网状纤维和毛细血管网明显减少,骨髓间质水肿并出血。安脑组大鼠骨髓改变较重再组明显改善。6.各组之间CD90.1+细胞凋亡率有显着差异（P<0.05）；组间两两比较提示：对照组均明显低于重再组和安脑组（P均<0.05）,同时安脑组也低于重再组（P<0.05）；加入重再组血清后,CD90.1+细胞胞内PML蛋白表达有所增加,而安脑组PML蛋白表达未见明显增加。结论：1.清热解毒法可能在促进重型再障移植患者造血重建及供者细胞植入方面具有良好的作用,临床上应根据移植患者所表现的不同中医证候进行早期干预,有望改善或减缓移植患者的并发症。2.安脑片对全身照射诱导的重再大鼠模型具有良好的保护作用,能促进大鼠骨髓红系细胞的增殖、分化及成熟,增强异体骨髓细胞输注的治疗效果,利于异体骨髓细胞的植入。3.重再大鼠模型血清可能具有诱导造血细胞凋亡的效应,安脑片含药血清可以在一定程度上抑制造血细胞的过度凋亡,这可能是通过下调造血细胞胞内PML蛋白的异常表达来实现的。
李罡灿,宋艳萍,张韵洁,李光,王浩,谢佳[7]（2016）在《间充质干细胞对再生障碍性贫血患者造血支持及T淋巴细胞分泌功能的影响》文中进行了进一步梳理背景:近年来,间充质干细胞在再生障碍性贫血中的作用受到广泛关注,但是其作用机制尚不清楚。目的:观察脐血间充质干细胞和骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者造血支持及T淋巴细胞分泌功能的影响。方法:收集48例再生障碍性贫血患者和48例健康者的骨髓和健康产妇脐血,采用流式细胞法分离骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞;将2种间充质干细胞分别与脐血单个核细胞共培养,计数红系爆式集落形成单位和粒-巨噬细胞集落形成单位数目;将间充质干细胞与植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞共培养,ELISA检测T细胞分泌的白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素水平。结果与结论:（1）正常骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞与脐血单个核细胞共培养后,其红系爆式集落形成单位和粒-巨噬细胞集落形成单位数目明显增多（P<0.05）。（2）再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞与脐血单个核细胞共培养后,其刺激红系爆式集落形成单位和粒-巨噬细胞集落形成单位形成的能力明显减弱（P<0.05）。（3）与植物血凝素诱导的T细胞对照组相比,正常骨髓间充质干细胞共培养可明显抑制T细胞分泌白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素（P<0.05）。正常脐血干细胞共培养组也显示出了相似的抑制效果。（4）与正常骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞共培养组相比,再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞共培养组抑制T细胞分泌白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素的能力明显降低（P<0.05）。（5）结果表明再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞存在功能缺陷,且对造血功能支持及对T细胞分泌功能的抑制作用明显弱于正常的骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞,提示再生障碍性贫血患者间充质干细胞可能通过减弱其造血支持及抑制T细胞的功能来影响病理进程。
李敬东[8]（2015）在《肝细胞生长因子修饰的人脐带间充质干细胞对再障模型小鼠造血功能的影响》文中提出背景和目的再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）是一种常见的骨髓衰竭症,其病因多样、发病机理复杂。造血微环境缺陷是导致再生障碍性贫血发病的机制之一。尤其是骨髓基质细胞之一的间充质干细胞的缺陷很可能是导致再生障碍性贫血发生的重要环节之一;再生障碍性贫血的治疗除雄激素、免疫抑制剂以外,造血干细胞移植是非常重要的手段,但供体细胞来源的不足和严重的移植物抗宿主病（GVHD）是阻碍这种技术开展的重要障碍。间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）的特点为该类细胞共有的自我更新、复制能力以及多向分化潜能,可进一步分化为造血细胞,并且可以支持造血、调节免疫功能,是骨髓造血微环境的重要组成成分。间充质干细胞具有低的免疫原性和可移植性,正在逐步成为细胞治疗的重要种子细胞。间充质干细胞和造血干细胞共移植可以促进造血干细胞植入、减少GVHD的发生。肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）作为一种细胞因子具有促进细胞生长作用,同时对血管生成、细胞分裂等均有影响,还可以对造血干、祖细胞向造血部位（骨髓）迁移起着促进和诱导的作用。表达HGF的相关基因可以通过腺病毒等载体转染入间充质干细胞内,使间充质干细胞表达HGF增多,多数的研究表明HGF基因的修饰对间充质干细胞促进细胞修复、调节免疫等方面功能有增强的作用。但HGF基因修饰的间充质干细胞对造血功能的影响方面的研究却比较少。