一、重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用（论文文献综述）
张在鹏[1]（2016）在《日本鳗鲡Caspase6基因的克隆和表达分析》文中指出本研究首次获得了日本鳗鲡（Anguilla japonica）Caspase6基因cDNA全长序列,命名为AjCasp6（GenBank号KJ726738）。该基因全长为1524 bp,其中开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）为903 bp,编码300个氨基酸。其蛋白三维空间结构图与人类Caspase6十分相似,具有Caspase家族典型的CASc结构域,包括一个P20结构域（54aa-178 aa）和一个P10结构域（204 aa-298 aa）,半胱氨酸活性位点“KPKIFIFQACRG”及组氨酸活性位点“HADADCFVCVFLSHG”。同源性分析显示AjCasp6氨基酸序列与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）相似性最高,为75%,与其他鱼类相似性在61%75%之间。系统发育树表明,AjCasp6与其他鱼类Caspase6聚为一支,而哺乳类以及两栖类Caspase6聚为一支。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明:AjCasp6基因在日本鳗鲡各组织中均有表达,其中鳃中表达量最高,肠、肝脏、肾脏、皮肤和血细胞中也有较高表达,而心脏和肌肉中的表达水平则相对较低。日本鳗鲡经LPS、poly I:C和嗜水气单胞菌（A.hydrophila）刺激后,对其肾脏、肝脏、脾脏以及血细胞中AjCasp6基因在不同时相的表达变化进行了研究。结果表明:经LPS刺激后,AjCasp6基因在肝脏、肾脏和脾脏中的表达水平均有明显升高,而血细胞中表达量仅在3 h有所升高,但6 h则显着降低;poly I:C免疫注射后,肾脏、肝脏和脾脏中AjCasp6的表达量均有显着升高,而血细胞发现在6 h显着下降,12 h表达量略有升高;嗜水气单胞菌感染后,AjCasp6基因表达量在肾脏和肝脏显着上升,但在脾脏和血细胞中的表达量仅在6 h和48 h有所提高。研究了日本鳗鲡肝脏细胞经LPS、poly I:C、CpG、PGN以及三种不同浓度嗜水气单胞菌刺激后的AjCasp6基因表达水平变化,结果表明:肝脏细胞经LPS、poly I:C和PGN刺激后,AjCasp6基因表达水平均有显着升高,而经CpG处理48 h后AjCasp6表达量显着降低。经浓度分别为106 cfu/mL、107 cfu/mL以及108 cfu/mL的嗜水气单胞菌感染后,AjCasp6表达量均有显着提高,其表达量与菌体浓度的增加呈正相关。进行了日本鳗鲡AjCasp6基因原核表达及其兔抗血清的制备,结果表明:构建的重组载体pGEX-4T-2-Aj Casp6可以在大肠杆菌中高效表达,重组蛋白的分子量约为60 kDa,其表达量随着诱导时间的延长而提高,经镍柱亲和层析后获得高纯度的AjCasp6重组蛋白,制备相应的兔抗血清经ELISA检测其效价高达52100。日本鳗鲡肝脏组织通过原代培养成功使细胞从组织块中迁出,且至传代培养中获得的肝脏细胞经多次传代以后细胞形态、增殖周期渐渐稳定。由于日本鳗鲡肝脏细胞独特的生长特性,因此其可以较长时间处于生长的平台期,在不更换培养液的情况下能够维持一个月而不至于大批细胞凋亡、解体,使用时直接消化传代即可用于后续实验。构建了日本鳗鲡AjCasp6绿色荧光融合蛋白表达载体pEGFP-N1-Aj Casp6,通过转染HEK-293T细胞对该蛋白的细胞定位进行了研究。结果表明,AjCasp6蛋白仅在细胞质中有所分布,作为对照的pEGFP-N1空载体转染HEK-293T细胞后,绿色荧光蛋白在细胞核和细胞质中均有表达,提示AjCasp6主要在细胞质中参与细胞凋亡进程的调控作用。
