一、Cyclin D_1在肝细胞癌中的表达及意义（论文文献综述）
王延蛟[1]（2021）在《mRNA/piRNA/piwi在DEN诱导肝癌中的表达及紫草素对肝癌细胞生物学行为的影响》文中研究表明目的:全球肝癌发病率和死亡率居高不下,每年约有841,000新发病例和782,000死亡病例,其中约50%来自中国,严重威胁到人类的健康。寻找肝癌潜在发病机制及诱发因素,能早发现、早治疗的任务迫在眉睫。DEN（Diethylnitrosamine,二乙基亚硝胺）诱发癌变过程与人肝癌的过程非常相似,是最广泛应用的肝癌模型。而肝癌的发生和发展是一个复杂的多因素过程,涉及细胞和分子水平的异常变化,关于肝癌发病机制的研究主要集中在细胞信号转导、肿瘤相关基因表达调控等方面。基因芯片能对基因表达的组织特异性、病变特异性进行综合的分析和判断,并迅速将基因与疾病联系起来。mi RNA虽然与肝癌的发生密切相关,但其无明显的细胞特异性,而存在于生殖细胞piwi蛋白具有组织特异性,近年被发现也存在于癌细胞,与piwi蛋白结合的piRNA（Piwi-interacting RNA）在维持DNA完整、抑制转录、翻译等均有重要作用,但关于piRNA/piwi与肿瘤发生的相关研究还在初始阶段。肝癌化疗失败的主要原因是多重耐药性（multi-drug resistance,MDR）,研究表明紫草素具有抗癌作用,不易产生耐药性且副作用小,但具体机制并不清楚。综上所述,本研究以DEN诱导建立的大鼠肝癌模型作为研究对象,测定血清肝癌标志物、免疫、内分泌及相关指标,寻找肝组织差异表达的mRNA和piRNA及相关蛋白,揭示以上因素与肝癌发生发展的关系;以肝癌细胞CBRH-7919为研究对象,检测紫草素对其增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,为探索肝癌发生的分子机制及临床用药提供理论支持。方法:1)选取40只6周龄雄性健康Wistar大鼠,重量在150克左右,分为肝癌模型组（NC）和正常对照组（Md）,其中,肝癌模型组自由饮用浓度为0.1 mg/m L DEN的无菌水,每24小时更换一次,20周后停药（9-12周断药用水代替）,观察肝脏组织病理形态学的改变以及细胞超微结构的变化;ELISA法检测外周血AFP、ASMA、HSP、IL-1、IL-6、TNF-α、ACTH、CORT等指标的改变;利用芯片技术检测组间肝组织mRNA的差异表达并筛选候选基因,采用RT-q PCR、免疫组织化学、Western-blot检测肝癌组织中候选基因的mRNA和蛋白质的表达水平;2)利用二代测序法检测肝组织差异表达的piRNA;利用motif短序列模式比配算法辨认piRNA临近调控区域加工区域特征进行富集度解析和聚类,结合piRNA定位进行功能基因的分布总结,利用RT-q PCR对piRNA、mi RNA进行定量,通过免疫组化和Western-blot检测肝组织中piwil2、piwil4等基因蛋白质的表达水平,利用CRISPR/cas9基因编辑系统敲除CBRH-7919细胞中的piwil4基因,利用CCK-8、流式细胞术、划痕实验检测细胞的增殖、凋亡及迁移的变化;3)用MTT、流式细胞术、划痕实验以及transwell小室法观察紫草素作用于CBRH-7919细胞后的细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等变化,通过Western Blot法检测紫草素作用CBRH-7919细胞后STAT3、Cyclin D1、piwil4、Bcl-xl蛋白。结果:1)利用改变饮水方式建立了DEN诱导大鼠肝癌模型,成癌率为75%,并避免了实验动物中途死亡,肝癌组肝脏表面粗糙度增加,假小叶、增生灶和大量癌结节形成。与正常对照组比较,肝癌模型组血清AFP明显升高,差异显着（P<0.01）;组间血清ASMA无统计学差异,肝癌模型组与正常对照组血清HSP差异显着（P<0.01）。血清免疫学指标IL-1、IL-6水平降低而TNF-α水平升高（P<0.05）,内分泌指标ACTH和CORT的水平降低。mRNA芯片结果显示,31042个mRNA中表达上调的有1639个,表达下调的有360个,应用RT-q PCR法检测结果发现,STAT3和Cyclin D1基因的mRNA表达水平显着升高（P<0.01）;Igfals、G6PC基因的mRNA表达水平下调,有统计学差异（P<0.05）;免疫组织化学结果显示,正常对照组中STAT3和Cyclin D1蛋白表达量少,肝癌模型组STAT3和Cyclin D1蛋白的高表达主要定位在细胞核。western-blot实验结果显示Igfals、G6PC以及Emp1蛋白表达水平下调,有统计学差异（P<0.05）;2)总计发现符合piRNA序列特征的为27439个,mRNA芯片结果显示,与正常对照组相比发现,肝癌模型组中上调表达的piRNA有4个（P<0.05）,分别是piR-64745（piR-rno-51044）,piR-64265（piR-rno-50623）,piR-79437（piR-rno-48177）,piR-64744（piR-rno-51043）,表达下调的有2个（P<0.01）,分别是piR-64143（piR-rno-50518）和piR-64142（piR-rno-50517）。组间表达异常的piRNA靶基因涉及嘌呤嘧啶代谢、氨基酸降解、黏多糖合成、复制、DNA剪切与修复、RNA和蛋白质降解、MAPK信号通路、Ras信号通路众多途径,RT-q PCR显示,与正常对照组比较,肝癌模型肝组织的piR-79437表达增加（P<0.01）、piR-64143表达降低（P<0.01）,肝癌模型组血清中mi R-133b升高（P<0.05）;在肝癌模型肝脏中Piwil2、Piwil4的蛋白高表达（P<0.01）,Piwil4基因敲除后,与肝癌正常对照组和空载组相比,KO组细胞的增殖活性降低（P<0.05）,KO组细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,Piwil4-/-细胞中STAT3、Cyclin D1、Bcl-x L蛋白表达水平均下调,差异显着（P<0.05）;3)紫草素的IC50是11.97μM,作用细胞的浓度确定为5、10、15μM,细胞的存活率随药物浓度的增加而发生梯度变化,具有统计学差异（P<0.05）,FCM结果显示,紫草素浓度为0μM、5μM、10μM、15μM时候,凋亡细胞数量分别为5.50±0.28%、7.88±0.51%、16.05±1.23%、26.88±0.22%,细胞凋亡率逐步上升,呈现出浓度依赖性,具有统计学差异（P<0.05）,划痕实验结果显示,依次用0μM、5μM、10μM、15μM的紫草素对应的迁移率分别为52.10±6.12%、47.01±9.01%、34.11±7.18%、13.98±4.52%,呈现出浓度依赖性,具有统计学差异（P<0.05）;transwell实验显示,依次用0μM、5μM、10μM、15μM的紫草素对应穿过小室膜的细胞数分别为482.33±55.54%、423.00±35.51%、386.33±68.37%、288.67±50.74%,呈现出浓度依赖性,侵袭能力下降,具有统计学差异（P<0.05）;用15μM紫草素处理CBRH-7919细胞48小时后,STAT3、Cyclin D1蛋白表达下调（P<0.05）,piwil4和Bcl-x L与正常对照组无明显变化。结论:1)使用0.1mg/ml的DEN饮用水诱导大鼠肝癌模型20周（9-12周停药）,成癌率为75%（15/20）,效果良好,观察肝脏组织HE病理结果发现肝癌发生,且血清AFP、HSP均升高,是一种较理想的研究肝癌发生发展的大鼠模型。作者认为免疫相关IL-1、IL-6、TNF-α水平的升高,内分泌相关ACTH和CORT水平的降低,提示肝癌模型中免疫和内分泌功能至少在一定程度上发生紊乱;2)模型肝脏中,STAT3,Cyclin D1等癌基因的过表达和促凋亡基因EMP1低表达共同导致细胞的持续增殖,肝癌模型的G6PC表达的降低便于糖异生的中间产物用于肝癌细胞增殖所需能量的供应和物质的生物合成;3)本研究发现piR-79437、piR-64143的异常表达可能与HCC存在关联,在肝癌的发生和发展中起作用,血清mi R-133b可能是肝癌的潜在标志物,PIWIL2和PIWIL4在肝癌模型组的高表达,提示具有促癌作用,PIWIL4基因敲除细胞中STAT3,cyclin D1和Bcl-xl的表达水平低于对照组,表明PIWIL4基因可能通过作用于STAT3/cyclin D1促进肝癌细胞的增殖,通过STAT3/Bcl-x L抑制其凋亡;4)紫草素使STAT3和Cyclin D1蛋白表达下调,提示其对肝癌细胞生长有抑制作用,同时,紫草素可以促进肝癌细胞的凋亡,抑制其迁移及侵袭,呈现浓度依赖性的关系,但其作用细胞后的piwil4和Bcl-x L的表达水平没有变化,提示紫草素不通过Bcl-x L影响细胞凋亡,具体通过什么途径促进肝癌细胞的凋亡,还需进一步研究。