本研究的目的是在我院前期临床经验的基础上,通过动物实验探讨人脐带来源间充质干细胞（Human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UMSC）对再障模型小鼠造血功能的影响、HGF和间充质干细胞在对再障模型小鼠造血功能的影响上是否有协同作用,HGF基因修饰的间充质干细胞系的构建和其在再生障碍性贫血临床治疗中的潜在的价值。材料与方法第一部分:回顾性分析新乡医学院第一附属医院血液科2009年1月至2014年12月重型再生障碍性贫血（SAA）接受人脐带来源间充质干细胞联合外周血干细胞共移植病例6例,其中SAAⅠ型2例,SAAⅡ型4例,移植前均接受环孢菌素（CSA）及雄性激素治疗并不同数量输血,供者均为HLA配型6/6全相合同胞,其中男性供者4例,女性供者2例,血型不合1例。预处理方案为经典“环磷酰胺+ATG”的基础上加氟达拉滨;短疗程氨甲蝶呤（MTX）加环孢菌素预防GVHD;患者住无菌的移植病房;注意加强支持治疗。0天输注外周血干细胞CD34+细胞4.18（2.75-6.46）×106/kg（患者）输注造血干细胞前4小时输注人脐带来源的间充质干细胞2.71（2.4-3.0）×1010个。观察预处理方案不良反应,输注造血干细胞过及间充质干细胞过程是否是顺利;造血功能恢复时间的观察;GVHD及其他并发症发生的情况以及供者干细胞植入情况。第二部分:我们通过贴壁培养法,获得人脐带来源的间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells、h UMSC）,通过流式细胞仪检测间充质干细胞的表面抗原标志、通过诱导成神经细胞分化和成脂肪分化来鉴定间充质干细胞的特性。应用携带HGF基因的腺病毒载体（Ad-HGF）转染间充质干细胞,MOI为150 pfu/细胞,转染时间48小时。应用免疫标记法（Western blot）及酶联免疫吸附法（ELISA）检测转染后人脐带来源间充质干细胞HGF的表达。同时通过流式细胞仪对表面标志进行相应的检测,应用成神经细胞和成脂肪分化过程来检测Ad-HGF转染对人脐带来源间充质干细胞的影响。第三部分:我们将24只BABL/C小鼠分为实验对照组、h UMSC组、Ad-HGF修饰MSC组,应用6MV的X线均匀照射各组小鼠,照射后第2、4、6天,给每只小鼠腹腔注射环磷酰胺50mg/kg、氯霉素62.5mg/kg。造模后第8天MSC组经小鼠尾静脉给h UMSC悬液注射含细胞数5×107个、Ad-HGF修饰MSC组经小鼠尾静脉注射Ad-HGF修饰的MSC悬液0.2ml含细胞数5×107个,并于注射后第2天应用ELISA法检测模型小鼠外周血中HGF的含量。实验对照组等量注射生理盐水。造模后每天观察小鼠一般情况同时测量体重等指标。造模后第8天取血观察三组血常规变化、同时取骨髓行骨髓涂片、骨髓活检的检查;濒死小鼠及死亡小鼠解剖观察;观察造模后第21天血常规,评价小鼠再障模型的稳定性及3组小鼠造血功能变化及恢复的程度。三组数据对比采用统计学T检验方法。结果第一部分:6例患者均顺利植入,3个月时评价均为100%供者型,白细胞中位恢复时间12d,血小板中位恢复时间16d。移植过程顺利,人脐带来源的间充质干细胞输注过程中患者无不良反应,无急性移植物抗宿主病（GVHD）发生,无其他严重并发症发生。第二部分:我们通过贴壁培养法获得的获得人脐带来源的间充质干细胞均呈贴壁生长的成纤维细胞样形态,表型特征分析显示细胞为非造血细胞群,转化试验证明细胞具有体外成神经细胞和成脂肪能力,说明获得的细胞符合MSC的特性。我们应用携带HGF基因的腺病毒载体（Ad-HGF）转染间充质干细胞,通过检测其表面标志及分化能力均不受影响。通免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测的转染后间充质干细胞表达的较未转染组HGF增高,差别有统计学意义。第三部分:3组试验小鼠应用X线及化学药物造模,在造模后发现小鼠活动减少,摄食减少、体重下降,试验对照组1例死亡。造模后第8天,血常规检测发现,注射间充质干细胞2组小鼠白细胞、红细胞、血小板下降均较实验对照组轻,差别有统计学意义;Ad-HGF转染MSC组较MSC组上述指标高,但无统计学差别。骨髓涂片及骨髓活检均见造血组织减少、脂肪细胞增多现象。但Ad-HGF转染MSC组及MSC组病理变化较实验组轻。观察至21天各组白细胞、红细胞、血小板数量均处于低水平,但MSC组和Ad-HGF修饰MSC组恢复较好。结论第一部分:人脐带来源的间充质干细胞联合外周血干细胞共移植治疗重型再生障碍性贫血安全无相关不良反应,造血恢复良好,急性GVHD发生率低。第二部分:贴壁培养方法获得的人脐带来源间充质干细胞经检验符合MSC的各项特征;携带HGF基因的腺病毒载体（Ad-HGF）转染的间充质干细胞表面的各种标志的表达、转化成其他细胞的功能等特征不受影响。第三部分:X线及环磷酰胺、氯霉素联合构建小鼠再生障碍性贫血模型符合临床再障特点,血常规及骨髓变化符合典型再障表现。实验动物死亡率低。模型稳定持久。人脐带来源间充质干细胞及Ad-HGF修饰的人脐带间充质干细胞对再障模型小鼠的造血功能均有保护作用,修饰后的间充质干细胞此保护作用略强,提示HGF与间充质干细胞对再障模型小鼠造血功能可能有协同作用,需进一步研究证实。