谌海燕,王云涛,韩福旺,丁晓庆,郭明,陈信义[2]（2015）在《复方浙贝颗粒联合三苯氧胺对LCC2移植瘤相关蛋白表达影响》文中指出目的:研究复方浙贝颗粒（CZBG）联合三苯氧胺（TAM）对LCC2移植瘤组织相关蛋白HER-2、GST-π、Caspase3表达的影响。方法:用耐TAM的人乳腺癌细胞系LCC2建立小鼠移植瘤模型。实验分模型对照组,TAM组,阿霉素（ADM）+TAM组,中剂量CZBG+TAM组,ADM+中剂量CZBG+TAM组,采用免疫组化法分别检测各组HER-2、GST-π、Caspase3的表达差异。结果:1与TAM组相比,中剂量CZBG+TAM组、ADM+中剂量CZBG+TAM组能下调HER-2表达（P<0.05）。2与模型对照组相比,各治疗组GST-π表达均有所下降（P<0.05）;各治疗组之间的GST-π表达无统计学意义（P>0.05）。3与模型对照组相比,中剂量CZBG+TAM组和ADM+中剂量CZBG+TAM组均能上调Caspase3表达（P<0.05）;中剂量CZBG+TAM组与模型对照组、TAM组、ADM+TAM组比较,Caspase3的表达均有统计学意义（P<0.05）。结论:中剂量CZBG能够下调乳腺癌LCC2细胞移植瘤组织的HER-2表达,提高Caspase3活性,而对GST-π表达无明显影响。
靳福鹏[3]（2011）在《益气养阴解毒方对小鼠Lewis肺癌细胞增殖及凋亡影响的研究》文中指出目的: 1、观察益气养阴解毒方含药血清对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响;2、观察益气养阴解毒方对Lewis肺癌移植瘤生长及对移植瘤细胞凋亡的影响;3检测益气养阴解毒方对凋亡相关蛋白Caspae-3表达的影响,初步探讨益气养阴解毒方抗肿瘤作用机制。方法:1、采用血清药理学方法,用SD大鼠制备益气养阴解毒方低、中、高剂量、顺铂（DDP）、益气养阴解毒方联合DDP、生理盐水（NS）对照含药血清,体外培养Lewis肺癌细胞（LLC）,采用MTT法检测各组血清对LLC增殖的影响;2、制作C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,将接种LLC的C57BL/6小鼠随机分为6组:NS对照组,益气养阴解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组,顺铂（DDP）组,益气养阴解毒方联合DDP组,每组10只,接种第七天开始给药,中药及NS连续灌胃20d,DDP隔日腹腔注射,观察移植瘤生长情况,接种后第28d处死动物,称各组瘤重,计算抑瘤率;3、流式细胞仪（FCM） Annexin V- FITC/PI标记法检测各组体外培养细胞凋亡率,免疫组织化学法（SP法）检测体外培养细胞Caspase-3表达;4、TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Caspase-3表达。结果:1、益气养阴解毒方含药血清能够抑制体外培养LLC生长,且呈浓度和时间依赖性,高浓度作用72h抑制率达50%,中药联合DDP抑制率最高达94.67%;与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;2、益气养阴解毒方低、中、高剂量组对LLC移植瘤均有较明显抑制作用,抑瘤率分别为19.30%、32.83%、34.59%,瘤重低于对照组,有显着性差异（P<0.01）,中药联合DDP组抑瘤率达83.71%,与其他各组比较,有显着性差异（P<0.01）;3、各组含药血清均具有促进LLC凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖关系,中药联合DDP作用最强,作用72h,细胞凋亡率下降,而坏死率升高,益气养阴解毒方各剂量组含药血清使Caspase-3的表达升高,呈剂量和时间依赖性,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,与其他各组比较,中药联合DDP作用最强（P<0.05）;4、TUNEL法检测各中药组及联合组移植瘤细胞凋亡指数较对照组明显增高,差异有统计学意义（P<0.05）,各中药组促进移植瘤细胞Caspase-3表达,随剂量增加,表达增强,与对照组比较有差异性（P<0.05）,中药联合DDP组表达最强,与其他各组比较有显着性差异（P<0.01）。