胡博[2]（2021）在《长链非编码RNA CYTOR通过调节miR-125b-5p/KIAA1522轴影响肝细胞癌增殖、凋亡和细胞周期的机制研究》文中指出背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是一种原发性肝脏恶性肿瘤,在世界范围内发病率高、治疗效果欠佳。随着靶向治疗药物如索拉非尼、伦伐替尼,以及免疫治疗药物如免疫检查点抑制剂的出现,其预后得到一定的改善,但5年生存率仍旧不高。竞争性内源性RNA（competing endogenous RNA,ceRNA）揭示了RNA间相互作用的新机制,即以长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）为主的非编码RNA通过竞争性共享微小RNA（microRNA,miRNA）来调节mRNA（messenger RNA,信使RNA）的表达,这种调节机制在癌症的发病机理中扮演了重要的角色。但是,ceRNA在HCC中的功能作用及调节机制仍未被完全解释,新的ceRNA调控轴亟待探究。lncRNA CYTOR是一种已被证实在多种肿瘤中发挥促进细胞增殖、迁移等作用的非编码基因,并可作为多种miRNA的内源性海绵。然而,lncRNACYTOR作为ceRNA在HCC发生、发展中的作用及调控网络目前仍不十分清楚。因此,本研究以lncRNACYTOR为起点,探索ceRNA调节机制在HCC中的应用。材料与方法:通过检索癌症基因组图谱数据库（The Cancer Genome Atlas,TCGA）,获得人类HCC的lncRNA、mRNA和miRNA数据集表达数据和相应临床信息。下载基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus database,GEO）数据库中GSE62232和GSE84402的HCC相关RNA数据用于后续验证。借助在线数据分析工具,分析lncRNA CYTOR在多种肿瘤类型及HCC相关数据集中的表达情况。借助R语言分析lncRNA CYTOR在TCGA数据库中HCC肿瘤组织及癌旁正常肝组织中的差异表达情况,以及其表达水平与TCGA数据库HCC患者总生存期（overall survival,OS）之间的关系。分析lncRNA CYTOR与常用临床病理参数,如性别、年龄、肿瘤分级、临床分期和T、N、M分期之间的关联性,并进一步整合这些参数,通过单因素及多因素Cox回归分析探究lncRNA CYTOR独立预测患者预后的能力。之后,识别TCGA数据库HCC样品中差异表达的miRNA,同时使用ENCORI软件（starbase3.0）预测目标lncRNA的靶向的miRNA,选择差异分析中表达下调的miRNA与预测的miRNA做交集后得出候选miRNA。同理,基于TCGA数据库分析HCC样品中差异表达的mRNA,并基于ENCORI软件使用6个数据库（PITA、miRNAmap、DIANA-microT、miRanda、PicTar 和 TargetScan）预测候选 miRNA 靶向的mRNA,选择差异分析中表达上调的mRNA与预测的mRNA做交集后得出候选的mRNA。使用基因集富分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）来识别与所筛选出的mRNA高表达相关的基因集和通路途径,探索其潜在的功能。结果:lncRNACYTOR在多种癌症的肿瘤组织（如结肠癌、肾透明细胞癌、膀胱尿路上皮癌等）及多个HCC相关数据集中（如GSE54236、GSE64041、GSE36376等）相较于癌旁组织表达上调。在TCGA数据库中,与癌旁正常组织相比,HCC组织中的lncRNACYTOR表达水平显着增高（P<0.001）;且高表达患者组的OS较低表达患者组显着缩短（P<0.001）。临床病理参数关联性分析显示,lncRNACYTOR的表达水平与病理分级（Grade）显着相关,且G2与G1（P<0.01）、G3与G2（P<0.05）、G3与G1（P<0.001）和G4与G1（P<0.05）之间存在显着性差异;该基因在临床Ⅱ期（StageⅡ）的表达水平较临床Ⅰ期（StageⅠ）显着上调（P<0.001）,在T2期及T4期的表达水平较T1期显着上调（P<0.001;P<0.05）。独立预后分析表明lncRNA可独立于上述临床参数来预测HCC患者的预后（P<0.05）。ENCORI软件分析得出miR-125b-5p可作为lncRNA CYTOR的靶向miRNA,后续6个数据库综合分析得出KIAA1522及PODXL可作为miR-125b-5p的候选靶向mRNA。对二者进行差异分析、生存分析及与miR-125b-5p的相关分析后,选择KIAA1522作为目标靶向mRNA。相较于癌旁组织,KIAA1522在GSE62232和GSE84402的HCC组织中表达显着上调（P<0.001）。GSEA富集分析结果表明,cell cycle信号通路、adherens junction信号通路、Notch信号通路、mTOR信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、VEGF信号通路、apoptosis信号通路和tight junction信号通路相关的基因集在高KIAA1522表达的表型中显着富集。结论:探究lncRNA的表达情况、生物学功能,构建新的lncRNA/miRNA/mRNA调控轴是研究HCC发病机制的有效手段。lncRNA在HCC组织中表达水平显着上调,与多种临床病理参数相关,且可作为HCC患者潜在的预后生物标志物。此外,lncRNA CYTOR可通过靶向miR-125b-5p进而调节KIAA1522的表达参与HCC的发生发展。背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是一种由多种病因引起肿瘤,目前仍是人类最常见、最致命的恶性肿瘤之一。因此,寻找新的、临床上有效的HCC诊断及预后生物标志物至关重要。本实验的主要目的是基于第一部分生物信息学分析的结果,探索长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）CYTOR、微小RNA（microRNA,miRNA）miR-125b-5p 以及蛋白编码信使 RNA（messenger RNA,mRNA）KIAA1522的靶向调控作用及该调控轴在HCC发生、发展中的作用。材料与方法:通过脂质体将目的基因相关载体转染至正常肝细胞（HHL-5）及几种HCC细胞（SK-Hep-1、Hep3b和Huh-7）后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测 HCC 细胞中 lncRNA CYTOR、miR-125b-5p和KIAA1522的表达,并筛选实验细胞。免疫组化检测KIAA1522在HCC组织及癌旁正常组织中的表达情况。采用双荧光素酶报告基因检测试验证实lncRNA CYTOR、miR-125b-5p和KIAA1522间的调控关系。之后,利用CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测不同转染条件下HCC细胞的增殖情况,采用流式细胞仪分析转染后HCC细胞周期的变化,使用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidy l transferase mediated nick end labeling,TUNEL）观察转染后 HCC 细胞的凋亡情况;并通过蛋白免疫印迹实验（western blot,WB）分析检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等相关蛋白的表达。结果:转染后,相较于HHL-5细胞,Hep3b细胞中上述基因的表达均是最为显着的,故选择Hep3b细胞进行下一步实验。双荧光素酶报告基因检测实验的结果显示miR-125b-5p mimic+CYTOR-wt 共转染组和miR-125b-5p mimic+KIAA1522-wt 共转染组Hep3b细胞的荧光素酶活性显着降低;lncRNA CYTOR可直接作用于miR-125b-5p,而miR-125b-5p可直接靶向KIAA1522。CCK-8实验结合WB检测结果显示敲低lncRNACYTOR抑制了 HCC细胞的增殖,并下调了 Ki-67和PCNA的蛋白表达;抑制miR-125b-5p或KIAA1522的过度表达则促进了细胞的增殖并上调了 Ki-67和PCNA的蛋白表达。流式细胞仪分析结合WB检测结果显示敲低lncRNA CYTOR 降低了 S期及G2/M期比值,下调了 cyclin D1及cyclin E等蛋白的表达而上调了 p21表达;抑制miR-125b-5p或KIAA1522的过度表达则升高了 S期及G2/M期比值,并上调了 cyclin D1等蛋白的表达并下调了 p21表达。TUNEL细胞凋亡检测结合WB检测提示敲低lncRNA CYTOR可促进Hep3b细胞凋亡,下调Bcl-2的表达同时上调 Bax 的表达及 cleaved caspase3/caspase 3、cleaved caspase9/caspase 9;而抑制miR-125b-5p或KIAA1522的过表达则抑制Hep3b细胞凋亡,上调Bcl-2的表达并下调 Bax 的表达及 cleaved caspase 3/caspase 3、cleaved caspase 9/caspase 9。结论:综上所述,HCC中过表达的lncRNA CYTOR可通过靶向抑制miR-125b-5p进而上调KIAA1522的表达水平,促进HCC细胞增殖、影响细胞周期并抑制细胞凋亡。本研究为肝细胞癌的发生机制注入了新的见解。