魏丽萍[9]（2014）在《加味当归补血汤治疗慢性再生障碍性贫血的临床研究》文中进行了进一步梳理目的探讨中医治疗慢性再生障碍性贫血（简称慢性再障）在增加疗效、提高患者血细胞及免疫力、改善中医临床证候、减少西药毒副作用、提高生活质量等方面的优势。方法选取2010年1月～2013年8月期间收治的慢性再生障碍性贫血患者40例,随机分为实验组、对照组。对照组给予环孢素和雄激素治疗,实验组在对照组的基础上坚持给予加味当归补血汤。2月为一疗程,治疗3个疗程,坚持随访。观察血象、骨髓象、中医证候、免疫功能、药物毒副反应等指标进行整体评估。所有数据用SPSS17.0统计软件处理分析。结果1、治疗后两组患者中医症候积分均得到显着改善（P<0.05）,实验组中医疗效有效率达80%,明显高于对照组（P<0.05）;各中医分型之间疗效比较,肾阳虚组、肾阴阳两虚组明显优于肾阴虚组（P<0.05）;2、按西医疗效评价标准,实验组有效率75.0%,疗效优于对照组（P<0.05）;3、治疗后两组患者血三系水平及骨髓增生程度均有显着提高（P<0.05）,且实验组患者白细胞、血红蛋白、网织红细胞显着高于对照组,非造血细胞水平显着低于对照组（P<0.05）;4、治疗后CD8+水平降低、CD4+/CD8+比例升高。与治疗前对比差异有统计学意义（P<0.05）;5、药物引起的不良反应方面,实验组明显少于对照组（P<0.05）。结论加味当归补血汤具有促进慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血和调节免疫的双重功效,疗效优于单用西药组。同时可以减少环孢素和雄激素引起的毒副反应,提高生活质量。
国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室[10]（2013）在《我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）》文中研究指明
二、再生障碍性贫血患者骨髓间质干细胞培养及临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、再生障碍性贫血患者骨髓间质干细胞培养及临床意义（论文提纲范文）
（1）肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 肾藏精理论研究 |
| 1.1 肾精的生成来源 |
| 1.2 肾精的功能 |
| 1.3 肾精的现代医学研究 |
| 2 “髓”的理论研究 |
| 2.1 “髓”的含义及生理功能 |
| 2.2 “髓”的生成与肾精 |
| 2.3 “骨髓”的现代医学研究 |
| 3 “血”的研究理论 |
| 3.1 血的涵义及生理功能 |
| 3.2 血的生成与肾精 |
| 3.3 贫血的现代医学研究 |
| 4 补肾方龟鹿二仙胶 |
| 5 结语 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验1 肾精亏虚对SD雄性大鼠造血功能影响的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要仪器及耗材 |
| 1.5 造模方法及分组、给药 |
| 1.6 检测指标及方法 |
| 1.7 统计方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 红细胞数量(RBC)、血红蛋白(HGB)含量比较 |
| 2.3 血清促红细胞生成素(EPO)、睾酮(T)含量比较 |
| 2.4 附睾精子质量比较 |
| 2.5 睾丸组织病理学比较 |
| 2.6 骨髓象比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肾精亏虚大鼠模型的建立 |
| 3.2 肾精亏虚大鼠造血组织形态学的改变 |
| 3.3 肾精亏虚对血清EPO含量的影响 |
| 实验2 肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血细胞及CD34+细胞凋亡的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物及分组 |
| 1.2 造模方法 |
| 1.3 药物及灌胃 |
| 1.4 仪器设备及试剂 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠骨髓造血干细胞的超微病理形态学观察 |
| 2.2 流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡的结果 |
| 2.3 骨髓石蜡包埋切片TUNEL法检测CD34+细胞凋亡结果 |
| 3 讨论 |
| 实验3 肾精亏虚对SD雄性大鼠导致骨髓造血细胞凋亡的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物及分组 |
| 1.2 造模方法 |
| 1.3 药物及灌胃 |
| 1.4 仪器、试剂及耗材 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和 Fasl蛋白表达结果 |
| 2.2 骨髓 Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas 和 FaslmRNA RT-PCR 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肾精亏虚对大鼠骨髓Fas/Fasl蛋白表达的影响 |
| 3.2 肾精亏虚对大鼠骨髓Bcl-2、Bax蛋白及Bcl-2m RNA、Baxm RNA表达的影响 |
| 3.3 肾精亏虚对大鼠骨髓Caspase-3 表达的影响 |
| 讨论 |
| 1.肾精亏虚与贫血的关系 |
| 2.肾精亏虚大鼠模型建立评估 |
| 3.肾精亏虚对骨髓造血功能影响的可能机制 |
| 4.龟鹿二仙胶改善骨髓造血功能的作用机制 |
| 结论 |