结论:1、益气养阴解毒方在体内外试验中均可抑制Lewis肺癌生长,与DDP联合作用增强;2、益气养阴解毒方在体内外试验中均表现出对Lewis细胞的凋亡促进作用,与DDP联合作用增强;3、益气养阴解毒方促进Lewis细胞凋亡可能与其促进Caspase-3的表达有关。
黄凌燕,张建中,曲娜[4]（2009）在《凋亡基因Caspase3在乳腺癌中的表达及其临床意义》文中认为目的探讨乳腺癌进展中Caspase3基因表达的临床意义。方法用免疫组织化学和Western Blot技术检测21例乳腺腺病、21例乳腺纤维腺瘤、96例原发性乳腺癌病灶中Caspase3蛋白表达情况。结果乳腺腺病、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中Caspase3蛋白表达阳性率分别为85.72%（18/21）、61.90%（13/21）、23.96%（23/96）,乳腺癌Caspase3蛋白表达阳性率明显低于乳腺良性病变（P=0.000）。乳腺癌Caspase3蛋白表达阳性率越低,淋巴结转移个数越多,临床分期越高（P=0.010）。结论Caspase3对判断乳腺良恶性疾病及乳腺癌的发展程度具有参考价值。
王晓侠,姚小宝,嵇宪生,朱宏亮[5]（2009）在《重构型Caspase-3基因对CNE2细胞的作用》文中认为目的探讨Caspase-3基因表达对人鼻咽癌细胞CNE2的凋亡诱导作用。方法应用重组技术将重构型Caspase-3基因亚克隆至带有报告基因的真核表达载体pEGFP中,脂质体介导转染人鼻咽癌细胞CNE2通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化;MTT法检测转染Caspase-3基因对CNE2细胞生长的影响。结果RT-PCR方法证实重构型Caspase-3基因可在CNE2细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,结果表明Caspase-3对CNE2的细胞生长有抑制作用。结论重构型Caspase-3对CNE2细胞的生长有抑制作用。
张翔[6]（2007）在《Probasin启动子介导的靶向凋亡对前列腺癌的杀伤作用》文中提出前列腺癌在老年男性生殖系统常见。在国外,前列腺癌的发病率与死亡率仅次于肺癌,居第二位。在国内,随着寿命的延长和生活方式的改变,其发病率也在增长,已成为严重威胁男性健康和生命安全的主要疾病。早期发现并且身体条件允许的患者可以实行手术治疗;但是大多数患者发现时都已经是晚期,对这些病人目前没有很好的治疗方案,患者的平均生存率只有大约3年。因此,寻找新的前列腺癌治疗方法显得尤为迫切。基因治疗由于能对致病基因进行修复,替代和删除从而发挥治疗作用而成为近年来的研究热点。利用前列腺特异性的启动子来表达外源基因,从而达到根治或控制前列腺癌的目的,这是令人瞩目的一个研究方向。probasin是一种自大鼠背外侧叶前列腺的细胞核中分离出的蛋白质,氨基酸序列分析表明它属于lipocalin超家族（一种配体转运蛋白）,免疫组织化学研究表明这种蛋白质位于前列腺上皮细胞内和前列腺分泌液中,经研究发现probasin蛋白质的表达受雄激素的调控并且具有前列腺组织特异性。所以probasin启动子继前列腺特异抗原（PSA）启动子之后成为又一个受到关注的对象。caspase的活化是不同细胞凋亡途径中共同的下游事件。caspase-3是最主要的效应caspase之一,它在细胞中以酶原形式存在,一级结构中自N端起依次为原结构域（prodormain）、大亚基和小亚基。细胞发生凋亡时,caspase-3被上游caspase切割,原结构域被去除,大、小亚基之间发生断裂,并重新组装成具有活性的caspase-3分子。