叶冬雪[3]（2020）在《人肝细胞癌组织Mina53的表达及影响增殖、侵袭转移的体外实验研究》文中研究说明目的检测Mina53在肝细胞癌及相应癌旁非瘤组织中的表达差异,分析肝细胞癌中Mina53表达与肝细胞癌患者临床病理特征和生存预后的关系;检测Mina53在肝癌细胞系中的表达及其对细胞增殖、细胞周期及凋亡、迁移和侵袭能力的影响,初步探讨Mina53影响肝细胞癌生长和浸润转移的分子机制。方法应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白免疫印迹（Western blot）分别检测Mina53在18对新鲜肝细胞癌及相应癌旁非瘤组织中mRNA及蛋白质水平的表达;应用组织芯片及免疫组化方法检测284例肝细胞癌及相应癌旁非瘤组织中Mina53的表达同时分析其与临床病理特征和患者预后的关系;Western blot检测肝癌细胞系中Mina53的表达,瞬时转染过表达质粒至肝癌细胞系HCCLM3和QGY-7703,同时将小干扰RNA（siRNA）瞬转至肝癌细胞系Huh7,采用MTT、克隆形成实验、Transwell小室、划痕实验检测Mina53对肝癌细胞增殖活性、克隆形成能力和侵袭转移能力的影响,流式细胞术检测Mina53对细胞周期进展及细胞凋亡率的影响,光学显微镜下观察肝癌细胞形态的变化,Western blot检测PCNA、cyclinD1、cyclinE1、pRB、ppRB、E2F1、p21、pro caspase3、caspase3、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、MMP2、MMP9的表达变化。结果qRT-PCR、Western blot结果显示,18对新鲜肝细胞癌组织中Mina53 m RNA和蛋白质的表达水平高于其相应癌旁非瘤组织（t=3.100,P=0.007;t=10.616,P<0.001）;免疫组化结果显示,Mina53在肝细胞癌中252例（88.73%）呈阳性表达,而相应癌旁非瘤组织中有37例（13.03%）阳性表达,Mina53表达差异具有统计意义（z=-18.739,P<0.001）;肝细胞癌中Mina53的表达水平与肿瘤大小（χ2=5.474,P=0.019）、脉管侵犯（χ2=8.965,P=0.003）、病理分级（χ2=12.006,P=0.002）、TNM分期（χ2=16.686,P<0.001）均有关,生存分析表明,Mina53高表达的肝细胞癌患者术后三年总体生存期（P=0.011）和无病生存期（P<0.001）较低表达者更短;在肿瘤大小（>5cm）及脉管侵犯的肝细胞癌患者中,Mina53高表达者的三年无病生存期均较低表达者更短（P<0.001;P=0.002）;Mina53阳性表达患者中,Mina53高表达者的三年总体生存期及无病生存期均较低表达者更短（P=0.002,P<0.001）;术后满五年的患者中,Mina53高表达者的五年总体生存期（P=0.048）和无病生存期（P<0.001）较低表达者更短。Cox回归模型分析结果发现,肝细胞癌中Mina53高表达及肿瘤多发是患者生存预后的独立危险因素（P<0.05）;过表达Mina53可以增强HCCLM3和QGY-7703细胞的增殖和侵袭迁移能力（P<0.05）,流式细胞术发现Mina53过表达降低了G0/G1期细胞比例,增加了S期细胞比例,同时降低细胞凋亡率（P<0.05）;敲降Mina53减弱了Huh7细胞的增殖和侵袭迁移能力（P<0.05）,流式细胞术发现敲降Mina53增加了G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,同时增加细胞凋亡率（P<0.05）;在肝癌细胞系中,过表达Mina53可上调PCNA、cyclinD1、cyclinE1、ppRB、E2F1、MMP2和MMP9的表达,抑制p21和caspase3的表达（P<0.05）;敲降Mina53可抑制PCNA、cyclinD1、cyclinE1、ppRB、E2F1、MMP2、MMP9的表达,而使p21、caspase3表达增加（P<0.05）,但Mina53对体外培养的肝癌细胞形态及pRB、pro caspase3、E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达无明显影响（P>0.05）。结论Mina53可能参与肝细胞癌的发生及演进过程,并且其与肝细胞癌患者的术后生存期有关,可作为判断肝细胞癌患者预后的潜在分子标志物;Mina53可能通过ppRB/E2F1信号通路调控细胞G1/S期转化进而改变肝癌细胞的增殖活性;肝细胞癌中,Mina53对细胞侵袭转移生物学行为的影响可能通过调控MMP2、MMP9的表达来完成,而与上皮间质转化无明显关系。
徐慧[4]（2020）在《NUSAP1促进肝细胞癌增殖并影响其预后的研究》文中指出研究背景:肝细胞癌是严重影响生活质量和生命健康的消化系统常见的疾病之一,据最新数据表明,肝细胞癌占全球恶性肿瘤发病率第六位,在恶性肿瘤死因中占第四位。虽然目前对肝细胞癌的治疗方法较多,且以手术治疗为主,但绝大多数病人仍难免死于肿瘤的复发和转移。然而目前对于其恶性程度高,治疗效果差,患者预后不理想的确切分子机制尚不完全清楚,因此,探索新的基因功能改变与肝细胞癌发展的关系,对揭示肝细胞癌发生发展的分子机制、提高患者预后及生存重要的意义。核仁纺锤体相关蛋白（NUSAP1）是一种重要的微管结合蛋白,它在有丝分裂过程中参与微管交联,调控着丝粒微管的功能,支配着染色体的摆动。此外,NUSAP1还调控纺锤体组装、染色体分离和细胞分裂。近年来研究表明NUSAP1在黑素瘤、乳腺癌、急性骨髓性白血病等许多肿瘤中都存在高表达,但是NUSAP1与肝癌的关系以及参与细胞生物学过程中的确切机制并未十分明确。本研究旨在探讨NUSAP1在HCC中的表达情况及其与预后不良之间的关系,同时探究NUSAP1在HCC发生发展过程中生物学作用及其分子机制,寻找HCC早期诊断相关的分子标志物和药物作用靶点。方法:1、收集6个独立肝癌数据集（5个GEO数据集和1个TCGA数据集）进行Meta分析,筛选差异表达基因。2、整合TCGA数据库中基因表达与患者临床资料分析NUSAP1与患者生存及肝细胞癌临床病理分型之间的关系。3、利用HepG2肝癌细胞系的RNA-seq数据分析对照组和处理组（敲低基因NUSAP1）之间的差异表达基因和富集通路。4、利用肝癌细胞系（SMCC-7721）构建敲低NUSAP1的细胞模型,转染48h后通过qRT-PCR测定NUSAP1的表达量,评估基因沉默效果,从中筛选出NUSAP1沉默效果最好的质粒用于后续实验。5、将shNUSAP1、shNC、shFoxM1分别转染至Huh7和SMMC-7721两种肝癌细胞系中,分别建立shNUSAP1组、shCtrl组、shPC组,转染48h后,测定细胞增值率。6、用沉默效果较好的NUSAP1-shRNA2和NUSAP1-shRNA3转染SMCC-7721细胞系的克隆形成实验,并用imagJ进行定量分析。7、用sh-NC和sh-NUSAP1转染SMCC-7721细胞48h后的进行细胞周期实验。结果:1、基于GEO数据库中650例样本和TCGA数据库中373例样本分析表明,NUSAP1在肝癌组织中显着高表达。2、总体生存曲线显示,NUSAP1高表达患者预后差,NUSAP1低表达患者生存时间长;肿瘤分级分期资料表明NUSAP1高表达的患者肿瘤恶性程度越高。3、基于HepG2肝癌细胞系对照组和处理组（敲除基因NUSAP1）的RNA-seq数据的通路分析结果显示,NUSAP1可以激活细胞增殖相关基因的表达。4、经qRT-PCR实验检测NUSAP1-shRNA2可以使NUSAP1的表达水平下降至11%,沉默效果最好,所以用NUSAP1-shRNA-2进行后续实验。5、与shCtrl对照组相比,shNUSAP1组两种细胞的增殖率都明显下降且差异有统计学意义（Huh7:P=0.019;SMMC-7721:P=0.006）。6、平板克隆实验结果证明,SMCC-7721细胞敲除基因NUSAP1以后增殖明显受到抑制。7、沉默NUSAP1以后肝癌细胞周期过程受到阻滞,大部分细胞被阻滞在G1期。结论:研究表明,NUSAP1在HCC肿瘤组织中的表达水平显着高于非肿瘤组织。临床资料分析显示,NUSAP1高表达的HCC患者预后较差。细胞增殖实验结果也证明了这一结果,即NUSAP1在HCC细胞增殖中起重要作用。以上研究结果表明,NUSAP1可能是一种新的HCC诊断标志物和治疗靶点。
黄子明[5]（2020）在《趋化素样因子超家族蛋白CMTM7在肝细胞癌中的功能及其机制研究》文中提出研究背景原发性肝癌（Primary hepatic cancer,PHC）包括肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）、肝内胆管细胞癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC）和混合型肝癌三种病理类型,其中HCC占原发性肝癌的75%-85%。2018年全球肿瘤流行病学数据表明:肝癌年新发患者84.1万例,年死亡人数78.2万例。我国肝癌的发病人数占全世界的55%,国内肝癌的发病率位居所有癌症第四,死亡率位居第三,肝癌高发病率与死亡率给社会造成重大的经济负担。尽管肝癌的诊断和治疗水平不断地提高,但常规治疗手段的治疗效果目前仍无突破性进展。近年来,随着人们对肝癌的细胞生物学研究的深入,高稳定性、特异性的分子靶向正成为研究的热点。趋化素样因子超家族最早是由我国学者团队发现并报道的一种新型基因家族,科学家们利用抑制性减数杂交技术发现了趋化素样因子1（CKLF1）,并将CKLF1的3种变异体分别命名为CKLF2、3、4。后在此基础上,先后成功克隆并验证了CKLFSF1-8,2005年国际上证实命名为CMTM1-8。该超家族基因有着共同的MARVEL结构,这些结构特点赋予了CMTM家族特有的功能,并参与了免疫、生殖、造血、心肌、骨骼等多个系统的调控。其中CMTM1、3、5、7、8基因的编码产物目前被认为具有潜在的抑癌基因作用。CMTM7作为CMTM家族成员之一,在人体组织中广泛表达,表达产物的结构及其功能介于四次跨膜蛋白和典型的趋化因子之间,四次跨膜蛋白在体内通过结合其他多种蛋白而发挥作用,参与细胞的分化、粘附、溶解、信号传导等生物学特性的过程。有研究表明,在非小细胞肺癌组织中,CMTM7表达远远低于相对应的癌旁组织,而干扰CMTM7表达后,能够显着抑制肿瘤细胞的凋亡。另外,也有文献报道,过表达CMTM7可降低表皮生长因子受体的稳定性,加快其降解和促进内化。以上研究提示,CMTM7可能在肿瘤发生发展中发挥着重要的意义。在本课题中,我们将重点探讨CMTM7在HCC中的功能及其机制。实验目的1.通过收集HCC肿瘤组织样本及HCC细胞系,检测CMTM7在HCC中的表达情况。同时通过分析CMTM7在HCC组织中的表达水平与患者临床数据、随访结果,分析CMTM7与HCC患者病理特征、预后的相关性。2.