| 展望与不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 综述 肾虚与贫血关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 2 发表论文 |
| 致谢 |
（2）Shh蛋白在再生障碍性贫血骨髓中表达及相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 1.研究对象 |
| 1.1 病例选择 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2.实验材料与方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 免疫组化主要使用仪器 |
| 2.3 免疫组化检测Shh蛋白表达 |
| 2.3.1 骨髓活检组织收集 |
| 2.3.2 苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE) |
| 2.3.3 免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测Shh表达 |
| 2.3.4 Shh表达水平评分标准 |
| 2.4 随访及观察指标 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第三章 研究结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 1.总结 |
| 2.展望 |
| 参考文献 |
| 附录 主要中英文词汇缩略表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表和待发表的文章 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（3）瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 实验对象与材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 试剂和材料 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验对象分组 |
| 2.2 AA小鼠模型的建立 |
| 2.3 标本采集的方法及处理 |
| 2.4 血常规测定 |
| 2.5 HE染色 |
| 3 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 LEP缺陷小鼠AA模型和正常小鼠AA模型造模后一般状态变化情况比较 |
| 2 LEP缺陷小鼠AA模型和正常小鼠AA模型造模后血象变化情况比较 |
| 3 LEP缺陷小鼠AA模型和正常小鼠AA模型造模后骨髓组织变化比较 |
| 讨论 |
| 第二部分 瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血影响的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 1 实验对象与材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 试剂和材料 |
| 1.3 仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验对象分组 |
| 2.2 AA小鼠模型的建立 |
| 2.3 标本采集的方法及处理 |
| 2.4 免疫组化实验 |
| 2.5 酶联免疫吸附实验 |
| 2.6 流式细胞术检测 |
| 2.7 实时荧光定量PCR |
| 3 统计学处理 |
| 结果 |
| 1.LEP缺陷小鼠AA模型和正常小鼠AA模型造模后成脂、成骨基因的变化比较 |
| 2 LEP缺陷小鼠AA模型和正常小鼠AA模型造模后LEP-R的变化比较 |
| 3 LEP缺陷小鼠AA模型和正常小鼠AA模型造模后免疫指标的变化比较 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录 缩略词表 |
| 致谢 |
（4）重组人血小板生成素对造血细胞、间充质干细胞作用的基础及临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 重组人血小板生成素对32D细胞、间充质干细胞体外作用及机制研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 结果 |
| 一、rhTPO对32D细胞的作用 |
| 二、rhTPO对大鼠骨髓间充质干细胞的作用 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 rhTPO联合激素及环孢素A治疗免疫相关性血细胞减少症20例近期疗效及安全性 |
| 引言 |
| 病例与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 再生障碍性贫血 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 在攻读博士学位期间公开发表的论文、获奖与参加的项目 |
| 致谢 |
（5）白细胞免疫球蛋白样受体A3在重型再生障碍性贫血中作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、重型再生障碍性贫血患者髓样树突状细胞与造血干祖细胞内差异蛋白质同源性/交叉性比对 |