活化caspase-3可以作用于细胞内多种结构和功能蛋白,引起细胞凋亡。本实验首先利用PCR的方法从大鼠前列腺组织中克隆出（-426～+28bp）的probasin启动子序列,经测序正确后利用交叠PCR技术克隆出含有2个雄激素反应元件的ARR2PB启动子序列,把两个正确的启动子序列插入到pPRIME表达载体以及荧光素酶载体pGL3-Basic,构建由PB和ARR2PB启动子调控的表达GFP的pPRIME载体和荧光素酶载体,并把PGL3载体上的荧光素酶基因切下插入到CMV启动子调控的pcDNA3.1 His A载体中作为对照,把以上载体转染入不同的前列腺癌、非前列腺癌细胞系及正常细胞系中验证启动子的活性和特异性,并用pEGFP-N2载体作为瞬时转染率的对照。GFP绿色荧光观察结果显示两种启动子具有前列腺的组织特异性,在LNCaP中荧光最强,其中ARR2PB启动子的活性明显高于PB启动子。流式细胞术检测荧光表达量以及荧光素酶的检测结果都证实了所看到的荧光结果,即probasin启动子具有前列腺的组织特异性,其中启动子的活性依次是CMV>ARR2PB>PB。接着把构建的PB-pPRIME和ARR2PB-pPRIME表达载体上的GFP序列替换成caspase-3序列,构建了由PB和ARR2PB调控的PB-pPRIME-caspase-3, ARR2PB-pPRIME-caspase-3,以及未替换CMV启动子的pPRIME-caspase-3对照载体,把以上载体转染入激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP和激素非依赖PC3细胞,用间接免疫荧光染色检测caspase-3基因在细胞中的表达,流式细胞术,Hoechst33258染色,电镜观察等方法检测促凋亡作用。间接免疫荧光染色结果表明,转染以上载体后前列腺癌细胞中有caspase-3阳性细胞的出现,与正常未转染构建载体的对照细胞相比阳性细胞数目明显增加。Hoechst33258染色,电镜等方法显示两种不同形式的启动子都能介导caspase-3的促凋亡作用,其中在转染了pPRIME-caspase-3,PB-pPRIME-caspase-3以及ARR2PB-pPRIME-caspase-3后流式细胞术显示LNCaP的凋亡率分别是10.55﹪,7.74﹪和10.5﹪,而在PC3中的凋亡率分别为71.71﹪,57.56﹪和61.82﹪。与pPRIME质粒转染组相比,pPRIME-caspase-3, PB-pPRIME-caspase-3和ARR2PB-pPRIME-caspase-3重组质粒转染组的细胞凋亡率明显上升（P<0.05）。本实验详尽比较了两种probasin启动子的组织特异性和活性,证明了probasin在前列腺癌中介导的促凋亡作用,为进一步研究组织特异性启动子介导的肿瘤的杀伤作用,以及前列腺肿瘤治疗新方法奠定了基础。
余晓林,刘红,陈万平,程鹏远[7]（2005）在《GFP共表达的重构型Caspase-3基因对Hep-2细胞的作用》文中研究指明目的:探讨GFP共表达的Caspase-3基因的表达对人喉癌细胞Hep-2的凋亡诱导作用.方法:应用DNA重组技术将重构型Caspase-3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,脂质体介导转染人喉癌细胞Hep-2,通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化;MTT法检测转染Caspase-3基因对Hep-2细胞生长的影响.结果:RT-PCR方法证实重构型Caspase-3基因可在Hep-2细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,MTT法结果表明Caspase-3对Hep-2的细胞生长有抑制作用.结论:重构型caspase-3对喉癌细胞Hep-2的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.