在HCC细胞中过表达CMTM7后,检测是否能够影响HCC细胞的生长、迁移。3.检测在HCC细胞中过表达CMTM7后是否能够影响HCC细胞周期进程。4.通过构建肿瘤异体移植模型,检测过表达CMTM7是否能够影响HCC肿瘤的生长。5.在HCC细胞中过表达CMTM7后,检测CMTM7是否能够影响STAT3驱动的荧光素酶活性、STAT3的活化水平。6.通过建立索拉非尼HCC耐药株,检测CMTM7在耐药株中表达及过表达CMTM7对耐药株耐药性的影响。实验方法1.利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白免疫印迹法（western blot）技术检测HCC肿瘤组织及HCC细胞系中CMTM7的表达水平。2.利用免疫组化技术（IHC）检测HCC肿瘤组织及癌旁正常组织中CMTM7的表达水平,并通过IHC获得的肿瘤组织CMTM7表达积分,统计分析积分与肝癌患者临床病理特征及预后的关系。3.利用Lipofectamine（?）2000在HCC细胞中转染CMTM7过表达质粒。4.利用Cell Counting Kit-8法（CCK-8）检测HCC的细胞存活情况。5.利用细胞划痕、Transwell实验检测过表达CMTM7对细胞迁移能力的影响。6.利用流式分析及western blot技术检测过表达CMTM7后对HCC细胞周期的影响。7.利用构建的裸鼠肿瘤异体移植模型检测CMTM7对HCC肿瘤生长的影响。8.利用荧光素酶报告基因及western blot技术检测过表达CMTM7对STAT3活化的影响。9.利用western blot及CCK-8检测索拉非尼HCC耐药株中CMTM7的表达及过表达CMTM7对耐药株药物敏感性的影响。实验结果1.利用qRT-PCR法检测发现,相对于HCC癌旁正常组织,CMTM7在HCC肿瘤组织中的表达水平明显下降,其中78.8%（41/52）的HCC肿瘤组织中CMTM7的mRNA表达下调,肿瘤与癌旁组织之间的mRNA及蛋白表达水平差异具有统计学意义（p<0.01）。同时,CMTM7在4种HCC细胞系中的mRNA表达水平较正常肝脏上皮细胞系QSG7701表达水平也显着下降,差异具有统计学意义（p<0.01）。2.IHC结果提示,CMTM7的免疫组化积分在患者性别、年龄、肝脏纤维化、乙肝表抗阳性及远处转移等因素中,差异均无统计学意义（p>0.05）,而在肿瘤的不同临床分期中,差异有统计学意义（p＜0.01）,CMTM7的免疫组化积分与临床肿瘤分期呈负相关（R=-0.771）。另外,CMTM7低表达组患者5年生存率较高表达组显着下降（p=0.03 8）。3.CCK-8检测发现,过表达CMTM7能够显着抑制HCC细胞的生长。4.细胞划痕实验显示,划痕后24小时和48小时节点上,过表达CMTM7后较空载质粒组、阴性对照组HCC细胞迁移力差异有统计学意义（均P<0.01）。另外,Transwell小室法测定细胞的侵袭力结果表明,空载质粒转染组与阴性对照组细胞穿膜数量差异无统计学意义（p=0.33）,而过表达CMTM7组较阴性对照组明显减少,差异有统计学意义（p<0.01）。5.流式细胞分析发现,过表达CMTM7能够使HCC细胞周期阻滞在G0/G1期。并且通过对细胞周期蛋白分析发现,相对于空载质粒转染组,过表达CMTM7组中HCC细胞内的CyclinD1、CDK4、CDK6表达水平均下调,而p27表达水平上调。6.裸鼠肿瘤异体移植模型发现,过表达CMTM7能够显着抑制裸鼠皮下HCC异种移植瘤的生长。7.荧光素酶报告基因检测发现,过表达CMTM7能够显着抑制STAT3驱动的荧光素酶的活性。另外,western blot结果显示,过表达CMTM7能够显着抑制HCC细胞中STAT3的活化水平。8.在索拉非尼HCC耐药株中发现,CMTM7存在低表达,而过表达CMTM7能够显着增强耐药株对索拉非尼的药物敏感性。结论1.CMTM7在HCC肿瘤组织及细胞系中低表达,并与HCC病人的预后密切相关。2.过表达CMTM7抑制HCC细胞的生长、迁移能力,通过阻滞细胞周期于G0/G1期来影响细胞的生长。3.过表达CMTM7通过上调SHP-1的表达来抑制HCC细胞中STAT3信号通路。4.过表达CMTM7能够增强索拉非尼HCC耐药株对索拉非尼的药物敏感性。5.CMTM7基因有望作为HCC新的预后指标或索拉非尼的疗效预测指标。
孟子琦[6]（2020）在《基于整合生物信息学的复方苦参注射液治疗三种常见肿瘤作用机制研究》文中认为研究背景在世界范围内,肝癌、胰腺癌、肺癌高居恶性肿瘤发病率和死亡率的前列,严重威胁着人们的生命健康,也给家庭和社会带来了沉重的负担。中药注射剂在肿瘤治疗中具有独特的优势,广泛应用于临床。但由于中药具有多成分、多途径、多靶点、多功能的特点,导致药效物质基础不明确、作用机制不清楚,增加了研究的难度,严重影响了国际化的进程。复方苦参注射液具有清热利湿,凉血解毒,散结止痛的作用,临床上广泛用于恶性肿瘤的治疗,然而其作用机制尚未完全阐明。近年来伴随着生物信息学的迅猛发展,新理念、新思路不断涌现,网络药理学与生物信息学的结合成为提高中医药研究水平的重要路径。基于此,本研究运用整合生物信息学方法,分析探究复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的作用机制。研究目的通过生物信息学方法确认肝癌、胰腺癌中的关键基因。通过网络药理学方法预测、筛选复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的化学成分、作用靶点和信号通路并进行网络构建,从系统层面揭示复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的多成分、多靶点、多通路复杂机制。研究方法1.生物信息学分析在肝癌关键基因研究中,从GEO数据库下载基因芯片数据集,使用limma包进行差异表达分析,之后采用RobustRankAggreg包对数据集进行整合分析,筛选出共同被确认为差异表达的基因。通过STRING获取差异基因的蛋白互作信息,导入Cytoscape构建蛋白互作网络,并使用MCODE进行模块分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析。利用KM plotter、GEPIA进行生存分析、表达水平分析和关联性分析。在胰腺癌关键基因研究中,从TCGA数据库下载转录组测序数据和患者的临床信息,利用WGCNA包构建共表达网络、识别基因模块并与临床信息相关联。通过Cytoscape对模块进行可视化,并使用CytoHubba确定关键基因。通过clusterProfiler包进行GO富集分析,并通过DAVID进行KGEE通路富集分析。采用survival包进行单因素Cox回归分析,随后根据单因素的P值筛选基因进行多因素Cox回归分析,构建生存相关的线性风险评估模型,通过Kaplan-Meier生存曲线评估高、低风险组样本的总体生存率差异情况。采用survivalROC包绘制ROC曲线,评价预后模型的预测准确性。2.网络药理学分析在复方苦参注射液治疗肝癌作用机制研究中,通过文献检索获得复方苦参注射液的化学成分,通过 STITCH、SuperPred、SwissTargetPrediction、TCMSP 获取化学成分的靶点。通过TTD、GEO、TCGA获得肝细胞癌相关基因。使用Cytoscape构建“化合物-潜在靶点网络”、“化合物-肝细胞癌靶点网络”、“药物-化合物-靶点-通路网络”,对网络的关键拓扑参数进行分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析。使用KM plotter、GEPIA进行生存分析和关联性分析。利用AutoDock进行分子对接模拟。在复方苦参注射液治疗胰腺癌作用机制研究中,通过文献检索获得复方苦参注射液的化学成分,通过 STITCH、SuperPred、SwissTargetPrediction、TCMSP 获取化学成分的靶点。通过合并TTD、TCGA以及WGCNA筛选出的关键基因得到胰腺癌相关基因。随后通过STRING获取蛋白互作信息。使用Cytoscape构建“化合物-潜在靶点网络”、“化合物靶点-胰腺癌靶点蛋白互作网络”、“药物-化合物-蛋白互作靶点-通路网络”,并使用MCODE对网络进行模块分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析。利用AutoDock+进行分子对接模拟。在复方苦参注射液治疗肺癌作用机制研究中,通过文献检索获得复方苦参注射液的化学成分,通过STITCH、SuperPred、SwissTargetPrediction获取化学成分的靶点,通过TTD、OMIM获得肺癌相关基因。随后通过STRING获取蛋白互作信息。使用Cytoscape构建“化合物-潜在靶点网络”、“肺癌靶点蛋白互作网络”、“化合物-肺癌靶点网络”、“药物-化合物-靶点-通路网络”,对网络的关键拓扑参数进行分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析并通过systemsDock进行分子对接模拟。研究结果1.生物信息学分析结果对13个肝细胞癌基因芯片数据集进行整合分析,得到380个差异基因,包括293个下调基因和87个上调基因。通过蛋白互作网络与模块分析得到1 1个关键基因（CDK1、CCNB2、CDC20、CCNB1、TOP2A、CCNA2、MELK、PBK、TPX2、KIF20A、AURKA）和2个重要模块。富集分析表明,差异基因主要与代谢相关通路有关,关键基因和模块1与细胞周期密切相关。生存分析发现关键基因均与肝细胞癌患者生存时间呈负相关。表达水平分析表明关键基因均在肝细胞癌中高表达,关联性分析表明CDK1的表达与其他关键基因的表达呈正相关。对TCGA胰腺癌转录组测序数据进行筛选,共得到177个样本和5000个基因用于WGCNA分析,并得到11个基因模块。通过肿瘤分级、肿瘤分期和患者的生存状态最终筛选出黑色模块和蓝色模块作进一步研究。