| 1.1 对象与方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.1.3 研究方法 |
| 1.1.4 统计学处理 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 差异蛋白质同源性比对 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR检测BMMNC LILRAs mRNA表达 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、LILRA在重型再生障碍性贫血患者体内的表达 |
| 2.1 对象与方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 |
| 2.1.3 研究方法 |
| 2.1.4 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 FCM检测LILRA3和LILRA5表达 |
| 2.2.2 骨髓LILRA3+ /CD34+、LILRA3+ /CD3+ CD8+、LILRA3+ /CD11c+ HLA-DR+、LILRA5+ /CD34+、LILRA5+ /CD3+ CD8+、LILRA5+ /CD11c+ HLA-DR+比例 |
| 2.2.3 诱导mDCs的形态、免疫表型鉴定及分选后纯度检测 |
| 2.2.4 Western Blot方法检测LILRA3和LILRA5表达 |
| 2.2.5 qPCR方法检测mDC细胞LILRA3表达 |
| 2.2.6 ELISA检测血清LILRA3蛋白水平 |
| 2.2.7 各指标间相关性分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、LILRA3在重型再生障碍性贫血患者诱导mDC激活及靶细胞凋亡的体外细胞模型研究 |
| 3.1 对象与方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 |
| 3.1.3 研究方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 细胞转染结果验证 |
| 3.2.2 分选细胞纯度检测 |
| 3.2.3 FCM检测CD8+细胞上LILRA3配体表达 |
| 3.2.4 FCM检测混合培养细胞功能分子表达 |
| 3.2.5 CCK-8 法检测CTL增殖 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、免疫介导骨髓衰竭小鼠模型构建 |
| 4.1 对象与方法 |
| 4.1.1 研究对象 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 |
| 4.1.3 研究方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 CByB6F1小鼠一般情况、外周血象及脏器病理 |
| 4.2.2 小鼠骨髓细胞计数、集落培养及LSK比例 |
| 4.2.3 FCM检测AA小鼠PIR-A/B表达 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 1.获得性再生障碍性贫血小鼠模型的研究进展 |
| 综述1 参考文献 |
| 综述 2.白细胞免疫球蛋白样受体的遗传多样性及其与疾病的关联 |
| 综述2 参考文献 |
| 发表的非相关文章 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）清热解毒法联合allo-HSCT治疗重型再生障碍性贫血的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 清热解毒法治疗急性再障的现状 |
| 一、从病因病机论解毒法之运用 |
| 二、从证型分布论解毒法之运用 |
| 三、从分期治疗论解毒法之运用 |
| 四、从治疗机制论解毒法之运用 |
| 第二节 现代医学治疗重型再障的现状 |
| 一、造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血 |
| 二、免疫抑制疗法(IST)治疗重型再生障碍性贫血 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 清热解毒法联合异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的临床疗效 |
| 一、资料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第三章 实验研究 |
| 第一节 安脑片联合异体骨髓细胞输注对重型再障大鼠的干预效果 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 重型再障大鼠安脑片含药血清对供鼠骨髓CD90.1~+细胞凋亡率及PML蛋白表达的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（7）间充质干细胞对再生障碍性贫血患者造血支持及T淋巴细胞分泌功能的影响（论文提纲范文）
| 文章快速阅读 |
| 文题释义 |
| T淋巴细胞 |
| 造血微环境 |
| 0 引言Introduction |
| 1 对象和方法Subjects and methods |
| 1.1设计 |
| 1.2时间及地点 |
| 1.3对象 |