桂俊豪,许彦鸣,于翠娟,赵晶,贾林涛,王成济,杨安钢,仇东辉,余伍忠,何江[8]（2005）在《三种重构型人caspase-8促宫颈癌HeLa细胞凋亡的效率》文中认为背景与目的细胞凋亡是一种进化上高度保守的细胞死亡方式,将高活性的促凋亡分子靶向性地导入肿瘤细胞而诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤基因治疗的潜在策略。在证实了大、小亚基次序颠倒的重构型人caspase-8具有持续的诱导宫颈癌细胞HeLa凋亡活性的基础上,本研究旨在分析3种重构型人caspase-8（Casp8CD、Rev8和Rev8L）促HeLa细胞凋亡的效率,探讨重构型人caspase-8作为诱导肿瘤细胞凋亡候选分子的可行性。方法脂质体法将Casp8CD、Rev8和Rev8L基因的pIRES2鄄EGFP真核表达载体转染入人HeLa和MCF鄄7细胞,用荧光显微镜观察目的基因的表达及其促凋亡效应,MTT法和细胞计数法检测3种重构型人caspase鄄8基因表达产物的促凋亡效率。用生物信息学方法分析Rev8和Rev8L分子大、小亚基间连接肽段的柔性。结果荧光显微镜观察结果表明,3种重构型人caspase-8基因在HeLa和MCF-7细胞中得到表达,其中Rev8和Rev8L基因的表达能有效促进被转染细胞的凋亡,细胞表现为凋亡性容积减少（AVD）。MTT结果显示,Rev8和Rev8L基因转染组在转染后20h,A570值即开始明显降低（与对照组相比）。细胞计数结果表明,转染后24h,Casp8CD、Rev8和Rev8L基因转染组的细胞死亡率分别为16.9%、52.3%和47.7%,而转染后48h各组相应的细胞死亡率分别为12.9%、51.6%和61.2%?
鱼兵,范清宇,闫露,龙华,文艳华[9]（2004）在《GFP共表达的重构型Caspase-3基因对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用》文中进行了进一步梳理目的 探讨GFP共表达的caspase -3基因的表达对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用。方法 应用DNA重组技术将重构型caspase -3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP -C1中 ,脂质体介导转染人成骨肉瘤细胞SOSP -990 1,通过RT -PCR方法检测转染后caspase -3基因的表达 ;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化 ;MTT法检测转染caspase -3基因对SOSP -990 1细胞生长的影响。结果 RT -PCR方法证实重构型caspase -3基因可在SOSP -990 1细胞内表达 ,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征 ,MTT法结果表明caspase -3对SSOP -990 1的细胞生长有抑制作用。结论 重构型caspase-3对成骨肉瘤细胞SOSP -990 1的生长有抑制作用 ,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。
张立红,贾林涛,赵晶,许彦鸣,温伟红,鲍炜,曹云新,苏成芝,王成济,杨安钢[10]（2004）在《重组逆病毒介导的Immunocaspase-3分泌性T细胞对ErbB2阳性乳腺癌的杀伤作用》文中认为将Immunocaspase-3基因转染Jurkat T淋巴细胞, 使其稳定地分泌性表达靶向促凋亡蛋白Immunocaspase-3, 间接免疫荧光检测表明该蛋白可内化进入ErbB2阳性的SKBr3乳腺癌细胞, 细胞计数结果表明乳腺癌细胞的生长和增殖受到明显抑制. 进一步将Immunocaspase-3基因克隆入逆转录病毒载体pLNCX, 转染PA317细胞进行包装, 挑选高滴度的包装细胞株收获病毒. 用收获的病毒感染刺激分裂的人外周血T淋巴细胞, 经筛选后通过尾静脉注射给荷有SKBr3乳腺癌的裸鼠, 观察到肿瘤生长明显受到抑制（抑制率 73.25%）, 裸鼠存活时间较对照组延长80.95%. 免疫组织化学染色结果表明裸鼠肿瘤组织中有Immunocaspase-3蛋白分布, TUNEL检测证实肿瘤细胞发生凋亡. 上述结果表明, T淋巴细胞分泌的Immunocaspase-3在裸鼠体内可以识别和进入ErbB2阳性的乳腺癌细胞, 抑制肿瘤生长.