GO富集分析显示黑色模块与肿瘤的发生发展密切相关,蓝色模块与肿瘤的分化、侵袭和转移密切相关。KEGG通路富集分析显示,黑色模块中的基因主要富集在细胞周期、p53信号通路等通路上。蓝色模块中的基因主要富集在粘蛋白型O-聚糖的生物合成、花生四烯酸代谢、ECM-受体相互作用、紧密连接等通路上。通过网络分析,分别筛选出黑色模块和蓝色模块中的5个关键基因（NCAPG、BUB1、CDK1、TPX2、DLGAP5;INAVA、MST1R、TMPRSS4、TMEM92、SFN）,且这些基因均在胰腺癌中高表达。生存分析得到5个基因构建预后模型,其中TSPOAP1与胰腺癌患者生存时间呈正相关,ADGRG6、GPR87、FAM111B、MMP28与胰腺癌患者生存时间呈负相关。2.网络药理学分析结果在复方苦参注射液治疗肝癌作用机制研究中,通过网络分析,筛选出6个关键靶点（BCHE、SRD5A2、EPHX2、ADH1C、ADH1A、CDK1）,其中 CDK1 在肝细胞癌中高表达,其余5个均为低表达。GO富集分析显示,复方苦参注射液调控的与肝细胞癌有关的靶点主要富集在细胞周期、凋亡过程调控、代谢过程等生物过程中。KEGG通路富集分析表明,这些靶点主要与药物代谢-细胞色素P450、花生四烯酸代谢等通路有关。此外,关联性分析结果表明SRD5A2、EPHX2、ADH1C、ADH1A的表达与CDK1的表达有很强的负相关关系。生存分析结果表明,CDK1与肝细胞癌患者生存时间呈负相关,SRD5A2、EPHX2、ADH1C、ADH1A与肝细胞癌患者生存时间呈正相关。在复方苦参注射液治疗胰腺癌作用机制研究中,通过网络分析与模块分析,筛选出6个关键靶点（AKT1、MAPK1、MAPK3、EGFR、CDK1、JAK1）和3个重要模块。GO富集分析显示,3个重要模块主要与细胞周期、细胞增殖、JAK-STAT级联、MAPK级联、磷酸化,凋亡过程调控有关。KEGG通路富集分析表明,3个重要模块显着富集在细胞周期、ErbB信号通路、PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路等通路上。在复方苦参注射液治疗肺癌作用机制研究中,通过网络分析,筛选出8个关键靶点（CHRNA3、DRD2、PRKCA、CDK1、CDK2、CHRNA5、MMP1、MMP9）。GO 富集分析显示,复方苦参注射液调控的与肺癌有关的靶点显着富集在有丝分裂细胞周期G1/S转换、蛋白质磷酸化、ERK1和ERK2级联的调控、激酶活性等生物过程和分子功能中。KEGG通路富集分析表明,这些靶点主要参与癌症通路、癌症中的蛋白多糖、PI3K-Akt信号通路、非小细胞肺癌和小细胞肺癌等通路。研究结论本研究综合运用网络药理学和生物信息学方法,在系统层面揭示了复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的化学成分、作用靶点和信号通路。初步阐释了复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的作用机制可能与协同调控多个关键靶点和通路有关。本研究可为中药注射剂治疗不同类型恶性肿瘤的作用机制研究提供线索和思路,为进一步开展复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的基础实验研究以及促进治疗肝癌、胰腺癌、肺癌中药的临床合理应用提供参考和借鉴。
肖芦山[7]（2020）在《色素框同源蛋白8（CBX8）在原发性肝细胞癌进展中的作用及机制研究》文中研究表明研究背景及目的原发性肝细胞癌（primary liver cancer,PLC）是全球范围内常见的恶性肿瘤。2018年全球癌症统计结果表明,原发性肝细胞癌的全球发病率位于恶性肿瘤的第六位,死亡率位第四位。原发性肝癌主要包括肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）、肝内胆管癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC）和混合型（HCC-ICC3）种不同病理学类型,其中肝细胞癌占85%～90%,因此文章中的“肝癌”指肝细胞癌。尽管在外科切除,肝移植,分子靶向疗法和免疫疗法等常见肝癌治疗方法有所改善,但在过去的几十年中,HCC的预后仍然很差。肝细胞癌通常被诊断时已经为晚期,并且有较高的复发率,从而导致患者出现不良预后。因此,阐明肝细胞癌进展的分子机制并确定肝细胞癌的新分子治疗靶点以及预后标志物显得尤为关键。在参与恶性肿瘤形成和维持的增殖通路及相关因素中,PcG蛋白引起了研究者的关注。PcG蛋白的失调和功能异常通常会导致发育途径的阻滞或不适当的激活,细胞增殖的增强,细胞凋亡的抑制以及癌症干细胞群体的恢复。CBX8作为PcG蛋白中的一个重要成员,在多个肿瘤中异常表达,并且发挥着促肿瘤恶性进展的作用。但是,CBX8在肝癌中研究现状尚不是很清楚。因此,本研究拟探讨CBX8在肝癌进展中的作用及其作用机制。方法1、探讨CBX8与细胞周期信号通路之间的相关性。利用TCGA数据库肝癌数据集做基因集富集分析（GSEA）和干扰CBX8后qRT-PCR及Western blot实验探索CBX8与细胞周期信号通路之间的关系。2、探讨CBX8调控细胞周期的机制。利用生物信息学工具,通过免疫共沉淀,寻找及验证与CBX8结合的蛋白。利用过表达CBX8后同时再干扰YBX1后qRT-PCR及Western blot实验,探讨CBX8调控细胞周期的机制。3、探讨CBX8的生物学功能利用EdU和CCK-8实验探索CBX8对肝癌细胞增殖的影响。4、探讨CBX8调控肝癌细胞增殖的机制利用EdU和CCK-8实验探索CBX8调控肝癌细胞增殖的机制。5、阐明CBX8的在肝癌中的表达及临床意义利用qRT-PCR及Western blot实验结合肝癌TCGA数据分析,探讨CBX8在肝癌组织中的表达及其与肝癌患者预后的关系。结果1、CBX8与细胞周期信号通路基因呈正相关通过对TCGA数据库肝癌数据集做基因富集分析发现CBX8高表达与细胞周期信号通路相关。通过特异干扰CBX8后对一系列细胞周期基因进行qRT-PCR筛选发现CBX8主要上调CyclinD1表达而影响细胞周期进展。qRT-PCR和WB实验发现CBX8可以调控CyclinD1基因和蛋白水平。2、CBX8通过YBX1调控CyclinD1的表达水平利用生物信息学工具,通过免疫共沉淀发现CBX8与YBX1互相结合。利用qRT-PCR和WB实验发现CBX8可以通过YBX1调控CyclinD1的基因和蛋白的表达水平。3、CBX8促进肝癌细胞增殖利用CCK-8、EdU实验以及裸鼠皮下瘤实验证实CBX8可以促进肝癌细胞的增殖。4、CBX8通过YBX1调控肝癌细胞增殖利用CCK-8、EdU实验证明CBX8可以通过YBX1促进肝癌细胞的增殖。5、CBX8在肝癌中高表达且与患者不良预后呈正相关通过qRT-PCR及Western blot实验结合肝癌TCGA数据分析,明确CBX8在肝癌中高表达,且其高表达的患者总生存率和无病生存率较低。同时也发现CBX8跟YBX1同时高表达的患者总生存率和无病生存率最低。结论1、CBX8高表达与细胞周期信号通路呈正相关;2、CBX8可以通过YBX1调控CyclinD1基因的转录及蛋白表达;3、CBX8可以促进肝癌细胞增殖;4、CBX8可以通过YBX1调控肝癌细胞增殖;5、CBX8在肝癌组织中高表达并与其患者不良预后相关,同时发现CBX8跟YBX1同时高表达肝癌患者预后最差。
陈芊杏[8]（2020）在《SETDB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌发生分子机制的初步研究》文中指出目的:结直肠癌是最常见恶性肿瘤之一,在我国居癌症发病率和死亡率的第五位。结直肠癌发生过程中会出现原癌基因的激活、抑癌基因的失活、错配修复基因改变、凋亡调节紊乱等一系列生物学变化。目前,仍没有能够监控或体现这些生物学变化的高效分子标记物。因此,研究结直肠癌相关基因及其功能,不仅有利于阐明结直肠癌发生的分子机制,还可能为临床诊治、药物筛选及预后判断提供新的分子标记物。SETDB1（SET domain bifurcated 1,SET结构域分支型1）蛋白是一种组蛋白甲基转移酶,在多种人类实体瘤中呈现高表达,其高表达与肿瘤的生长、转移密切相关。近年来的研究表明,SETDB1很可能是一种促癌基因,但SETDB1在结直肠癌中的功能及分子机制仍不清楚。本课题拟在临床标本、体外实验、体内动物模型中研究SETDB1在结直肠癌发生中的功能,并通过体外实验研究SETDB1在结直肠癌中调控Wnt/β-catenin信号通路的分子机制,进而为结直肠肿瘤的发生提供新的理论依据。方法:1、采用免疫组织化学技术检测SETDB1在结直肠癌组织中的表达情况,并分析SETDB1在癌组织中的表达与各临床病理参数的关系。2、利用质粒转染技术建立稳定过表达/敲低SETDB1的HCT116、SW480细胞株,采用CCK8实验、EdU细胞增殖实验、软琼脂集落形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞仪及皮下成瘤实验检测过表达/敲低SETDB1对HCT116、SW480细胞体外增殖能力、集落克隆能力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期进程及体内成瘤能力的影响。3、采用RT-qPCR实验、Western Blot实验和免疫荧光实验检测过表达/敲低SETDB1对HCT116、SW480细胞中EMT（epithelial–mesenchymal transition,上皮-间质转化）标记物E-cadherin和Vimentin、EMT信号通路Wnt/?-catenin关键因子?-catenin、APC、GSK-3?以及靶因子c-Myc和CyclinD1的影响。