| 诊断标准 |
| 纳入标准 |
| 排除标准 |
| 1.4材料 |
| 1.5 方法 |
| 1.5.1 T淋巴细胞的提取 |
| 1.5.2骨髓间充质干细胞培养 |
| 1.5.3脐血间充质干细胞培养 |
| 1.5.4体外造血支持实验 |
| 1.5.5间充质干细胞与异体T淋巴细胞共培养 |
| 1.5.6 ELISA检测白细胞介素2、白细胞介素4、γ-干扰素水平 |
| 1.6主要观察指标 |
| 1.7统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1骨髓间充质干细胞培养形态和流式鉴定结果 |
| 2.2脐血间充质干细胞培养形态和流式鉴定结果 |
| 2.3间充质干细胞对再生障碍性贫血患者体外造血的支持作用 |
| 2.4各组细胞因子测定结果 |
| 3 讨论Discussion |
| 作者贡献 |
| 利益冲突 |
| 伦理问题 |
| 文章查重 |
| 文章外审 |
| 作者声明 |
| 文章版权 |
（8）肝细胞生长因子修饰的人脐带间充质干细胞对再障模型小鼠造血功能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 人脐带间充质干细胞联合造血干细胞移植治疗重型再障临床观察 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 携带HGF基因的腺病毒转染的人脐带间充质干细胞的建立 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 AD-HGF转染的HUMSC对再障模型小鼠造血功能的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 肝细胞生长因子修饰的间充质干细胞在再生障碍性贫血治疗中应用的可行性 |
| 参考文献 |
| 个人简历及攻读博士期间发表学术论文及研究成果 |
| 致谢 |
（9）加味当归补血汤治疗慢性再生障碍性贫血的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 一、临床资料 |
| (一) 一般资料分析 |
| 1、研究对象性别和年龄分布情况 |
| 2、中医证型分组情况 |
| (二) 试验病例标准 |
| 1、诊断标准 |
| 2、纳入标准 |
| 3、排除标准 |
| 4、剔除标准 |
| (三) 疗效判定标准 |
| 1、西医国内疗效标准 |
| 2、中医证候疗效评定标准 |
| 二、研究方法 |
| (一) 病例分组 |
| (二) 治疗方法 |
| 1、分组治疗 |
| 2、支持治疗 |
| (三) 观察指标 |
| 1、安全性观测 |
| 2、疗效观测 |
| (四) 统计学分析 |
| 三、结果 |
| (一) 疗效评估 |
| 1、中医疗效比较 |
| 2、西医疗效比较 |
| (二) 治疗前后各项指标的比较 |
| 1、各组治疗前后血常规对比 |
| 2、各组治疗前后骨髓象比较 |
| 3、T细胞亚群的变化 |
| (三) 治疗组与对照组不良反应比较 |
| 四、分析与讨论 |
| (一) 慢性再生障碍性贫血概述 |
| 1、AA的发病机制 |
| 2、AA的治疗现状 |
| (二) 有关当归补血汤 |
| 1、起源 |
| 2、现代药理学研究 |
| (三) 本研究采用“加味当归补血汤”的组方及配伍意义 |
| (四) 疗效及安全性分析 |
| 1、疗效分析 |
| 2、免疫调节作用分析 |
| 3、安全性分析 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
四、再生障碍性贫血患者骨髓间质干细胞培养及临床意义（论文参考文献）
- [1]肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究[D]. 吕建芳. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [2]Shh蛋白在再生障碍性贫血骨髓中表达及相关性研究[D]. 莫文苑. 广东药科大学, 2020(01)
- [3]瘦素基因敲除对再生障碍性贫血小鼠模型造血的影响及机制研究[D]. 尹相丛. 青岛大学, 2019(07)
- [4]重组人血小板生成素对造血细胞、间充质干细胞作用的基础及临床研究[D]. 钱娟. 苏州大学, 2019(04)
- [5]白细胞免疫球蛋白样受体A3在重型再生障碍性贫血中作用的研究[D]. 于虹. 天津医科大学, 2017(01)
- [6]清热解毒法联合allo-HSCT治疗重型再生障碍性贫血的研究[D]. 南如连. 广州中医药大学, 2016(02)
- [7]间充质干细胞对再生障碍性贫血患者造血支持及T淋巴细胞分泌功能的影响[J]. 李罡灿,宋艳萍,张韵洁,李光,王浩,谢佳. 中国组织工程研究, 2016(01)
- [8]肝细胞生长因子修饰的人脐带间充质干细胞对再障模型小鼠造血功能的影响[D]. 李敬东. 郑州大学, 2015(03)
- [9]加味当归补血汤治疗慢性再生障碍性贫血的临床研究[D]. 魏丽萍. 浙江中医药大学, 2014(04)
- [10]我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）[J]. 国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室. 世界科学技术-中医药现代化, 2013(05)
标签：肾精亏虚论文; 骨髓细胞论文; 细胞免疫论文; 重型再生障碍性贫血论文; 血清蛋白论文;