二、重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用（论文提纲范文）
（1）日本鳗鲡Caspase6基因的克隆和表达分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 Caspase基因在鱼类中的研究进展 |
| 1.2 研究的目的和意义 |
| 1.3 主要研究内容和技术路线 |
| 1.3.1 主要研究内容 |
| 1.3.2 技术路线 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物以及菌株 |
| 2.1.2 仪器设备 |
| 2.1.3 试剂及其试剂配制 |
| 2.1.4 引物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 日本鳗鲡组织总RNA的提取 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成及目的基因片段的获取 |
| 2.2.3 SMART-RACE技术获取目的基因全长 |
| 2.2.4 目的基因片段的割胶纯化 |
| 2.2.5 DNA与质粒载体的连接 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 |
| 2.2.7 感受态细胞的转化及筛选 |
| 2.2.8 质粒插入片段的检测 |
| 2.2.9 重组质粒测序和质粒提取 |
| 2.2.10 细胞转染重组表达载体的构建 |
| 2.2.11 原核重组表达载体的构建及鉴定 |
| 2.2.12 重组蛋白的表达纯化与复性 |
| 2.2.13 利用纯化蛋白制备多克隆抗体 |
| 2.2.14 酶联免疫分析(间接ELISA法) |
| 2.2.15 HEK-293T细胞的复苏与培养 |
| 2.2.16 AjCasp6基因在细胞中的的定位 |
| 2.2.17 日本鳗鲡肝脏和脾脏细胞的培养 |
| 2.2.18 日本鳗鲡细胞系的冻存与复苏 |
| 2.2.19 日本鳗鲡各组织及肝脏和脾脏细胞中表达 |
| 2.2.20 目的基因的生物信息学分析 |
| 2.2.21 数据获取处理与分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 日本鳗鲡各组织总RNA的提取结果 |
| 3.2 RACE-PCR扩增结果 |
| 3.3 AjCasp6基因序列分析 |
| 3.3.1 AjCasp6的cDNA序列分析 |
| 3.3.2 AjCasp6其他物种Caspase6多重比分析 |
| 3.3.3 AjCasp6其他物种Caspase6系统进化树分析 |
| 3.3.4 日本鳗鲡的AjCasp6的空间结构模拟 |
| 3.4 AjCasp6基因在体内和体外表达分析 |
| 3.4.1 AjCasp6基因在日本鳗鲡各组织中表达分析 |
| 3.4.2 AjCasp6基因在肝脏细胞系中的表达变化 |
| 3.5 原核表达及其检测 |
| 3.5.1 原核重组表达载体的构建结果 |
| 3.5.2 重组载体的原核表达结果及检测 |
| 3.6 AjCasp6蛋白的间接ELISA特异性实验结果 |
| 3.7 日本鳗鲡肝脏细胞系的原代培养和传代培养 |
| 3.7.1 日本鳗鲡肝脏细胞系的原代培养 |
| 3.7.2 日本鳗鲡肝脏细胞系的传代培养 |
| 3.8 不同传代比例对JEL增殖曲线的影响及群体倍增时间分析 |
| 3.9 AjCasp6基因在人类293细胞系中的转染和定位 |
| 3.9.1 AjCasp6基因在人类293细胞系中的转染 |
| 3.9.2 AjCasp6基因在人类293细胞系中的亚细胞定位 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论和展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成果情况 |
（2）复方浙贝颗粒联合三苯氧胺对LCC2移植瘤相关蛋白表达影响（论文提纲范文）
| 前言 |
| 1材料与方法 |
| 1.1细胞系和动物 |
| 1.2主要试剂和仪器 |
| 1.3实验方法 |
| 1.4统计方法 |
| 2结果 |
| 2.1肿瘤组织的病理学观察 |
| 2.2实验各组HER-2表达情况 |
| 2.3实验各组GST-π表达情况 |