结果:1、SETDB1在结直肠癌组织中的表达:在结直肠癌中,SETDB1在癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P<0.001）,SETDB1阳性表达与分化程度、肿瘤大小、术前血清CEA水平具有统计学相关性（P<0.05）,而与年龄、性别、肿瘤部位、pTNM分期、淋巴结转移等无统计学相关性（P>0.05）。2、SETDB1对结直肠癌HCT116、SW480细胞体内、体外生物学行为的影响:过表达SETDB1增强HCT116、SW480细胞的体外增殖、集落克隆形成、迁移、侵袭、体内成瘤能力,并促进细胞周期从G0/G1期向S期和G2/GM分化;敲低SETDB1降低HCT116、SW480细胞的体外增殖、集落克隆形成、迁移、侵袭、体内成瘤能力,并使细胞周期阻滞在G0/G1期。3、SETDB1在结直肠癌细胞中调控EMT通路Wnt/?-catenin的分子机制:过表达SETDB1后,E-cadherin在mRNA和蛋白水平均明显降低,Vimentin、c-Myc、CyclinD1在mRNA和蛋白水平均明显升高,细胞核内?-catenin的蛋白水平明显升高,APC和GSK-3?的蛋白水平明显降低;敲低SETDB1后,E-cadherin在mRNA和蛋白水平均明显升高,Vimentin、c-Myc、CyclinD1在mRNA和蛋白水平均明显降低,细胞核内?-catenin的蛋白水平明显降低,APC和GSK-3β的蛋白水平明显升高。结论:1、SETDB1在结直肠癌组织中表达上调,其高表达与分化程度、肿瘤大小、术前血清CEA水平相关。2、SETDB1促进结直肠癌细胞体外增殖、迁移、侵袭及细胞周期进程,并增强癌细胞体内成瘤能力。3.、SETDB1可能促进Wnt/β-catenin信号通路激活,促进结直肠癌EMT进程,进而促进结直肠癌发生。
王斌[9]（2020）在《三叶青根多糖通过下调miR-151表达影响肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭》文中研究说明目的:肝癌具有发病率高、死亡率高及恶性程度高等特点,已严重威胁人类生命安全,由于肝癌具有多重耐药性,大部分患者确诊时已处于晚期导致治疗效果降低,因而寻找安全性高、有效的抗肿瘤药物治疗肝癌具有重要意义。三叶青根多糖（RTP）具有抗氧化应激、抗炎、抗肿瘤等作用,但其对肝癌细胞的治疗效果及作用机制尚未阐明。本研究主要探讨RTP对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探究其可能作用机制。方法:体外培养肝癌细胞HepG2,分别加入含有浓度为0.65、1.25、2.5 mg/mL RTP的培养基处理24 h;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;qRT-PCR检测细胞中微小RNA-151（miR-151）的表达量;分别将anti-miR-NC、anti-miR-151转染至HepG2细胞;分别将miR-NC、miR-151 mimics转染至HepG2细胞,使用含有浓度为1.25 mg/mL RTP的培养基处理24 h,采用MTT法、流式细胞术、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭;Western blot检测Cyclin D1、P21、Bax、E-cadherin、Bcl-2、MMP-2蛋白的表达量。结果:与对照组比较,RTP 0.65 mg/mL组、RTP 1.25 mg/mL组、RTP 2.5 mg/mL组HepG2细胞活力显着降低（P<0.05）,Cyclin D1蛋白水平显着降低（P<0.05）,P21蛋白水平显着升高（P<0.05）;与对照组比较,RTP 1.25 mg/mL组HepG2细胞凋亡率显着升高（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数显着减少（P<0.05）,Bax、E-cadherin蛋白水平显着升高（P<0.05）,Bcl-2、MMP-2蛋白水平显着降低（P<0.05）;与对照组比较,RTP 1.25 mg/mL组HepG2细胞中miR-151的表达水平显着降低（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-151组细胞活力显着降低（P<0.05）,细胞凋亡率显着升高（P<0.05）,迁移细胞数与侵袭细胞数显着减少（P<0.05）,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白水平显着降低（P<0.05）,P21、Bax、E-cadherin蛋白水平显着升高（P<0.05）;与RTP 1.25 mg/mL+miR-NC组比较,RTP 1.25 mg/mL+miR-151组细胞活力显着升高（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数显着增多（P<0.05）,细胞凋亡率显着降低（P<0.05）,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白水平显着升高（P<0.05）,P21、Bax、E-cadherin蛋白水平显着降低（P<0.05）。结论:RTP可抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调miR-151表达有关。
丁俊[10]（2020）在《SOCS1通过P21-CyclinD1/CDK4调控细胞周期抑制肝细胞癌进展的机制研究》文中指出【研究背景与实验目的】肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球性的健康问题,具有发病率高,死亡率高的特征,严重威胁人类的健康。孤立的小肝癌通常首选外科手术治疗,五年存活率可达50%以上。但肝癌发病隐匿,患者确诊时一般已达中晚期,仅有部分患者有机会接受肝移植,仍有许多患者需要接受传统化疗或近年新兴的基因治疗、靶向药物治疗和免疫治疗。众所周知,传统化疗药物的选择性低,毒副作用强;免疫治疗更是对实体肿瘤,尤其是肝细胞癌的疗效不佳。除此之外,接受手术治疗后的患者仍有70%以上的概率出现肝内播散或是肝外转移,使得肝癌的术后复发成为困扰医务工作者的另一大难题。近年来,随着诸如索拉菲尼和伊马替尼等靶向药物的加入,传统肝癌治疗的方式被拓宽到局部结合系统治疗,肝癌的药物治疗正被逐步优化。基于肿瘤是一种多基因改变和信号通路传导异常的疾病,更多的生物分子有望成为治疗靶点,且亟待研究,以此提高肝癌患者的治疗效果和总体生存。细胞因子信号传导抑制因子1（Suppressors of cytokine signaling 1,SOCS1）基因是SOCS蛋白家族中的一员,所有成员在结构上十分相似,均具有N末端区域、SH2区和SOCS盒结构域,可分别参与到信号蛋白的磷酸化过程和靶蛋白的泛素-蛋白酶体途径中。SOCS1在多种肿瘤中被报道为抑癌因子,并在肝癌中存在异常甲基化,但其在肝癌中的具体作用机制研究仍旧局限,尤其是针对肝癌细胞周期调控的机制值得探索。【研究内容与方法】本研究拟通过两部分实验阐释SOCS1在肝癌中的作用和机制:1.明确SCSO1在人肝癌组织及癌旁正常组织和肝癌细胞系中的表达水平,结合临床病理数据统计分析SOCS1对肝癌诊断和预后评估的价值。（1）运用Oncomine国际数据库收集SOCS1在正常肝脏、肝硬化组织和肝癌组织中的m RNA表达量,分析比较正常组与异常组的表达水平差异;（2）运用实时荧光定量聚合酶链式反应检测SOCS1在159例肝细胞癌患者的肝癌组织及匹配癌旁正常组织的m RNA表达水平;（3）运用免疫组织化学染色法检测SOCS1在90例肝细胞癌患者的肝癌组织及匹配癌旁正常组织的蛋白表达水平;（4）选取正常肝脏细胞系QSG-7701和七种肝癌细胞系（SMMC-7721、HPEG2、HEP3B、HUH7、HCC-LM3、MHCC-97H和SK-HEP-1）验证SOCS1在细胞系中表达趋势与肝癌组织的一致性;（5）运用Kaplan–Meier生存分析和log-rank检验分析SOCS1表达与肝细胞癌患者预后的关系;运用卡方检验分析SOCS1表达与患者临床病理数据的相关性。2.探索SOCS1在肝细胞癌细胞周期调控中的作用和机制,寻找肝癌增殖进展的理论依据,发掘肝癌治疗的新型潜在靶点。（1）使用慢病毒转染,构建稳定过表达SOCS1的SMMC-7721、HCC-LM3和MHCC-97H人肝癌细胞株,蛋白质印迹实验验证过表达效率;（2）使用高通量测序技术分析转录组基因差异表达,富集SOCS1潜在影响的信号通路;运用CCK-8、流式细胞术周期检测和Ed U实验检测SOCS1对肝癌细胞周期的具体作用,并锁定关键调控节点采用蛋白质印迹实验印证;（3）使用稳定过表达SOCS1的SMMC-7721细胞株和对照组细胞建立裸鼠异种移植肿瘤,观察SOCS1在体内对肿瘤生长的影响;运用免疫组织化学染色,进一步验证上述所得关键调控蛋白的表达水平;（4）结合测序结果,分析差异表达蛋白的调控途径。分离提取细胞质和细胞核蛋白,检测核内关键蛋白表达水平;加入放线菌酮药物检测蛋白降解半衰期;运用Co-Immunoprecipitation（Co-IP）实验证实蛋白互做中的结合关系;过表达关键调控分子的表达量,观察其对下游信号通路的逆转;运用STRING蛋白互做数据库分析所得蛋白是否存在确切关联。【结果】1.肝癌细胞系、肝癌组织中SOCS1的m RNA和蛋白质表达水平较之正常肝癌细胞系和癌旁正常组织低表达（P<0.0001）;2.SOCS1与临床病理数据分析发现,SOCS1的表达水平与肿瘤大小相关（P=0.02）,且高表达SOCS1患者组较之低表达组拥有更高的无瘤生存率（P=0.0042）和总体生存率（P=0.0265）;3.