| 2.4实验各组Caspase3表达情况 |
| 3讨论 |
（3）益气养阴解毒方对小鼠Lewis肺癌细胞增殖及凋亡影响的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验室 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 实验细胞株 |
| 2.4 实验药品 |
| 2.5 实验试剂 |
| 2.6 实验仪器设备 |
| 3 方法 |
| 3.1 含药血清的制备 |
| 3.2 培养基的配制 |
| 3.3 细胞培养与传代 |
| 3.4 细胞冻存与复苏 |
| 3.5 细胞计数与活力测定 |
| 3.6 Lewis 肺癌移植瘤模型的制备 |
| 3.7 C57BL/6 小鼠分组及给药方案 |
| 3.8 移植瘤组织石蜡切片制作 |
| 3.9 倒置显微镜观察各组含药血清体外培养的细胞 |
| 3.10 含药血清对Leiws 肺癌细胞体外增殖抑制实验 |
| 3.11 体内抗肿瘤实验 |
| 3.12 流式细胞术AnnexinV-FITC 双染法检测体外实验细胞凋亡 |
| 3.13 免疫组化法测体外实验细胞凋亡相关蛋白Caspase-3 表达 |
| 3.14 TUNEL 法检测体内实验细胞凋(BIOTIN 标记POD 法) |
| 3.15 免疫组化方法测体内实验细胞凋亡相关蛋白Caspase-3 的表达 |
| 3.16 统计学方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 益气养阴解毒方对Lewis 肺癌增殖抑制作用 |
| 4.1.1 各组含药血清体外处理Lewis 细胞后的生长情况 |
| 4.1.2 MTT 法检测益气养阴解毒方含药血清对体外培LLC 增殖的影响 |
| 4.1.3 小鼠移植瘤生长曲线及抑瘤率 |
| 4.2 益气养阴解毒方对Lewis 肺癌凋亡的影响 |
| 4.2.1 Annexin V 检测细胞凋亡 |
| 4.2.2 体外培养Lewis 细胞Caspase-3 表达 |
| 4.2.3 TUNEL 法检测移植瘤细胞凋亡 |
| 4.2.4 益气养阴解毒方对移植瘤凋亡相关蛋白Caspase-3 表达的影响 |
| 附图 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（4）凋亡基因Caspase3在乳腺癌中的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料: |
| 1.2 方法: |
| 1.2.1 免疫组化技术: |
| 1.2.2 凝胶电泳和Western blot: |
| 1.3 统计学处理: |
| 2 结果 |
| 2.1 Caspase3免疫组化检测结果: |
| 2.2 Caspase3 Western blot检测结果: |
| 3 讨论 |
（5）重构型Caspase-3基因对CNE2细胞的作用（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 基因转染细胞形态观察 |
| 1.2.2 检测重构型人caspase-3(rcaspcase-3)基因的表达 |
| 1.2.3 荧光显微镜观察基因表达 |
| 1.2.4 转染基因后细胞凋亡的电镜检测 |
| 1.2.5 MTT法测定转染Caspase-3对CNE 2细胞的抑制作用 |
| 2 结果 |
| 2.1 p EGFP-Caspase-3表达载体的酶切鉴定 |
| 2.2 重构型人Caspase-3基因的RT-PCR检测 |
| 2.3 Caspase-3转染细胞的荧光显微镜观察 |
| 2.4 电镜观察结果 |
| 2.5 转染基因后对CNE2细胞的抑制MTT法测定结果显示 |
| 3 讨论 |
（6）Probasin启动子介导的靶向凋亡对前列腺癌的杀伤作用（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 一、Probasin 启动子的研究进展 |
| 二、细胞凋亡机制 |
| 三、Caspase 与细胞凋亡 |
| 正文 |
| 第一部分 probasin 启动子的克隆及其活性鉴定 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 probasin 介导的caspase-3 靶向凋亡对前列腺癌细胞系LNCaP 的影响 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历与研究成果 |
| 致谢 |
（7）GFP共表达的重构型Caspase-3基因对Hep-2细胞的作用（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 基因转染细胞形态观察 |
| 1.2.2 检测重构型人Caspase-3基因的表达 |
| 1.2.3 荧光显微镜观察基因表达 |
| 1.2.4 转染Caspase-3基因后细胞凋亡的电镜检测 |
| 1.2.5 MTT法测定转染Caspase-3对Hep-2细胞的抑制作用 |
| 2 结果 |
| 2.1 pEGFP-Caspase-3表达载体的酶切鉴定 |
| 2.2 重构型人Caspase-3基因的RT-PCR检测 |
| 2.3 Caspase-3转染细胞的荧光显微镜观察 |
| 2.4 电镜观察结果 |
| 2.5 转染Caspase-3基因后对Hep-2细胞的抑制 |
| 3 讨论 |
（9）GFP共表达的重构型Caspase-3基因对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（10）重组逆病毒介导的Immunocaspase-3分泌性T细胞对ErbB2阳性乳腺癌的杀伤作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| (ⅰ)实验材料. |
| (ⅱ)细胞的转染及其筛选. |
| (ⅲ)间接免疫荧光检测. |
| (ⅳ)细胞计数分析. |
| (ⅴ)重组逆病毒载体的构建和病毒包装. |
| (ⅵ)逆病毒感染后细胞基因组中Immunocaspase-3基因的检测. |
| (ⅶ)人外周血T淋巴细胞的重组逆病毒感染. |
| (ⅷ)动物实验. |
| (ⅸ)组织化学分析和细胞凋亡检测. |
| 2 结果 |
| 2.1 Immunocaspase-3基因在Jurkat细胞中的稳定分泌表达 |
| 2.2 分泌性表达的Immunocaspase-3蛋白可以识别SKBr3细胞并促进细胞死亡 |
| 2.3 重组逆病毒载体的构建、病毒包装及鉴定 |
| 2.4 Immunocaspase-3基因修饰的T淋巴细胞抑制荷瘤裸鼠SKBr3肿瘤生长 |
| 3 讨论 |
四、重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用（论文参考文献）
- [1]日本鳗鲡Caspase6基因的克隆和表达分析[D]. 张在鹏. 集美大学, 2016(05)
- [2]复方浙贝颗粒联合三苯氧胺对LCC2移植瘤相关蛋白表达影响[J]. 谌海燕,王云涛,韩福旺,丁晓庆,郭明,陈信义. 现代生物医学进展, 2015(24)
- [3]益气养阴解毒方对小鼠Lewis肺癌细胞增殖及凋亡影响的研究[D]. 靳福鹏. 安徽医科大学, 2011(11)
- [4]凋亡基因Caspase3在乳腺癌中的表达及其临床意义[J]. 黄凌燕,张建中,曲娜. 宁夏医学杂志, 2009(10)
- [5]重构型Caspase-3基因对CNE2细胞的作用[J]. 王晓侠,姚小宝,嵇宪生,朱宏亮. 南方医科大学学报, 2009(01)
- [6]Probasin启动子介导的靶向凋亡对前列腺癌的杀伤作用[D]. 张翔. 第四军医大学, 2007(03)
- [7]GFP共表达的重构型Caspase-3基因对Hep-2细胞的作用[J]. 余晓林,刘红,陈万平,程鹏远. 第四军医大学学报, 2005(21)
- [8]三种重构型人caspase-8促宫颈癌HeLa细胞凋亡的效率[J]. 桂俊豪,许彦鸣,于翠娟,赵晶,贾林涛,王成济,杨安钢,仇东辉,余伍忠,何江. 癌症, 2005(02)
- [9]GFP共表达的重构型Caspase-3基因对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用[J]. 鱼兵,范清宇,闫露,龙华,文艳华. 中国医师杂志, 2004(12)
- [10]重组逆病毒介导的Immunocaspase-3分泌性T细胞对ErbB2阳性乳腺癌的杀伤作用[J]. 张立红,贾林涛,赵晶,许彦鸣,温伟红,鲍炜,曹云新,苏成芝,王成济,杨安钢. 科学通报, 2004(11)
标签：细胞凋亡论文; 启动子论文; caspase-3论文; 细胞转染论文; 基因合成论文;