高通量测序分析差异基因并富集信号通路,发现SOCS1与细胞周期和泛素化途径存在相关性,提示肝癌中可能存在SOCS1调控细胞周期关键分子的泛素化修饰从而抑制肝癌细胞增殖的信号通路;4.过表达SOCS1后,SMCC-7721,HCC-LM3和MHCC-97H的细胞扩增速率显着下降（P<0.0001）;HCC-LM3和SMCC-7721细胞株的细胞周期阻滞在G1期（P<0.05）,S期细胞占比显着减少（P<0.005）,MHCC-97H细胞株并未观察到明显的周期阻滞;Ed U实验证实HCC-LM3和SMCC-7721两种细胞株在过表达SOCS1后存在细胞周期的G1-S期转化阻滞;5.细胞周期G1期的关键调控分子Retinoblastoma（Rb）的磷酸化水平在SOCS1过表达后显着下调,阻断细胞周期进展。另一关键调控分子Cyclin D1蛋白质表达水平升高,其上游P21和P27的蛋白质表达水平下调;6.体内实验中,过表达SOCS1的SMCC-7721细胞株生长受到明显抑制,成瘤大小显着小于对照组（P<0.001）;肿瘤组织切片运用免疫组织化学染色证实关键调控蛋白分子差异表达与上述结果一致;7.SOCS1过表达后P21和P27的转录水平未受到明显改变,通过MG-132药物的时间梯度实验,提示P21存在泛素化修饰的可能,并通过Co-IP证实P21受泛素化调节,进而影响Cyclin D1/CDK4复合体在细胞核内稳定性;8.分离提取细胞质和细胞核蛋白后运用蛋白质印迹检测,发现SOCS1过表达后核内发挥作用的Cyclin D1蛋白总量下调,包含了更多失活的Phospho-Cyclin D1,无法正常结合CDK4;9.过表达SOCS1后的稳定转染细胞株,再经P21的过表达,可以将上述细胞周期信号通路的差异表达逆转,减少Cyclin D1在核内的失活量,利于稳定Cyclin D1/CDK4复合体;10.Co-IP实验进一步证实CDK4所能结合的Cyclin D1蛋白量在SOCS1过表达后显着减少;SOCS1与泛素连接酶E3复合体中的Ring-box 1（RBX1）存在结合关系,可募集泛素转移酶E2促进靶标蛋白经泛素-蛋白酶体途径降解。【结论】1.SOCS1在肝癌细胞和患者肝癌组织中低表达,且与肿瘤大小存在相关性。2.通过高通量测序分析和实验论证,在肝癌中发现SOCS1可以有效调控P21-Cyclin D1/CDK4-Rb细胞周期信号通路。3.SOCS1在肝癌中有明确的抑癌作用,通过细胞周期阻滞可以抑制肝癌的发展,在细胞周期信号网络中发挥了重要作用,可能作为潜在靶点治疗肝癌。
二、Cyclin D_1在肝细胞癌中的表达及意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Cyclin D_1在肝细胞癌中的表达及意义（论文提纲范文）
（1）mRNA/piRNA/piwi在DEN诱导肝癌中的表达及紫草素对肝癌细胞生物学行为的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 DEN诱导大鼠肝癌模型的建立及mRNA芯片分析 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究内容与方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 piRNA/piwi与肝癌的关系研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 研究内容与方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 紫草素对肝癌细胞CBRH-7919 的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 研究内容与方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 piRNA/piwi 在癌症中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（2）长链非编码RNA CYTOR通过调节miR-125b-5p/KIAA1522轴影响肝细胞癌增殖、凋亡和细胞周期的机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 第一部分: 应用生物信息学方法筛选新的肝细胞癌相关的lncRNA/miRNA/mRNA调控轴 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分: lncRNA CYTOR/miR-125b-5p/KIAA1522调控轴在肝细胞癌细胞系中的作用 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 非编码RNA在肝细胞癌发生与发展中的调节作用及临床应用(文献综述) |
| 第一章 引言 |
| 第二章 作为ceRNA的ncRNA及其它ncRNA在肝细胞癌发展中的可能作用及机制 |
| 第三章 ncRNA在HCC诊断及预后中的临床应用 |
| 第四章 结论、局限性和展望 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（3）人肝细胞癌组织Mina53的表达及影响增殖、侵袭转移的体外实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 实验仪器及耗材 |
| 1.3 组织标本 |
| 1.4 肝癌细胞系 |
| 1.4.1 细胞培养 |
| 1.4.2 细胞复苏 |
| 1.4.3 细胞传代 |
| 1.4.4 细胞冻存 |
| 2.方法 |
| 2.1 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) |
| 2.1.1 提取新鲜组织总RNA |
| 2.1.2 逆转录mRNA |
| 2.1.3 qRT-PCR |
| 2.2 蛋白质免疫印迹(Western blot) |
| 2.2.1 提取新鲜组织总蛋白 |
| 2.2.2 BCA法测总蛋白浓度 |
| 2.2.3 Western blot |
| 2.3 免疫组化 |
| 2.3.1 制作组织芯片 |
| 2.3.2 免疫组织化学染色 |
| 2.3.3 免疫组化结果判定标准 |
| 2.4 肝癌细胞系HCCLM3、QGY-7703、Huh7 细胞转染 |
| 2.4.1 过表达质粒转染 |
| 2.4.2 小干扰RNA(si RNA)转染 |
| 2.5 MTT实验 |
| 2.6 平板克隆形成实验 |
| 2.7 流式细胞术检测细胞周期 |
| 2.8 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 2.9 细胞划痕实验 |
| 2.10 Transwell小室迁移、侵袭实验 |
| 2.11 统计学分析 |
| 结果 |
| 1.qRT-PCR检测Mina53m RNA在肝细胞癌新鲜组织中的表达 |
| 2.Western blot检测Mina53 蛋白在肝细胞癌新鲜组织中的表达 |
| 3.免疫组化检测组织芯片中Mina53的表达 |
| 4.Mina53的表达与肝细胞癌临床病理特征的关系 |
| 5.Mina53的表达与肝细胞癌患者术后生存期的关系 |
| 6.Cox模型分析影响肝细胞癌患者预后的因素 |
| 7.不同肝癌细胞系中Mina53的表达水平 |
| 8.Mina53在HCCLM3、QGY-7703、Huh7 细胞系中的转染情况 |
| 9.Mina53对肝癌细胞增殖能力的影响 |
| 10.Mina53对肝癌细胞周期的影响 |
| 11.Mina53对肝癌细胞凋亡的影响 |
| 12.Mina53对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响 |
| 13.Mina53对肝癌细胞中上皮-间质转化和基质金属蛋白酶的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（4）NUSAP1促进肝细胞癌增殖并影响其预后的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 肝细胞癌的研究现状 |
| 1.1.1 肝癌概述 |
| 1.1.2 肝细胞癌的诊断和治疗 |
| 1.2 高通量测序技术及分析 |
| 1.3 研究意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 生物信息学数据来源 |
| 2.1.1 GEO数据库 |
| 2.1.2 TCGA数据库 |
| 2.2 生物信息数据分析工具与方法 |
| 2.2.1 R语言 |
| 2.2.2 MultiExperiment Viewer(Mev)热图 |
| 2.2.3 基于单个基因的Meta分析 |
| 2.2.4 基于GEO数据的meta分析的方法 |
| 2.2.5 NUSAP1-shRNA数据下载与分析 |
| 2.2.6 NUSAP与患者生存数据的生存分析 |
| 2.3 实验材料 |
| 2.3.1 实验细胞 |
| 2.3.2 试剂耗材 |
| 2.3.3 主要仪器设备 |
| 2.4 试剂配制 |
| 2.4.1 细胞培养基配制 |
| 2.4.2 冻存液的配制 |
| 2.4.3 TAE配制 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 sh-NUSAP1 质粒构建 |
| 2.5.2 质粒小提 |
| 2.5.3 质粒大提 |
| 2.5.4 转染 |
| 2.5.5 RNA提取 |
| 2.5.6 qRT-PCR实验检测mRNA表达量 |
| 2.5.7平板细胞克隆形成实验 |
| 2.5.8 细胞周期 |
| 2.6 统计分析方法 |
| 2.6.1 t检验 |
| 2.6.2 卡方检验 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 基于芯片的全基因组数据,筛查到重要的差异表达基因NUSAP1 |
| 3.2 NUSAP1在HCC中高表达且与患者生存和临床病理分型有关 |
| 3.3 NUSAP1 异常高表达促进HCC发生发展的分子机制 |
| 3.4 NUSAP1 对肝癌细胞增殖和周期的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 一、前言 |
| 二、DNA的损伤和修复 |
| 三、细胞周期 |
| 四、DNA损伤对细胞周期的影响 |
| G1和G1/S检查点调控 |
| S期检查点调控通路 |
| G2检查点 |
| 五、DNA损伤与癌症的关系 |
| 六、展望 |
| 参考文献 |
（5）趋化素样因子超家族蛋白CMTM7在肝细胞癌中的功能及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 CMTM7在肝细胞癌中的表达分析 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 参考文献 |
| 第二部分 CMTM7对肝细胞癌细胞生长、迁移的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 参考文献 |
| 第三部分 CMTM7通过上调SHP-1表达水平来抑制HCC细胞中STAT3信号通路 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 参考文献 |
| 第四部分CMTM7对肝细胞癌耐药的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 参考文献 |
| 总结论 |
| 综述 CMTM家族蛋白在恶性肿瘤中的作用及机制 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 致谢 |
（6）基于整合生物信息学的复方苦参注射液治疗三种常见肿瘤作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 复方苦参注射液抗肿瘤作用机制研究进展 |
| 综述二 复方苦参注射液临床应用进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于整合生物信息学的复方苦参注射液治疗三种常见肿瘤作用机制研究 |
| 一、基于生物信息学的肝癌关键基因研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 二、基于网络药理学的复方苦参注射液治疗肝癌作用机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 三、基于生物信息学的胰腺癌关键基因研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 四、基于网络药理学的复方苦参注射液治疗胰腺癌作用机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 五、基于网络药理学的复方苦参注射液治疗肺癌作用机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 1 研究成果 |
| 2 研究的创新与特色 |
| 3 研究的展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）色素框同源蛋白8（CBX8）在原发性肝细胞癌进展中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 CBX8与细胞周期信号通路呈正相关 |
| 前言 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第二章 CBX8通过YBX1调控CyclinD1的表达 |
| 前言 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第三章 CBX8促进肝癌细胞增殖 |
| 前言 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第四章 CBX8通过YBX1促进肝癌细胞的增殖 |
| 前言 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五章 探讨CBX8在肝癌中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表论文 |
| 中英文对照缩略表 |
| 致谢 |
（8）SETDB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌发生分子机制的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| SETDB1 在肿瘤发生中的作用机制研究进展(综述) |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）三叶青根多糖通过下调miR-151表达影响肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 RTP对HepG2细胞增殖的影响 |
| 2.2 RTP对HepG2细胞凋亡、迁移和侵袭的影响 |
| 2.3 RTP对HepG2细胞中miR-151 表达的影响 |
| 2.4 抑制miR-151 对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响 |
| 2.5 过表达miR-151 逆转了RTP对HepG2细胞增殖的影响 |
| 2.6 过表达miR-151 逆转了RTP对HepG2细胞凋亡、迁移和侵袭的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）SOCS1通过P21-CyclinD1/CDK4调控细胞周期抑制肝细胞癌进展的机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩略词 |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 SOCS1作为肝细胞癌辅助诊断生物标志物的研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SOCS1 在肝细胞癌组织和正常肝脏组织中的m RNA表达数据采集 |
| 3.2 SOCS1 在我院肝细胞癌患者肝组织中的m RNA表达水平检测 |
| 3.3 SOCS1在肝细胞癌患者肝脏组织中的蛋白表达水平检测 |
| 3.4 SOCS1 在肝癌细胞系中的m RNA表达水平检测 |
| 3.5 SOCS1在肝癌细胞系中的甲基化程度 |
| 3.6 肝细胞癌组织中SOCS1表达水平与患者临床病理特征和长期生存的相关性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 SOCS1调控细胞周期信号通路对肝癌细胞增殖的影响和机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SOCS1在特定肝癌细胞系中的外源性过表达 |
| 3.2 SOCS1在体外实验中抑制肝癌细胞增殖能力并在体内抑制成瘤能力 |
| 3.3 SOCS1 通过泛素化P21 影响Cyclin D1/CDK4 复合体从而抑制肝癌细胞增殖 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 综述 SOCS蛋白家族在癌症信号通路中的机制和临床应用前景 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
四、Cyclin D_1在肝细胞癌中的表达及意义（论文参考文献）
- [1]mRNA/piRNA/piwi在DEN诱导肝癌中的表达及紫草素对肝癌细胞生物学行为的影响[D]. 王延蛟. 新疆医科大学, 2021(08)
- [2]长链非编码RNA CYTOR通过调节miR-125b-5p/KIAA1522轴影响肝细胞癌增殖、凋亡和细胞周期的机制研究[D]. 胡博. 北京协和医学院, 2021(02)
- [3]人肝细胞癌组织Mina53的表达及影响增殖、侵袭转移的体外实验研究[D]. 叶冬雪. 青岛大学, 2020(01)
- [4]NUSAP1促进肝细胞癌增殖并影响其预后的研究[D]. 徐慧. 南昌大学, 2020(08)
- [5]趋化素样因子超家族蛋白CMTM7在肝细胞癌中的功能及其机制研究[D]. 黄子明. 苏州大学, 2020(06)
- [6]基于整合生物信息学的复方苦参注射液治疗三种常见肿瘤作用机制研究[D]. 孟子琦. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]色素框同源蛋白8（CBX8）在原发性肝细胞癌进展中的作用及机制研究[D]. 肖芦山. 南方医科大学, 2020(01)
- [8]SETDB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌发生分子机制的初步研究[D]. 陈芊杏. 西南医科大学, 2020(11)
- [9]三叶青根多糖通过下调miR-151表达影响肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭[D]. 王斌. 山西医科大学, 2020(12)
- [10]SOCS1通过P21-CyclinD1/CDK4调控细胞周期抑制肝细胞癌进展的机制研究[D]. 丁俊. 浙江大学, 2020(01)